雞胰島素降解酶基因環(huán)狀轉錄本克隆及其表達規(guī)律

冷奇穎，鄭嘉輝，徐海冬，Patricia Adu-Asiamah，張穎，杜炳旺，張麗

雞胰島素降解酶基因環(huán)狀轉錄本克隆及其表達規(guī)律

冷奇穎，鄭嘉輝，徐海冬，Patricia Adu-Asiamah，張穎，杜炳旺，張麗

廣東海洋大學農(nóng)學院，湛江 524088

本課題組前期通過高通量測序發(fā)現(xiàn)，雞胰島素降解酶(insulin degrading enzyme, IDE)基因可能存在一個環(huán)狀轉錄本。為確定基因環(huán)狀轉錄本()的真實存在，探究其表達規(guī)律，本研究以吉林蘆花雞為研究對象，通過PCR擴增和測序驗證了的真實存在，通過RNase R處理和反轉錄證實了的環(huán)形結構，通過qRT-PCR分析和mRNA的時空表達規(guī)律，并對比分析了和線性mRNA在正常體型蘆花雞和突變的矮小體型蘆花雞中的表達差異。結果表明：雞全長為1332 nt，由基因外顯子2~11環(huán)化形成。RNase R耐受性分析表明，雞具備環(huán)形分子的一般特征，不易被RNase R降解。與oligo-d(T)18引物相比，隨機引物對具有較高的反轉錄效率，進一步說明是一個不含poly(A)的環(huán)狀結構分子。組織表達譜結果表明，在1周齡和12周齡正常體型蘆花雞肝臟和心臟高表達，在胸肌和腿肌中低表達；在肝臟組織的時序表達譜結果表明，在雞6周齡之前為低表達，在8周齡以后表現(xiàn)為高表達；正常與矮小體型蘆花雞品系間表達量對比分析表明，正常體型蘆花雞表達水平高于矮小體型蘆花雞，其中在肝臟組織中差異顯著(<0.05)。本研究證實了雞基因存在一個環(huán)狀轉錄本，并初步揭示了的表達規(guī)律，在正常體型和矮小體型蘆花雞肝臟組織中表達量存在差異，本研究結果為深入開展雞的生物學功能及其在雞生長發(fā)育過程中的作用機制奠定了基礎。

雞；胰島素降解酶；環(huán)狀RNA；可變剪接

胰島素降解酶(insulin degrading enzyme, IDE)是一種在進化上保守的中性巰基金屬內(nèi)肽酶，在多種細胞內(nèi)的胰島素降解過程中發(fā)揮重要作用[1~3]。IDE對胰島素的分解作用是胰島素在體內(nèi)分解代謝的主要途徑[4~6]。……