免疫組化在肺小細胞癌活檢診斷中的作用

（遼寧省遼陽市中心醫院，遼寧 遼陽 111000）

現階段，肺癌病發率呈現出逐漸增長的趨勢，為患者身心帶來極大折磨，嚴重影響了患者生活質量。肺癌作為惡性腫瘤，在免疫表型、分子遺傳學水平、細胞學以及組織學等方面有著異質性，通常分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌。結合肺癌患者總數進行分析，75%以上患者屬于非小細胞肺癌，僅有25%左右的患者是小細胞肺癌類型[1]。基于此，本文隨機抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺與支氣管鏡活檢患者作為本次報道的研究對象，分析免疫組化在肺小細胞癌活檢診斷中的作用，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：隨機抽取我院2016年～2017年收治的50例肺穿刺與支氣管鏡活檢患者作為本次報道的研究對象，其中，男性患者29例、女性患者21例，患者年齡35～73周歲、平均年齡是（56.37±5.63）周歲。結合病理組織形態學進行分析，全體患者均確診肺癌，傾向肺小細胞癌，50例患者進行Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA免疫組化診斷。

1.2 方法：病理組織學檢查，標本是10%中性福爾馬林固定，通過常規脫水、切片、石蠟包埋、HE染色，采取顯微鏡觀察，按照形態學特征完成診斷。免疫組化檢測，認真遵循試劑盒的操作要求、規范說明展開具體工作，使用PBS緩沖液、正常性肺組織切片當做陰性組以及陽性組，主要檢測項目為p63、TTF-1、p40，記錄相關信息[2]。

1.3 評價標準：檢驗判定的方式[3]：若p63、TTF-1、p40染色呈棕黃色、棕褐色，判定陽性。根據陽性細胞占比（%）將結果細分成以下情況：第一，陰性（無陽性細胞）；第二，+（陽性細胞≤10%）；第三，++（陽性細胞維持于11%-50%）；第四，+++（陽性細胞維持于51%～75%）；第五，++++（陽性細胞≥76%）。

1.4 統計學方法：采用統計學軟件SPSS2.0對50例肺癌患者的數據進行統計和分析，計數資料（例數比率），當P＜0.05時差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 病理組織學結果：50例確診為肺癌的患者中3例非何杰金氏淋巴瘤、9例低分化鱗癌、38例小細胞肺癌。小細胞肺癌的鏡下狀態為：癌細胞呈現巢狀、小梁狀、片狀分布，其細胞核為卵圓形、梭形、圓形，核染色質呈微細顆粒狀且染色相對較深，核仁不明顯或嚴重缺乏，細胞分界模糊以及胞質稀少。低分化鱗癌的鏡下狀態為：癌細胞呈現出巢狀、片狀分布，其細胞核為卵圓形，泡狀核或染色質過粗，核仁相對明顯但是胞質過少；非何杰金氏淋巴瘤的鏡下狀態為：腫瘤細胞整體排列過于分散，細胞核為卵圓形、圓形，染色質過粗。

2.2 免疫組化結果：50例確診為肺癌的患者中小細胞肺癌表達率高達100%（50/50）、CgA表達率64%（32/50）、CK5/6表達率6%（3/50）、TTF-1表達率74%（37/50）、Syn表達率86%（43/50），LCA、34βE12、p63均是陰性表達。2例非何杰金氏淋巴瘤中Syn灶狀區陽性表達、LCA陽性表達，Sclc、TTF-1、CgA、34βE12、p63陰性表達；3例低分化鱗癌中CK5/6、34βE12、p63陽性表達，1例Syn灶狀區陽性表達，TTF-1、LCA、CgA、Sclc陰性表達。

3 討 論

近年來，醫學技術日漸成熟，腫瘤學、分子生物學等研究獲得極大進步，針對不同組織學類型和腫瘤分子改變出現差異化病理類型、治療。結合臨床實際情況進行分析，小細胞肺癌診斷相對復雜，非常容易被誤診成非小細胞肺癌。所以，我們必須最大程度上提高病理準確性，現行診斷方法為活檢檢測技術，可是正式檢測環節使用的樣本量過少并且會受到人工擠壓，造成細胞變性，降低鏡下組織結構分辨清晰程度，最終出現誤診[4]。

通過免疫組化方式進行肺小細胞癌鑒別，相較于其他的檢測方式有著更明顯的優勢。借助于不同酶系統來催化差異化顯色底物，進而呈現出對應的顏色，完成同張組織切片中不同抗原的表達。免疫組化有著實用性強、操作便捷、特異性高以及靈敏度高等特征，通常情況下，使用這一方式需要注意以下兩個問題：一是，為防止出現交叉反應，應該正確篩選不同酶；二是，盡量選擇色彩對比更加明顯的色組當做顯色底物[5]。此外，實際操作階段需要嚴謹把控具體環節，多角度規避影響最終檢測結果的因素，輔助醫師、患者做出正確的治療判斷。免疫組化雙染時需要遵循相關操作原則：陽性表達部位可以是細胞核、細胞質，根據抗體、細胞膜表達的不同陽性部位，若同步執行2～3種抗體（有著直標或者間標），率先進行間標抗體，然后才是直標抗體，重視抗原性強弱程度，根據順序從弱至強展開標記。

4 免疫組化技術分析

4.1 免疫組化方法：首先，腫瘤組織起源的鑒別診斷。由于免疫組化作為復雜性生物技術，對于組織起源確定等方面的應用有著較大前景[8]。針對各抗體標志物有著對應的染色方式，其目的就是可以明確各類組織的起源以及判斷組織內是否存有特異抗原；其次，腫瘤生長的活躍程度、微小轉移灶判斷。檢測激素受體為臨床治療提供參考依據[9]，以乳腺癌細胞為例，雌激素陽性表達，患者需要給予三苯氧胺治療，發揮出封閉乳腺癌細胞的雌激素受體效能；再次，進行激素類細胞定位、定性的檢測，了解內分泌細胞類型與功能狀況[9]，如類癌、垂體瘤以及胰島細胞瘤等；最后，按照陽性標記顯色程度劃分成棕黑色（強陽性）、棕黃色（中等強度）以及淡黃色（弱陽性）。結果判斷環節，前兩個有著較強的意義，能夠作為檢測判讀的依據。除卻標本處理與方法學等因素，可以和細胞表達輕度異常，以及部分細胞攝取周圍組織抗原等原因[10]。結合章俊強等[11]研究厄洛替尼治療表皮生長因子受體突變型小細胞肺癌1例的報告展開分析，免疫組化標記過程中，陽性標記的細胞學特征是把抗原在細胞內定位情況、分布情況顯現出來，擬標記細胞應該將診斷結果的陽性細胞作為前提條件，實現陽性表達需要在細胞特定的抗原部位，反之不可以把陽性表達當做判斷的主要依據。

4.2 免疫組化結果判讀原則：第一，設置染色對照。每個染色都應該以特定性陽性與陰性對照當做基礎，才可以正確判讀出染色結果。如果沒有相關的陽性對照，則無法做出準確的陰性結果。同樣，如果沒有相關的陰性對照，也難以判斷出準確的陽性結果[12]。所以，免疫組化染色沒有對照，即便是做出判斷其可靠性也相對較低；第二，抗原表達應該在特定的部位。李彥瑋等[13]中國人群肺癌Napsin A蛋白表達的Meta分析提出陽性表達應該在細胞與組織的特定抗原部位才可以視作陽性。如LCA在細胞膜中，而不是在抗原所處部位的陽性表達不能夠判斷成陽性；第三，陰性結果不可以視作抗原不表達。熊焰等[14]學者在非小細胞肺癌磷脂酰肌醇3激酶p110α蛋白高表達的臨床意義及機制的研究報道中提出了陰性結果不可以認為有著否定意義，對于陽性表達可以分為多少或者強弱，即便是少數細胞呈陽性并且在抗原所在部位，也應該視作陽性表達，不可以認為單一細胞的陽性不能夠當做陽性；第四，免疫組化和HE切片診斷需要把HE切片診斷當做主要參考。若是發生HE切片、免疫組化的診斷結果不一致問題，醫護人員需要綜合參考影像學、實驗室結果以及患者臨床資料，不可以片面采取免疫組化的診斷結果取代HE切片的診斷結果[15]；第五，假陰性結果原因。因為組織自溶和抗原擴散，使得抗原消失，尤其是長期固定標本里因為抗原漏出將會造成假陰性結果，所以應該采用新鮮固定標本[16]。抗體失去活性、抗體自身敏感度不達標或者濃度不足也會引起假陰性，再加上人員操作不當，洗脫不足、溫度過高或者反應時間不足更是加重了假陰性結果出現概率。此外，細胞、組織的抗原含量相對較低，如果采取直接檢測法將會呈現出陰性，而選擇間接檢測法則呈現出陽性；第六，假陽性結果原因。采用抗體同其他無關抗原出現交叉反應，其特異性較差，尤其是使用多克隆抗血清后更容易發生。這種情況在范軍振等[17]免疫組織化學法在非小細胞肺癌EML4-ALK融合基因檢測中的應用中也發生過抗體濃度相對較高、染色環節切片過于干燥，使得抗體同組織出現了非特異性組合。同時，細胞和組織的生物素、內源性過氧物酶以及堿性磷酸酶出現了非特異性的顯色操作。

總而言之，肺穿刺與支氣管鏡活檢單純由形態學角度進行肺小細胞癌的診斷過于片面，風險性過高，其需要同不典型類癌、淋巴瘤以及低分化鱗癌進行鑒別并且上述四種疾病治療方案不盡相同。所以免疫組化標志物Syn、ki67、CgA、34βE12、P63、CK5/6、LCA在鑒別診斷以及診斷中有著十分重要的作用。