兒童血清25(OH)D水平與其流感病毒感染之間的相關性

吳碧濤，任艷，蔣文強

綿陽市中心醫(yī)院檢驗科，四川 綿陽 621000

流感是由流感病毒感染引起的急性呼吸道疾病，是人類面臨的主要公共衛(wèi)生健康問題之一，可引起暴發(fā)流行。流感具有高度的傳染性，19～20世紀曾造成致命的流行病，并導致全球數百人死亡[1]。盡管所有年齡段都可能因流感發(fā)生嚴重疾病，但兒童不成比例地承擔著流感病毒感染的高風險，兒童的流感感染率始終最高[2-3]。全球每年約有87 000名5歲以下兒童因流感住院[4]。NAIR等[5]的薈萃分析估計，每年有28 000～111 500例5歲以下兒童的死亡可歸因于流感相關原因。研究發(fā)現，維生素D除參與鈣磷代謝、維持骨礦鹽平衡外，還具有廣泛的骨骼外效應，尤其是其對免疫系統(tǒng)的作用越來越受到重視。維生素D可通過促進抗菌肽的表達，影響細胞因子分泌等調節(jié)免疫系統(tǒng)的功能[6]，通過對免疫系統(tǒng)的調節(jié)進而對感染性疾病產生影響。本文擬探討0～12歲兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間的關系。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 回顧性分析2019年1月1日至3月31日于綿陽市中心醫(yī)院門診和住院診治的741例兒童(≤12歲)的臨床及實驗室檢查資料。所有患兒均行流感病毒抗原篩查，并于篩查前后一周內做血清25(OH)D水平檢測。

1.2 試劑和儀器 甲型/乙型流感病毒抗原檢測試劑盒(膠體金法)由Princeton Biomeditech Corporation提供；25(OH)D檢測試劑盒由山東濟南英盛生物技術有限公司提供，檢測儀器為API3200 MDTMLC/MS/MSSystem。

1.3 檢測方法

1.3.1 流感病毒抗原檢測 通過化學試劑提取樣本中病毒抗原，再用固相免疫層析法檢測甲型和/乙型流感病毒抗原。收集的鼻咽拭子樣本放置于裝有提取液的提取孔中1 min，裂解病毒并釋放出抗原，將測試板豎直并輕拍，再平放測試板，使提取液孔中的提取液與染料墊上膠體金標記的凍干抗體結合，并在虹吸作用下沿著檢測膜移動，10～15 min內讀取結果，在第15 min確認陰性結果。

1.3.2 血清25(OH)D檢測 按照現行靜脈血采集方法空腹采血2 mL，將血液注入促凝管中，3 000 r/min離心15 min，取上清800μL～1.5 mL離心管中，并加入8μL保護劑，充分混勻后冷凍(-20℃或以下)保存，由專業(yè)人員采用高效液相色譜串聯(lián)質譜法集中檢測血清25(OH)D，嚴格按照試劑說明書及儀器SOP操作。參照2018年中華醫(yī)學會骨質疏松和骨礦鹽疾病分會《維生素D及其類似物的臨床應用共識》[7]，血清25(OH)D＜20 ng/mL定義為缺乏，20～30 ng/mL定義為不足，≥30 ng/mL定義為適宜。

1.4 實驗分組 按年齡將患兒分為0～1歲組、1～3歲組、3～6歲組及6～12歲組；按性別不同劃分為男性組與女性組；按患兒血清25(OH)D水平不同分為25(OH)D缺乏組、不足組、適宜組；按流感病毒抗原檢測結果分為陽性與陰性組。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學處理。經Q-Q概率圖分析顯示，計量資料呈正態(tài)分布，以均數±標準差(x-±s)表示，兩組均數比較采用student t檢驗；計數資料以百分率(%)表示，率的比較采用χ2檢驗。兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關性采用Spearman相關檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1不同性別及年齡兒童流感病毒感染情況 共計檢測咽拭子樣本741份，其中，流感病毒感染陽性樣本263例(包括Flu A陽性197例及Flu B陽性66例)，陽性率為35.49%。男性患兒共408例，其中陽性樣本154例，陽性率為37.75%；女性患兒共333例，其中陽性樣本109例，陽性率為32.73%。經χ2檢驗，男性與女性患兒流感病毒感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.01，P=0.16)。對年齡進行分層分析后發(fā)現：0～1歲組312例患兒，流感病毒感染陽性84例，陽性率為26.92%；1～3歲組230例患兒，流感病毒感染陽性90例，陽性率為39.13%；＞3～6歲組128例患兒，流感病毒感染陽性59例，陽性率為46.09%；＞6～12歲組71例患兒，流感病毒感染陽性30例，陽性率為42.25%。經χ2檢驗，各年齡組患兒流感病毒感染陽性率比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(χ2=19.04，P＜0.01)，其中，3～6歲組患兒流感病毒感染陽性率最高，而0～1歲組患兒流感病毒感染陽性率最低。

2.2 流感病毒感染陽性與陰性組間血清25(OH)D水平比較 流感病毒感染陰性組血清25(OH)D平均水平為(28.40±10.95)ng/mL，感染陽性組血清25(OH)D平均水平為(27.32±9.01)ng/mL，差異無統(tǒng)計學意義(t=1.36，P=0.18)。

2.3 不同25(OH)D水平組間流感病毒感染情況比較 血清25(OH)D水平缺乏組156例患兒，流感病毒感染陽性52例，陽性率為33.33%；25(OH)D不足組295例患兒，流感病毒感染陽性120例，陽性率為40.40%；25(OH)D適宜組288例患兒，流感病毒感染陽性91例，陽性率為31.60%。各組患兒感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.36，P=0.07)。

2.4 兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關性 采用Spearman相關檢驗，結果顯示患兒流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間無相關性(R=0.039，P=0.287)。

3 討論

兒童是流感的高發(fā)人群及重癥病例的高危人群，是流感流行的前哨[1]，對兒童進行流感監(jiān)測顯得尤為重要。流感的確診需要相對特異的病原學檢測，如病毒培養(yǎng)、免疫熒光檢測、核酸檢測、血清學檢測和抗原快速檢測等。本研究采用膠體金法對流感病毒抗原進行檢測，該方法簡便快速、適合臨床篩查。在741份樣本中共檢出流感病毒感染陽性樣本263份，陽性率為35.49%，男性組與女性組患兒流感病毒感染陽性率差異無統(tǒng)計學意義，這與李翠珍等[8]的報道一致。不同年齡組患兒流感病毒感染陽性率差異有統(tǒng)計學意義，陽性率最高的為3～6歲組，最低的為0～1歲組。其原因可能為：對于3～6歲階段的兒童，其免疫力尚未健全，并且活動范圍廣、共用被病毒污染的用具的機會多[9]；而對0～1歲組患兒，大多通過母乳從母體處獲得保護性免疫，且多無群體生活，感染的機會相對減少，故該年齡段嬰幼兒流感病毒感染陽性率最低，這也與彭質斌等[10]報道的＜6月齡是流感病毒感染的保護性因素的結論相吻合。

維生素D(VitD)是一種常見的脂溶性類固醇激素。循環(huán)中VitD首先在肝臟被羥化為25-羥基維生素D。因其含量豐富、半衰期長、性質穩(wěn)定，25(OH)D常被用作評價體內VitD營養(yǎng)狀態(tài)的指標。本研究采用的高效液相色譜串聯(lián)質譜法(HPLC-MS/MS)，具有較高的特異性及靈敏度，被認為是目前檢測血清25(OH)D的“金標準”方法。維生素D除經典的骨骼系統(tǒng)作用外，還與自身免疫性疾病、感染性疾病、心血管疾病、神經精神疾病甚至腫瘤等密切相關[11]，并參與多種免疫介導的炎癥反應過程[12]。有研究稱兒童期哮喘、毛細支氣管炎、肺結核等的發(fā)病均與維生素D相關，妊娠期補充維生素D可減少兒童呼吸道感染的發(fā)生[13]。張曉丹等[6]認為維生素D缺乏的人群更易發(fā)生感染，而補充維生素D具有一定的輔助抗感染作用，主要包括急性呼吸道感染、皮膚軟組織感染及敗血癥、細菌性陰道炎等，維生素D可能通過促進抗菌肽的產生，上調維生素D受體的mRNA表達，影響免疫調節(jié)，影響細菌細胞膜通透性來發(fā)揮輔助抗感染作用[6]。在本研究中，流感病毒感染陽性組與陰性組患兒血清25(OH)D水平差異并無統(tǒng)計學意義，同時，血清25(OH)D缺乏組、不足組以及適宜組患兒的流感病毒感染陽性率差異也無統(tǒng)計學意義，提示兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間可能并無相關性。回顧文獻后發(fā)現，2016年一項囊括了來自高、中、低等收入國家的3 198名5歲內兒童的大型臨床試驗表明[14]：未找到補充維生素D后兒童肺炎或腹瀉的感染發(fā)生率有所下降的相關證據。在一項動物實驗中，GUI等[15]的研究顯示1,25(OH)2D治療H9N2感染小鼠時對固有免疫產生負性調控，尤其是在疾病的晚期階段。2017年，AGLIPAY等[16]的研究發(fā)現在1～5歲健康兒童中，每日補充高劑量維生素D與常規(guī)劑量補充相比，并未減少兒童患上呼吸道感染的風險，其發(fā)現不支持給予兒童高劑量維生素D補充劑以預防病毒性上呼吸道感染的觀點。

由此可見，兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染的關系尚存爭議和疑問，基于維生素D作用的廣譜性，不排除維生素D在預防或治療流感中發(fā)揮積極作用的可能性。我們的研究發(fā)現兒童血清25(OH)D水平與其流感病毒感染無明顯相關性，其可能原因有：所選樣本的數量、研究地域、季節(jié)、人種等方面存在局限和偏倚。因此，今后尚需針對更廣泛兒童群體的研究，進一步探討兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染之間的關系。