紅花五味子莖低極性化學成分的GC-MS分析

鄭 巍，劉曉娟，賈 琳，陳海生，郭良君，金永生

(1.海軍軍醫大學藥學院，上海 200433；2.解放軍第九八醫院藥械科，浙江 湖州 313000；3.廈門市醫藥研究所，福建 廈門 361003；4.解放軍第四五四醫院藥學部，江蘇 南京 210000)

紅花五味子Schisandra rubriflora (Franch).Rehd.et Wils.是木蘭科五味子屬多蕊五味子亞屬植物，主產于甘肅南部、湖北、四川、云南西部及西南部、西藏東南部等地[1-2]。民間將其果實入藥，具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心之功用；枝干入藥，具有活血、祛風、除濕之功效[2-3]。國內外對紅花五味子化學成分的研究報道主要體現在對其果實、枝、葉等部位的木脂素、萜類化合物的分離鑒定、含量測定及其抗HIV-1活性、降低谷丙轉氨酶(SGPT)活性的研究[4-12]。在揮發油研究方面，有文獻報道了其葉和枝中揮發油成分主要為倍半萜類化合物，含有少量的烷烴、醇、酮、醛、酯類成分[13]。總體上，對于紅花五味子莖的研究較少，為了研究紅花五味子的化學成分以及擴展藥材的來源范圍，本文以紅花五味子莖為研究對象，首次采用醇提后石油醚萃取的方法得到低極性部位，再采用氣相色譜-質譜的方法進行分析，并將其結果和NIST08光譜數據庫進行匹配分析，最終鑒定了49個化合物，同時運用峰面積歸一法通過Xcalibur化學工作站數據處理系統測得各個化學成分的質量百分數。

1 材料

氣相色譜Thermo Trace GC Ultra(美國賽默飛世爾公司)，質譜Thermo DSQ Ⅱ， Xcalibur工作站。紅花五味子莖于2012年采自云南西雙版納，經第二軍醫大學藥學院生藥學教研室張漢明教授鑒定為紅花五味子Schisandra rubriflora (Franch).Rehd.et Wils.的干燥莖。所有試劑均為市售分析純試劑，水為重蒸水，載氣為高純氦氣。

2 方法

2.1 低極性化學成分的制備

紅花五味子莖10 kg，粉碎后，以90% 乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液經濾過、減壓回收溶劑得到無醇味浸膏(5 L)。將所得浸膏懸浮于2 L水中后，用石油醚(60～90)℃萃取6次，每次1 L，減壓回收溶劑得到石油醚浸膏7 g。取100 mg浸膏，置于10 ml 量瓶中，加入80%甲醇，超聲、加熱使其幾近完全溶解，放置、冷卻；再加入80%甲醇定容，搖勻、放置；吸取 1ml定容后的浸膏液，微孔濾膜過濾后待測。

2.2 色譜條件

色譜柱TR-35MS石英毛細管(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，程序升溫，起始溫度40 ℃，保持 2 min后以10℃/min的速度升至300 ℃并保持5 min；汽化溫度250 ℃，進樣量1 μl；分流比10∶1。載氣是高純氦氣，流速1.0 ml/min。

2.3 質譜條件

離子源：EI源；離子源溫度250 ℃；電子能量：70 eV；掃描范圍：50～650m/z。

2.4 分析方法

按“2.2”、“2.3”項下實驗條件對紅花五味子莖石油醚提取物進行分析，30 min得到紅花五味子莖低極性化學成分的總離子流圖，如圖1所示。共檢測出126個峰，通過檢索NIST08光譜數據庫，按60%以上匹配率(SI和RSI均大于600，最大值1000)，并結合質譜裂解規律確定其化學成分。運用峰面積歸一法通過Xcalibur化學工作站數據處理系統，測得各個化學成分在石油醚部位中的質量百分數。

3 結果

本次檢測共鑒定出49個化合物，結果如表1所示。統計出本次所測紅花五味子莖的低極性化學成分中含有烷烴11個(8.03%)，酯類21個(45.94%)，脂肪酸7個(19.35%)，倍半萜2個(13.94%)，其他醇、酮、醚類成分8個，其中含量較高的兩個主要化學成分是：β-芹子烯(12.08%)(見圖2)、順，順-2-甲基-3，13-十八烯醇(10.3%)(見圖3)。

圖1 紅花五味子莖低極性化學成分總離子流圖

序號保留時間(t/min)相似度SI值相似度RSI值化合物含量(%)18.2657962226-(乙酰氨基)糠醛-5-烯-3-乙酸酯0.2428.776887472-(7-十七烷氧基)四氫-2H-吡喃0.3039.186556955,8-二乙基-十二烷0.3049.517518052,6,10-三甲基十四烷0.4859.588488882-甲基十三烷2.0669.82919928β-芹子烯12.0879.92839868α-芹子烯1.86810.327818752,6,11-三甲基十二烷0.83910.50631685異戊酸香葉酯0.231011.296857992,2,4-三甲基-3-羧基異丙基異丁酯-戊酸0.27

(續表)

圖2 β-芹子烯 圖3 順，順-2-甲基-3，13-十八烯醇

4 分析與討論

本研究首次對經乙醇熱提后再用石油醚萃取法獲得的紅花五味子莖的低極性化學成分進行了GC-MS分析，所測結果和文獻[13]采用超聲輔助石油醚提取法獲得紅花五味子葉和枝的揮發油研究結果相比，差異較大。本法所獲得紅花五味子莖低極性成分經分析含有酯類化合物21個(45.94%)，脂肪酸7個(19.35%)，烷烴11個(8.03%)，而倍半萜只有2個(13.94%)；文獻[13]中紅花五味子葉和枝揮發油中倍半萜有45個(72.4%)，而酯類只有6個(5.9%)，烷烴3個(1.1%)，另外兩者的化學成分除了芹子烯外其他沒有重合。分析原因，除了提取方法的不同外，藥材的研究部位不同以及藥材的產地、采收時間等都可能是產生差異的原因，另外，還有個重要因素，就是本次實驗距離藥材采集時間較久，其中的易揮發性成分，如倍半萜可能已經揮發，有必要進一步對比分析。

本文方法所測得的脂肪酸、酯類成分種類豐富、數量多，其中亞油酸、亞麻酸等是人體必需脂肪酸；脂肪酸、酯類成分還具有抗氧化、抗腫瘤等多方面活性，這都提示了云南紅花五味子可能具有較同屬植物更好的藥療和保健作用。另外芹子烯是本文方法獲得的含量最高的成分，藥理研究表明芹子烯具有抗急性炎癥的作用[14]，這也提示了本方法對于開發紅花五味子抗急性炎癥藥物的可能性。本文方法所測得的的化合物除了芹子烯外其他48種成分都是首次從該植物中發現，豐富了紅花五味子的化學成分。