母水牛同期發情中多卵泡發育的排卵監測

陳明棠 李輝 黃健 譚正準 趙朝步 鐘華配 覃廣勝

摘要?用“GnRH + PGc + GnRH”法同期化處理水牛，利用B超對多卵泡發育和排卵進行監測。結果表明，經同期化處理的母水牛多卵泡發育發生率為6.43%（42/653），排卵率為72.73%（24/33）。母水牛多卵泡發育的發生與品種、年齡、季節等因素無關。

關鍵詞?水牛;同期發情;B超;多卵泡發育;排卵監測;影響因素

中圖分類號?S823.3文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2019）22-0083-02

Abstract?“GnRH + PGc + GnRH” treatment was used to make estrus synchronization on buffaloes. And the development of ovarian follicles were observed by ultra sound method. The results showed that the multifollicle growth rate of synchronized buffalo was 6.43%（42/653）， and the?ovulation rate was 72.73%（24/33）.?The development of multifollicle had no correlation with variety， age， season， etc.

Key words?Buffalo;Estrus synchronization;Ultra sound;Development of multifollicle;Ovulation monitoring;Influencing factors

水牛是單胎動物，通常情況下母水牛一次發情只排1枚卵子，自然狀態下水牛的雙胎率極低，雙胎多出現在胚胎移植。隨著水牛同期發情技術的推廣應用，常用的處理程序是否會增加多卵泡發育和多排卵的問題尚未見報道。筆者用促黃體素釋放激素A3+氯前列醇同期化處理母水牛，使用便攜式獸用B超儀觀測卵泡發育和排卵情況，記錄其中多卵泡發育和多排卵現象，分析品種、年齡和季節等因素對母水牛多卵泡發育發生的影響。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?試驗牛。廣西區內飼養的摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、地中海水牛及其他雜交水牛。

1.1.2?試劑和器材。氯前列醇（PGc）、促黃體素釋放激素A3（哥娜、GnRH）為丹東市綠丹和華動物藥有限公司生產;便攜式獸用B超儀（HONDA，HS-101V），日本產。

1.2?方法

1.2.1?同期化發情處理。

試驗母水牛采用“促黃體素釋放激素A3+氯前列醇”方法進行同期化處理[1]。試驗開始當天記為“0 d”，當天肌肉注射GnRH 100 μg/頭，第7 天肌肉注射PGc 0.4 mg/頭，第9 天肌肉注射GnRH 100 μg/頭，此后24 h起開始檢查發情和監測排卵。

1.2.2?發情和排卵監測。

全部試驗母水牛在第9 天肌注GnRH后24 h進行第一次發情和排卵監測，記錄卵巢上直徑≥9 mm卵泡數目。監測頻率為1～2次/d，使用B超儀經直腸逐頭掃描母水牛卵巢，60 h內不排卵的不再監測并記為不排卵。

1.2.3?數據統計與分析。試驗數據顯著性分析采用卡方檢驗（χ2）分析，P<0.05表示差異顯著。

2?結果與分析

2.1?多卵泡發育和排卵的總體情況

試驗監測了母水牛多卵泡發育和排卵情況，總樣本653頭，一次發情優勢卵泡數達到2個的母水牛有40頭，一次發情優勢卵泡數達到3個的有2頭， 2個優勢卵泡與3個優勢卵泡的發生率差異顯著（P<0.05）。2個優勢卵泡的母水牛排卵率為70.97%（22/31），但均為單排卵，無雙排卵現象，有3個優勢卵泡的母水牛出現1頭多排卵。多卵泡發育和排卵情況具體見表1。

2.2?多卵泡發育與年齡的關系

將全部樣本按年齡段（青年、成年）進行分類統計，發現青年水牛和成年水牛多卵泡發育發生率差異不顯著（P>0.05）（表2）。

2.3?多卵泡發育與品種的關系

將全部樣本按品種進行分類統計，發現各品種水牛多卵泡發育的發生率差異不顯著（P>0.05）（表3）。

2.4?多卵泡發育與季節的關系

將樣本按開展試驗的季節進行分類統計，發現夏季多卵泡發育發生率最高，而冬季最低，但各季節間差異不顯著（P>0.05）（表4）。

3?討論

在牛的直腸檢查操作中，有一些關鍵操作環節只能依靠操作者的經驗和感覺來完成，不同操作者間會存在判斷誤差。該試驗采用B超技術來解決這些問題具有很強的特異性和實用性[2-3]。

水牛是單胎動物，一次發情只排出1枚卵子。該試驗發現6.43%（42/653）的母水牛在同期發情處理后出現多卵泡發育現象（Φ≥9 mm），排卵率為69.70%（24/33），與陳明棠等[4]、馬會明[5]報道的同期發情試驗的排卵率（72.88%、75%）差異不顯著（P<0.05）。該試驗結果發現，多排卵率為0.26%（1/384），出現概率極低，說明“促黃體素釋放激素A3+氯前列醇”處理方案沒有造成母水牛排卵異常，表明水牛的雙胎現象與同期發情處理沒有必然關聯。

姚曉磊等[6]研究了卵泡發育相關基因在牛發情周期內第一卵泡波中優勢卵泡（dominant follicles，DF）和從屬卵泡（subordinate follicles，SF）顆粒細胞中的表達差異，發現與卵泡發育相關基因（SFRP2、CPEB1、PRKAG2、MAPK8、PPP2R2A和PRSS23）在DF和SF中都有不同程度表達，其中CPEB1和PRKAG2對卵泡的發育可能有促進作用，SFRP2和MAPK8對卵泡的發育可能有抑制作用。

Messer等[7]報道了視黃酸受體（rretinoic acid receptor，RAR）基因在法國超高產仔大白豬中窩產仔數平均加性效應是每窩增加0.21頭，在法國對照大白豬中則是每窩增加0.14頭。郭曉紅等[8]發現RARG基因CC基因型小尾寒羊平均產羔數比CD基因型多0.55只（P<0.05）。張路培等[9]研究了生長分化因子 9（growth differentiation factor 9，GDF9）基因的遺傳變異與牛雙胎性狀的關系，發現在魯西牛中GDF9基因的3UTR出現缺失突變，單胎牛群體與雙胎牛群體基因型分布有極顯著差異（P=0.006），雙胎牛群體的B等位基因頻率明顯大于單胎牛群體。黃萌等[10]將魯西牛群體的視黃素X受體基因（retinoid X receptorgamma，RXRG）A1941G位點的基因型效應與雙胎性狀進行相關分析，發現基因型分布在魯西單、雙胎牛群體上存在極顯著差異（P<0.01），表明基因型對牛雙胎現象有較大影響，但并未發現基因型效應與雙胎性狀相關，且在其他品種群體中沒有發現類似現象。

該研究試驗對象來自廣西區內數個奶水牛場牛群，經同期化處理后有0.26%（1/384）的多排卵現象，但沒有出現雙胎，而水牛雙胎性狀是否存在關聯基因型則有待進一步研究。

4?結論

奶水牛經同期化處理后出現6.43%的多卵泡發育現象，但只有0.26%形成多排卵，多卵泡發育水牛的排卵率與單優勢卵泡發育水牛的排卵率差異不顯著，沒有出現多胎情況。多卵泡發育與品種、季節、年齡等因素無關。

參考文獻

[1] 陳明棠，李輝，譚正準，等.母水牛同期發情的排卵監測[J].黑龍江畜牧獸醫，2018（18）：206-208.

[2] 趙凱，田文儒，劉煥奇，等.超聲診斷技術在獸醫產科上的應用[J].黑龍江畜牧獸醫，2000（9）：39-40.

[3] 顧紅兵，詹國英，張月昔，等.用超聲診斷儀檢測牛黃體的研究進展[J].山東畜牧獸醫，2002（2）：36-37.

[4]?陳明棠，譚正準，黃健，等.不同處理方法對水牛同期發情效果的觀察[J].中國牛業科學， 2014，40（4）：16-17，20.

[5] 馬會明.B超監測母牛同期發情和超數排卵中卵巢動態變化的研究[D].石河子：石河子大學，2005.

[6] 姚曉磊，李鵬飛，姜曉龍，等.卵泡發育相關基因在牛優勢和從屬卵泡顆粒細胞中表達的研究[J].畜牧獸醫學報，2014，45（12）：1957-1963.

[7] MESSER L，WANG L，LEGAULT C，et al.Mapping and investigation of candidate genes for litter size in French Large White pigs[J].Animal genetics，1996，27（S2）：101-119.

[8] 郭曉紅，儲明星，周忠孝，等.小尾寒羊高繁殖力候選基因RARG的研究[J].畜牧獸醫學報，2006，37（8）：756-760.

[9] 張路培，張小輝，許尚忠，等.牛GDF9和BMP15基因遺傳變異與雙胎性狀的關系研究[J].畜牧獸醫學報，2007，38（8）：800-805.

[10] 黃萌，許尚忠，昝林森，等.牛RXRG基因遺傳變異與雙胎性狀的關聯分析[J].遺傳，2008，30（2）：190-194.