一例抗-G抗體引起交叉配血不合原因分析

劉鑫路，周 秀，吳運萍

1.連云港市第二人民醫院輸血科，江蘇 連云港 222002；2.天津市武警醫療中心輸血科，天津 300000

抗-G抗體通常只與帶有D或/和C抗原紅細胞反應，也被稱為抗-DC，抗-G常伴隨抗-D出現。患兒出生已有27天，血清中抗-G抗體已減弱，最開始只檢出抗-D抗體，選用ABO同型RhD陰性血進行交叉配血時，主側發生凝集反應考慮還存在其他同種抗體，分別用PEG增強方法、酶處理試劑紅細胞方法后檢出抗-D抗體和抗-C抗體，經用兩次吸收方法鑒定為抗-D合并抗-G，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

患者為新生兒，女，27天，末次輸血時間2019年11月15日，Hb：125g/L，為糾正貧血，申請輸血。

1.2 儀器與試劑

抗-A，抗-B，抗-D（IgM），抗-D（IgG），抗-C，抗-c，抗-E，抗-e（批 號： 20171227， 20181810，20183001，20180626，20183101，20183201，20183301）；抗球蛋白（IgG、C3d）試劑（批號：20185001）；ABO細胞及篩選細胞（批號：20195326，20197031）；聚凝胺試劑（批號：20197502）；均由上海市血液生物醫藥有限責任公司提供。酸釋放劑（批號：20180423）由上海申型醫學科技有限公司提供。抗-D（IgM+IgG）（批號：8000249683）；進口譜細胞（批號：8000260167）來自荷蘭sanquin公司。抗人球蛋白卡（批號：50531.38.18）購自DiaMed公司。

1.3 方法

1.3.1 血型鑒定：采用鹽水法按照文獻［1］操作。

1.3.2 不規則抗體篩查及鑒定：抗體篩查采用鹽水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法（凝膠卡）按生產廠家使用說明書進行操作和判讀，設置自身對照，根據與進口譜紅細胞的反應格局判定抗體特異性。

1.3.3 抗體效價檢測：根據血清稀釋度標記10支試管(如1，2，4等)。1代表1體積未稀釋血清，2代表1體積血清被稀釋至2體積。除第1管，其余每支試管中加50 ul生理鹽水。前兩管(1和2)中，各加50 ul待檢血清，用移液槍頭吹吸、混勻2中的液體數次，轉移50 ul至下一支試管，重復相同的步驟，直至完成所有倍比稀釋。每管加50 ul，2%～3%紅細胞懸液，充分混勻，37℃孵育30 min，以1 000離心15 s觀察記錄結果。

1.3.4 PEG增強方法做抗體鑒定：依據進口譜細胞的數量取16只潔凈試管，分別標記序號，另取一支潔凈試管記為自身對照。加2滴待檢血清，4滴20%PEG，加入1滴2%～5%的紅細胞懸液。37℃孵育15 min。用生理鹽水洗滌紅細胞3次，棄上清液。加入2滴抗人球蛋白1 g G試劑(具體請參照說明書)混勻，1 000 g離心15 s后觀察結果。

1.3.5 酶處理試劑紅細胞方法做抗體鑒定：將木瓜酶稀釋液轉移至粉劑瓶中，充分溶解后，按日常工作量用潔凈試管分裝成數個小包裝，置-20℃凍存。每次可用1個小包裝，當天剩余液體應棄去(酶的實際用量和孵育時間遵照試劑說明書)。取1體積進口譜細胞和自身細胞，用生理鹽水洗滌3遍，最后遍棄去上清液，留紅細胞沉淀;輕輕搖散紅細胞沉淀，加入1體積步驟一配制的酶液。經37℃孵育15 min。用大量生理鹽水洗滌酶處理過的紅細胞3次，然后制成2%～3%的紅細胞生理鹽水懸液。取17支潔凈試管分別做好標記。每支試管中加入2滴患者血清(或血漿)。分別于對應試管加入1滴對應的酶處理過的2%～5%的進口譜細胞和自身紅細胞，混勻。經37℃，孵育1 min。經1 000 g離心15 s，觀察有無凝集和溶血，記錄結果。如有凝集反應則為陽性結果，不必進行以下程序。如未觀察到凝集反應，應繼續進行以下程序。用生理鹽水洗滌4遍，最后一遍徹底棄去上清液。加入抗人球蛋白試劑(劑量參照試劑說明書)，混勻。經1 000 g離心15 s，觀察反應結果。如為陰性反應，則加IgG致敏的紅細胞進行驗證。

1.3.6 吸收放散試驗及抗體效價測定：吸收實驗操作按照文獻［2］操作。酸放散試驗按照生產廠家使用說明書進行操作，放散液與標準紅細胞作用離心后觀察結果。

1.3.7 直接抗人球蛋白實驗：按照文獻［3］直接Coombs’實驗試管法標準操作規程操作。

2 結果

2.1 ABO和Rh血型

患兒血型為O型，Rh陰性，經Rh血型確認試驗后仍為陰性。紅細胞直接抗人球蛋白試驗陰性，血清抗體篩查試驗陽性，Rh血型其他因子為抗-c和抗-e陽性，因此Rh表型為dce/dce。

2.2 譜細胞反應格局

為明確血清中的不規則抗體，應用16只一組的進口譜細胞對抗體進行鑒定，初步分析血清中含有抗-C+D抗體，效價為32。

2.3 直抗結果

患兒直接抗人球蛋白實驗陰性。

2.4 交叉配血結果

選擇三例O型dCe/dCe獻血者和三例dce/dce獻血者紅細胞與患者的血清進行交叉配血主側反應，結果顯示該患者血清能凝集dCe/dCe獻血者的紅細胞，而與dce/dce獻血者紅細胞沒有凝集，說明該患者含有抗-C抗體。我們選用O型Rh分型dce/dce獻血者紅細胞0.5單位治療，效果良好。

2.5 抗-G抗體鑒定

患兒父親Rh分型為DcE/dce，患兒母親血清（O型Rh分型dce/dce）與患兒血型分型一致，患兒母親正常分娩不能產生抗-C抗體。故患兒血清可能存在抗-G抗體而不是抗-C抗體。我們用血清分別Dce/Dce和dCe/dCe壓積紅細胞做吸收試驗，結果用和Dce/Dce壓積紅細胞吸收后的血清不能與dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發生凝集。再將用和Dce/Dce壓積紅細胞進行酸放散試驗，放散液仍可以和dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發生凝集。說明血清中不含有單獨的抗-C抗體。結果用和dCe/dCe和dCe/dCe紅細胞吸收后的血清不能與dCe/dCe紅細胞發生凝集，但仍能與Dce/Dce紅細胞發生凝集。再將用和dCe/dCe和dCe/dCe壓積紅細胞進行酸放散試驗，放散液仍可以和dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發生凝集。說明血清中含有單獨的抗-D抗體。因此可以證實患兒血清中為-D+G抗體［4］。

3 結論

一般情況下，抗-G只與帶有D或/和C抗原的紅細胞反應，RHD和RHCE的C等位基因所編碼的Ser103是G活性的關鍵，一般帶有D和/或C紅細胞均為G陽性［5］。抗-G可以應用rG/dce或r/G/dce細胞經吸收/放散實驗分離出來，但這類紅細胞非常少見和難以得到［6］。本例患兒我們采用Dce/Dce和dCe/dCe壓積紅細胞進行兩次吸收放散，確定患兒血清中的抗體為-D+G抗體。本例患兒母親之前既有輸血史又有妊娠史，而妊娠和輸血的同種免疫是Rh同種抗體產生的主要原因。本例患兒母親產生-D+G抗體與輸血史及妊娠史有關。在妊娠期間由于反復的“經胎盤出血”，胎兒紅細胞進入母體，刺激母體內產生與胎兒紅細胞不配合的IgG性質的血型抗體，這些抗體可通過胎盤屏障回到胎兒體內，最終導致胎兒紅細胞溶血被破壞。若是受血者或者是孕婦血漿中存在Rh抗體，當與含相應抗原的血液相遇后，便會導致嚴重的輸血反應或者新生兒溶血病的發生。由于本例患兒ABO血型及Rh分型與母親相同，母親體內Rh血型抗體雖然通過胎盤屏障回到胎兒體內但并不會導致新生兒溶血的發生。因此患兒貧血可能由于其他疾病原因造成的。由于患兒血清中含有Rh血型抗體，在輸血時要選擇不含對應抗原的紅細胞進行輸注。如果只輸注RhD陰性血，仍有可能因為抗原抗體相遇后會造成溶血反應，影響輸血效果。從免疫血液學角度看，Rh血型系統最主要的5個抗原中，免疫原性強弱順序依次為D，E，C，c，e，這5種抗原與相應抗體結合均能引起嚴重的血液免疫學反應，如溶血性輸血反應、新生兒溶血病(HDN)和自身免疫性溶血性貧血等。如今人們對于RhD抗原的認識已較充分，其余抗原則重視程度不高。在RhD抗原陰性患者，多次妊娠育齡期婦女，需要多次輸血治療的患者要常規檢測RhC、Rhc、RhE、Rhe抗原，進行Rh血型系統分型，進行ABO血型系統與Rh血型系統同型輸注，減少因Rh血型系統不同型輸注引起的Rh血型系統抗體的產生率，減少由于回憶性免疫應答引起的遲發性溶血反應;避免臨床輸血中由于Rh血型系統抗體產生引起的交叉配血不合貽誤搶救輸血時機，及時挽救患者生命。因此在臨床單獨常規檢測Rh血型系統RhD抗原是不能滿足臨床合理安全輸血要求的。而對Rh主要的五個抗原常規進行檢測，并給與Rh分型進行同型血液輸注，可有效避免因輸血而產生Rh同種抗體，減少輸血風險，這也是未來精準輸血的要求。