一種野生菌地下菌核的ITS-DNA 分子鑒定

李素玲，劉 虹

（山西省農業科學院食用菌研究所，山西太原030031）

菌核是真菌的一種休眠結構，它可以幫助物種在不利環境或逆境中生存，如低溫、干旱、營養物質缺乏等。不是每種真菌都可形成菌核，已有研究表明，全世界已知可以產生菌核的真菌有20 個目85 個屬，分布在子囊菌和擔子菌門中[1]。我國相關文獻中對能產生地下菌核的物種鮮有記載，僅有的記錄為豬苓、茯苓和雷丸等少數大型藥用物種[2-3]。2017 年夏秋季節，筆者在山西省管涔山調查野生地下菌資源時，在一處50～70 a 樹齡的落葉松人工林內土壤中發現了許多松露狀物體，形態學觀察沒有發現任何產孢組織結構，不是嚴格意義上的地下菌（Hypogeous fungi），而是一種菌核。為確認這種小型松露狀物體的分類學名稱，山西省農業科學院食用菌研究所野生菌研究課題組提取了這些物體的ITS-DNA 片段，并在NCBI 數據庫進行了DNA 比對分析，結果顯示這是一種蘑菇產生的地下菌核。

1 材料和方法

1.1 供試樣本

樣本是2017 年10 月采自山西省管涔山華北落葉松林（Larix sp.）50～70 a 樹齡的樹下土壤中。新鮮標本經45 ℃烘干后保存于首都師范大學標本館（BJTC）。每份標本均制備2 份，一份采用食物烘干器烘干，用作憑證標本，另一份采用硅膠干燥，以備后續分子鑒定所用。

1.2 形態學方法

在體視顯微鏡下觀察樣本的宏觀特征，包括菌核的形狀、大小、顏色、表面有無絨毛、光滑度等。在光學顯微鏡下觀察樣本的顯微結構，包括組織類型、顏色等[4-9]。

1.3 分子鑒定方法

本研究樣本的DNA 提取、PCR 擴增以及測序采用FAN 等[10-11]的方法。本樣本ITS 序列在NCBI上用Blast 工具進行比對。

2 結果與分析

2.1 形態學特征觀察

從圖1 可以看出，樣本近球形、橢圓形、長橢圓形或不規則塊狀，直徑0.5～1.8 cm，乳白色，表面平滑，無絨毛，未見菌索狀結構；內部白色，質地密實，無產孢結構分化現象，由擬薄壁組織和交錯絲組織構成。

2.2 DNA-ITS 分析結果

Blast 比對分析顯示，山西省管涔山落葉松林土壤中的菌核樣本（FAN1043）的ITS 序列在NCBI 數據庫中匹配到Entoloma hirtipes，相似度為99%。這表明本樣本序列和JX454867 序列高度同源，源于同一個分類學物種，是毛腳粉褶菌（Entoloma hirtipes（Schumach.）M.M.Moser）的菌核。

2.3 分類學結果

毛腳粉褶菌（新擬中文名）

Entoloma hirtipes （Schumach.）M. M. Moser，Gams，Kl. Krypt.-Fl.，Bd II b/2，ed. 4（Stuttgart）2b/2：206（1978）

中國分布：山西省。

引證標本：山西省管涔山秋千溝，2017 年10 月8 日，華北落葉松林（Larix sp.）樹下土壤中，閆向遠（FAN1043）。

3 結論與討論

有關粉褶菌屬（Entoloma）物種產生地下菌核的研究很少，僅1 份，是在南美洲圭亞那以豆科植物為優勢種的熱帶雨林中發現的一種在Entoloma sp.名下的菌核[1]。本研究為毛腳粉褶菌這一蘑菇物種在山西省的首次報道，同時也是世界范圍內毛腳粉褶菌產生地下菌核的首次發現。

本研究的小松露ITS-DNA 片段與毛腳粉褶菌高度吻合，可以認定為同一個分類學物種。菌核在秋、冬季形成，意味著這個物種可能是依靠菌核來越冬的，然而菌核是否是這個物種生活史中必經的階段以及它是否與落葉松形成外生菌根等，還需進一步研究。

志謝：曹晉忠博士提供有價值的意見，首都師范大學研究生閆向遠等參加標本采集，在此一并致謝。