狗肝菜中有機酸的提取工藝及含量測定

姚山梅

摘要：本試驗以狗肝菜為原料，研究了乙醇濃度、料液比、超聲波提取時間及超聲波提取溫度對狗肝菜中總有機酸提取量的影響規(guī)律，采用酸堿滴定法對其含量進行測定，最終確定狗肝菜中總有機酸的最佳提取工藝。

關(guān)鍵詞：狗肝菜;有機酸;酸堿滴定;正交實驗

中圖分類號：G633.91 文獻標識碼：B文章編號：1672-1578（2019）33-0190-01

1.材料與方法

1.1 實驗材料。

儀器 KQ3200B型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;烘箱（上海福瑪實驗設備有限公司）;電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）;密封型搖擺式中藥粉碎機（無錫市江成液壓機械公司）

試劑 無水碳酸鈉基準試劑（天津市化學試劑批發(fā)公司）;鄰苯二甲酸氫鉀（天津市光復科技發(fā)展有限公司）;氫氧化鈉（分析純，成都市科龍化工試劑廠）;鹽酸（分析純，廣東省精細化學品工程技術(shù)研究開發(fā)中心）;酚酞（成都市科龍化工試劑廠）;溴甲酚綠 （成都市科龍化工試劑廠）;甲基紅（成都市科龍化工試劑廠）;甲基橙（廣州化學試劑廠）;95%乙醇（分析純，成都市科龍化工試劑廠）

樣品? 狗肝菜，購自崇左菜市場

1.2 實驗方法。

采用單因素實驗、正交實驗，探究乙醇濃度、料液比、超聲波提取時間及溫度對狗肝菜中總有機酸提取量的影響規(guī)律，利用酸堿滴定法對其總有機酸的含量進行測定，最終確定最佳提取條件。

工藝流程：采集狗肝菜→清洗→烘干→粉碎→乙醇浸潤→超聲波振蕩→總有機酸含量測定

2.結(jié)果與分析

2.1 單因素實驗。

2.1.1 不同乙醇濃度對提取效果的影響。

準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、超聲提取時間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30的條件下，分別在乙醇濃度55%，65%，75%，85%，95%條件下提取，比較不同乙醇濃度對提取物中總有機酸含量的影響，乙醇濃度小于75%之時，有機酸含量隨著乙醇濃度的增大而增加，但超過75%時，總酸含量反而下降。這可能是因為乙醇濃度過小時，不利于有機酸的浸出;濃度過大時，引起產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的變化。因此提取有機酸乙醇的濃度為75%時為最優(yōu)。

2.1.2 不同料液比對提取效果的影響。

準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度為65℃、超聲提取時間為30min，乙醇濃度為85%的條件下，分別于液料比為1：10，1：20，1：30，1：40，1：50的條件下提取，比較不同料液比對提取物中總有機酸含量的影響，當料液比小于1：30時，有機酸提取率隨著料液比的增加而增加;當料液比大于1：30時，有機酸提取率反而下降。這可能是因為料液比過小時，浸提液太小，從而影響有機酸提取;若加水過多，不利于后濃縮，因此提取有機酸料液比為1：30時為最優(yōu)。

2.1.3 不同提取時間對提取效果的影響。

準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取溫度65℃、料液比﹝狗肝菜葉粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30，乙醇濃度為85%的條件下，分別超聲提取20min，30min，40min，50min，60min，比較不同超聲提取時間對提取物中總有機酸含量的影響，隨著時間的延長，有機酸提取率先上升后下降。說明有機酸浸出過程與時間密切相關(guān)，時間過短，有機酸浸出不充分，但時間過長，可能影響產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的變化，從而使提取率降低。因此提取有機酸超聲提取時間為35min時為最優(yōu)。

2.1.4 不同提取溫度對提取效果的影響。

準確稱取5份狗肝菜葉粉末各1.0000g，在超聲提取時間30min、料液比﹝狗肝菜葉粉末（g）：乙醇（ml）﹞1：30，乙醇濃度為85%的條件下，分別在超聲提取溫度55℃，60℃，65℃，70℃，75℃條件下提取，比較不同超聲提取溫度對提取物中總有機酸含量的影響，當提取溫度小于70℃時，隨著溫度的升高，狗肝菜有機酸提取率隨之增大;當溫度繼續(xù)升高，有機酸提取率呈下降趨勢。說明溫度升高有利于有機酸的浸出，但溫度過高會影響有機酸的穩(wěn)定性。因此提取有機酸超聲提取溫度為65℃時為最優(yōu)。

2.2 驗證性實驗。

精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g3份，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1：30，提取時間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進行提取，測定，計算含量。在此最佳參數(shù)組合條件下，有機酸含量的平均值為7.03%，提取率大于正交試驗表中的任何一組，為最佳選擇。

2.3 精密度實驗。

精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1：30，提取時間35min，提取溫度65℃的條件下，按擬定方法進行提取，平行測定5次，計算含量。相對標準偏差RSD為1.02%，表明該工藝提取方法測定總酸含量精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性實驗。

精密稱取狗肝菜葉粉末1.0000g，在最佳組合條件，即乙醇濃度75%，料液比1：30，超聲時間35min，超聲溫度65℃的條件下，按擬定方法進行提取，分別于0h，2h，4h，6h，8h，12h進行含量測定，計算含量。相對標準偏差RSD為1.35%，表明該工藝提取方法測定總酸含量在12h內(nèi)是穩(wěn)定的。

3.討論

雖然中草藥中有機酸類成分的提取分離及測定方法有很多，但其適用范圍條件各有所差異。要選擇出一種適合的提取分離和分析測定方法，除了要考慮所需要分析的有機酸類成分的結(jié)構(gòu)組成和性質(zhì)外，還需要充分考慮提取物中其它物質(zhì)成分可能對有機酸造成的干擾。因此，在實際應用中要根據(jù)具體情況做具體分析，綜合各因素考慮，以確定出最佳的提取分離及測定方法。

參考文獻：

[1]陳顯雙.狗肝菜及其栽培技術(shù)[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè)，2005（1）：41.

[2]李南薇，范媛媛，陸映機.狗肝菜多糖提取工藝研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學，2011（11）：116-117.