豬肌內(nèi)脂肪前體細胞分離培養(yǎng)和成脂誘導分化研究

孟金花，蔡剛志，肖紅衛(wèi)，華再東，畢延震，鄭新民，任紅艷

（湖北省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，動物胚胎工程及分子育種湖北省重點實驗室，湖北武漢 430064）

肌內(nèi)脂肪（Intramuscular Fat，IMF）是影響豬肉質(zhì)性狀的關(guān)鍵因素，研究豬肌內(nèi)脂肪合成、代謝及調(diào)控規(guī)律對于優(yōu)化畜禽體脂比例、改良肉質(zhì)品質(zhì)具有重要意義，而深入其代謝規(guī)律最為便利快捷的方式是借助于體外分離培養(yǎng)的細胞。脂肪前體細胞最早在1964 年從大鼠的脂肪組織中分離獲得。隨后科研人員相繼建立了3T3-L1、3T3-F442A、SVF 等脂肪前體細胞[1-3]。IMF是機體發(fā)育最晚的脂肪，具備特殊的增殖和分化方式[4]，因此體外研究培養(yǎng)的肌內(nèi)脂肪細胞應(yīng)來源于肌肉內(nèi)而不是脂肪組織中的脂肪細胞，這樣才可以在研究中更為真實地反映肌內(nèi)脂肪的分化調(diào)控特點，而細胞系的培養(yǎng)通常不能代表在體情況[5-6]。因此有必要建立直接來自于動物體內(nèi)的細胞培養(yǎng)體系，這樣不僅可以直觀地反映肌內(nèi)脂肪的發(fā)生和增生的完整過程，而且還能較為精準地研究各種因素對這個過程的調(diào)控機制。

脂肪前體細胞原代培養(yǎng)體系已成功地在人、鼠、牛、豬等動物體中構(gòu)建[7-11]。本實驗在總結(jié)前期相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，進一步優(yōu)化操作條件，使用膠原酶消化法成功建立了豬的肌內(nèi)脂肪前體細胞體外分離培養(yǎng)方法。在細胞分離操作過程中，對組織的活力、酶消化的時間和溫度、操作過程的用時、離心力大小及離心次數(shù)等方面進行了優(yōu)化，建立了穩(wěn)定的原代豬肌內(nèi)脂肪前體細胞分離方法，為豬脂肪沉積相關(guān)基因的功能研究提供了細胞素材。……