殼聚糖基白芷馬卡列丙美白抗炎膜劑的研制

唐南陽(yáng)，姜亞潔，朱家歡，周 露，蔡 偉，寧 倩

(湖南醫(yī)藥學(xué)院 藥學(xué)院，湖南 懷化 418000)

膜劑作為美容保養(yǎng)品的載體，一直被廣泛使用，近年來(lái)，加有中藥成分的膜劑由于其來(lái)源天然、副作用小、親和皮膚等優(yōu)點(diǎn)而受到人們的青睞。白芷，Angelica dahurica Benth，為傘形科植物白芷或杭白芷的干燥根，具有美白之功效[1-2]。研究表明，其主要成分中的香豆素類化合物對(duì)酪氨酸酶具有抑制作用，能有效減少黑色素生成，因而具有美白的功效[3-4]。馬卡列丙，Duhaldea nervosa，又稱毛秀才，是菊科旋覆花屬顯脈旋覆花的全草，其水提物具有消炎鎮(zhèn)痛等作用[5-6]。殼聚糖是目前高級(jí)藥妝所廣泛使用的成分，用于醫(yī)學(xué)美容能起到天然抗生素的作用，可用于對(duì)抗炎癥，能快速修復(fù)表皮屏障[7-8]。本文選用生物可降解的殼聚糖為成膜材料，使膜劑具有高持水性以及良好的濕態(tài)柔韌性。通過(guò)不斷試驗(yàn)，最終將白芷香豆素類美白成分以及馬卡列丙提取物加入至含有殼聚糖的最優(yōu)膜劑基質(zhì)中，制成淡黃色乳膏狀、親和皮膚的美白抗炎膜劑。

1 儀器與試劑

儀器：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；多功能酶標(biāo)儀，上海創(chuàng)萌生物科技有限公司；低速離心機(jī)，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司；超高速低溫離心機(jī)，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司。

試劑：殼聚糖；檸檬酸鈉；大豆卵磷脂；硬脂酸；單甘酯；蜂蠟；凡士林；甘油；月桂醇硫酸鈉；鄰苯二酚；聚乙烯吡咯烷酮；硫酸銨；均來(lái)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

白芷來(lái)自懷仁博世康中醫(yī)醫(yī)院，馬卡列丙提取物由蔡偉教授課題組友情提供，經(jīng)鑒定，均為正品。

2 實(shí)驗(yàn)

2.1 白芷香豆素以及馬卡列丙的提取

中藥白芷飲片粉碎，加入8倍量75%的乙醇，提取3次，每次3 h[9]，收集提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去多余溶劑，后隔水加熱蒸干。本文采用水提法得馬卡列丙提取物。

2.2 工藝流程及方案優(yōu)化

根據(jù)表1初始用量配比所制膜劑基質(zhì)，流動(dòng)性較差，不易涂展，且較為油膩。為改善膜劑基質(zhì)性能，后續(xù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)采用大豆卵磷脂代替花生油和硬脂酸以改善膜劑基質(zhì)的流動(dòng)性，但效果不佳。隨后，逐步提高乳化劑用量，減少單甘酯的用量，膜劑基質(zhì)流動(dòng)性有所好轉(zhuǎn)，且更易涂展；為解決油膩的問(wèn)題，將大豆卵磷脂的量加至1.5 g，得到淡黃色乳膏狀膜劑基質(zhì)，涂抹無(wú)顆粒感，但油膩效果未完全改善；實(shí)驗(yàn)所用凡士林的量減少至1.5 g后，所制基質(zhì)流動(dòng)性較好，質(zhì)感較為輕薄，但存在顆粒感。優(yōu)化過(guò)程具體用量配比見(jiàn)表2。最終減少大豆卵磷脂所占比例，增加純化水的用量，制得流動(dòng)性較好、質(zhì)地輕薄、易于涂展、無(wú)顆粒感的膜劑基質(zhì)(見(jiàn)表3)。

表1 膜劑基質(zhì)初始用量配比

制作工藝：

(1)將A相于80℃水浴鍋中加熱溶解，保溫。

(2)提前將殼聚糖溶脹，攪拌溶解，放置在水浴鍋上，再加入B相其他物質(zhì)混勻，保溫。

(3)在80℃條件下，將A相緩慢倒入B相，同時(shí)沿同一方向攪拌，后移下水浴鍋，攪拌至冷卻，即得。

表2 膜劑基質(zhì)用量配比優(yōu)化

表3 膜劑基質(zhì)最終用量配比

制作工藝：稱取凡士林1.5 g、蜂蠟0.8 g、大豆卵磷脂1.3 g、單甘酯2.0 g于80℃的水浴鍋中加熱溶解制得A相；于10 mL純化水中加入0.1 g檸檬酸鈉加熱攪拌溶解，后加入0.9 g殼聚糖提前溶脹，攪拌溶解后依次加入5.3 mL甘油、6 mL純化水、適量白芷提取物、0.03 g馬卡列丙多糖、0.8 g月桂醇硫酸鈉制得B相。將A相緩慢加入B相中并不斷攪拌至冷卻，即得。

2.3 白芷、馬卡列丙膜劑的性能檢測(cè)

2.3.1 感官評(píng)價(jià)

根據(jù)不同膜劑基質(zhì)的用量配比，記錄每次制得基質(zhì)的狀態(tài)，手感及涂展性能(見(jiàn)表4)。

表4 膜劑基質(zhì)狀態(tài)及涂展性

2.3.2 美白性能實(shí)驗(yàn)

優(yōu)化徐鵬等人的方法[10]。取50 g洗凈的馬鈴薯，冷凍24 h，去皮切碎，加入2 g經(jīng)過(guò)濾的聚乙烯吡咯烷酮。加200 mL磷酸緩沖液勻漿。用紗布過(guò)濾，加入硫酸銨粉末，使達(dá)到30%飽和度，于4000 r/min離心30 min。取上清液繼續(xù)加入硫酸銨，使達(dá)到70%飽和度，于4000 r/min離心40 min。沉淀用磷酸緩沖液溶解，定容至100 mL，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?；以鄰苯二酚為底物，酶?biāo)儀測(cè)定體系在450 nm下的吸光度變化。

最終確定反應(yīng)體系為：15 mL試管中依次加入2 mL 0.1 mol/L，pH值6.5的磷酸緩沖液和1 mL膜劑(預(yù)先于30℃水浴中孵育10 min)，待反應(yīng)啟動(dòng)前30 s加1 mL 50 mmol/L的鄰苯二酚，加入1 mL酪氨酸酶溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，迅速吸取20 μL放入酶標(biāo)儀中，連續(xù)測(cè)定6次。其中反應(yīng)溫度為30℃，底物鄰苯二酚以磷酸緩沖液溶解，且需當(dāng)天配制。取吸光度對(duì)時(shí)間的變化率(ΔA/Δt)為反應(yīng)速率，按下式計(jì)算酪氨酸酶抑制率：

酪氨酸酶抑制率=[(V0-Vi)/V0]×100%，式中V0為以蒸餾水代替樣品時(shí)酶的反應(yīng)速率；Vi為加入膜劑時(shí)酶的反應(yīng)速率。最終測(cè)得膜劑酪氨酸酶抑制率為41%，證明該膜劑美白性能較好，見(jiàn)圖1。

圖1 酪氨酸酶抑制率

2.3.3 酸堿度

取膜劑樣品0.15 g加入3 mL純化水，加熱煮沸至溶解，冷卻至室溫，測(cè)定該混懸液的pH值，平均測(cè)定三次，取其平均值[11]。根據(jù)方法制得圖2檢測(cè)樣品，采用精密pH試紙(圖2)可檢測(cè)樣本的pH值約為6.5，貼近皮膚pH值，該膜劑酸堿度適宜。

圖2 酸堿度

2.3.4 保濕性

圖3 保濕性實(shí)驗(yàn)

將醫(yī)用透氣膠帶貼一層于小玻璃片上，制作皮膚模擬裝置。在溫室下，稱取膜劑樣品適量，均勻涂抹于模擬裝置表面，放在置有變色硅膠RH=50%的干燥器中[11]。在起初與12 h后稱重。W0h=5.1 g；W12h=5.0 g，其重量無(wú)明顯變化，根據(jù)圖3觀其形態(tài)等均無(wú)明顯變化，證明膜劑保濕性較好(見(jiàn)圖3)。

2.3.5 耐熱耐寒性

取膜劑樣品1 g，裝入4 mL離心管中，用保鮮膜封口，分別置于40℃的恒溫水浴鍋、室溫(4℃)和-20℃冰箱中，保持4 h，恢復(fù)室溫后觀察其性狀與之前是否有明顯差異。結(jié)果表明，在40℃、室溫(4℃)、-20℃情況下，膜劑狀態(tài)均無(wú)明顯變化，證明該膜劑具有一定的耐熱耐寒性(見(jiàn)圖4)。

圖4 耐熱耐寒實(shí)驗(yàn)

2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取膜劑樣品3 g平均分成2份，分別裝入離心管中，以1000/2000/3000/4000 r/min，旋轉(zhuǎn)15 min，觀察樣品是否有水分析出。經(jīng)以上四種轉(zhuǎn)速，樣品基本無(wú)水分析出，此膜劑具有一定的穩(wěn)定性。見(jiàn)圖5(從左至右分別是初始狀態(tài)、1000、2000、3000、4000 r/min后樣本狀態(tài))。

圖5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

Fig.5 Stability test

2.3.7 刺激性實(shí)驗(yàn)

選擇30名志愿者，男女各半，年齡20～25歲且皮膚健康，取膜劑樣品適量均勻涂抹于右手背柔軟皮膚表面，面積約4 cm2，左手背同一部位不涂抹作對(duì)照，10～15 min后清水洗去，此后的1、12、24 h，觀察是否出現(xiàn)刺激性反應(yīng)，重復(fù)五天[1,12]。連續(xù)涂抹5天，實(shí)時(shí)記錄，30名受試者均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。證明該膜劑性能溫和，對(duì)皮膚無(wú)刺激性。

3 結(jié)論

該膜劑組方天然，制備工藝簡(jiǎn)單。最佳配比所制備的膜劑，觸感舒適，穩(wěn)定性高。經(jīng)實(shí)驗(yàn)鑒定，該膜劑具有一定美白效果，可用于日常皮膚護(hù)理。