宮凈液防治奶牛子宮內膜炎試驗報告

李世宏,楊亞軍,秦 哲,劉希望,孔曉軍,焦增華,李劍勇

(中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 農業部獸用藥物創制重點實驗室甘肅省新獸藥工程重點實驗室,甘肅 蘭州 730050)

奶牛子宮內膜炎是子宮內膜受病原微生物感染而發生的炎癥,是奶牛養殖業中的3 大常見病之一,我國該病發病率一般為5%～25%,最高可達30%,平均20% 左右。該病可導致奶牛不孕,胎間距延長,奶產量也降低,嚴重影響奶牛業的持續健康發展,給奶牛業造成巨大的經濟損失,我國每年因該病治療造成的人力和醫藥費損失高達數十億元人民幣。國內外治療本病的藥物和方法也不少,但較理想的不多。為此,我們科研團隊研制了治療奶牛子宮內膜炎的專用純中藥藥劑,進行了臨床治療和預防試驗,取得了滿意的結果。

1 材料與方法

1.1 主要設備與器材 全自動動物血細胞分析儀(邁瑞BC2800V)和配套試劑、生物組織包埋機(KD-BM,浙江省金華市科迪儀器設備有限公司)、石蠟切片機(德國徠卡公司)、顯微鏡、冰箱(海爾BCD-257SL)、離心機、水浴鍋、20 mL 離心管、20 mL注射器、真空采血管、子宮內膜組織活檢器、超聲波清洗機及實驗室常用器皿等。

1.2 藥品 宮凈液,純中藥合劑,棕褐色液體,久置有微量沉淀,氣香,味微酸苦;規格為100 mL/瓶、500 mL/瓶。中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所研制中試產品。

1.3 治療試驗

1.3.1 病例 甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心、臨洮宏達奶牛養殖等6 個奶牛養殖場的患子宮內膜炎奶牛,共收治155 例。

1.3.2 用法用量 用藥前,試驗牛必須嚴格執行外陰部清洗與消毒措施。以直腸把握子宮頸法通過輸精管將藥液注入子宮腔內,每次100 mL,隔日1次,3～4 次1 個療程,一般1 個療程即可治愈。注意,灌注的宮凈液藥液溫度應接近患牛體溫。

1.3.3 療效判定 用藥前后治療奶牛子宮內膜炎的療效判定標準可以為試驗用藥提供理論和實踐依據。具體判定標準見表1。

表1 治療奶牛子宮內膜炎療效判定標準

1.4 對患牛血液白細胞和子宮局部炎性細胞的影響 治療前后分別于奶牛尾靜脈采集血液,進行白細胞計數及分類;治療前后采集子宮頸口分泌物,涂片,姬姆薩染色,顯微鏡下檢查計數,如果100 個視野內出現的白細胞在10 個以內判為(-),11～30 個判為(+),31～80 個判為(++),81～150 個判為(+++),151 個以上判為(++++)。

1.5 對子宮內膜炎病原菌的作用

1.5.1 對體內病原菌的作用 對72 例子宮內膜炎患牛于治療前和停藥后第10 天,盡可能無菌操作采取患牛子宮頸內分泌物,培養、分離和鑒定細菌。

1.5.2 按倍比稀釋法將宮凈液從1∶50(40 mg/mL)開始,到1∶12 800(0.08 mg/mL)共稀釋為10個梯度,對從子宮內膜炎病例分離的6 種159 株病原菌進行了抑菌試驗。

1.6 治療前后子宮病理組織學檢查 用子宮內膜組織活檢器采取治療前和治愈后的子宮內膜組織,制片,顯微鏡下觀察比較。

1.7 治療患牛乳中孕酮含量測定 治療前采集乳樣1 次,以后每隔3 d 采乳樣1 次,直至有臨床發情表現為止。乳樣放射免疫分析法(RIA)測定孕酮含量。

1.8 預防試驗

1.8.1 試驗奶牛 在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心、臨洮宏達奶牛養殖等6 個奶牛養殖場選無難產、胎衣不下、陰道脫和子宮脫的產后母牛,年齡和胎次均接近,按產犢順序分為試驗組和對照組。

1.8.2 預防方法 試驗組奶牛在產后4～6 d 子宮灌注宮凈液(藥液溫水熱浴,溫度接近奶牛體溫)100 mL,對照組奶牛不做任何處理。

2 結果

2.1 治療結果 用宮凈液治療子宮內膜炎試驗奶牛155 例,痊愈132 例,好轉11 例,無效12 例,治愈率為85.16%,有效率為92.26%;治療后3 個情期受胎129 例,受胎率為83.23%;治愈后的牛只(132頭)3 個情期受胎率為97.72%。健康對照組(剔除子宮內膜炎試驗奶牛)142 例,產后3 個情期受胎116 例,受胎率為81.69%。試驗收治的病例多為嚴重的子宮內膜炎(久治無效或病程較久)或用一般抗生素治療無效;在132 例治愈的奶牛中82.58%(109 例)是1 個療程治愈,12.88%(17 例)是2 個療程治愈,只有4.55%(6 例)用了3 個療程治愈,宮凈液表現出良好的治療效果。治愈牛3 個情期受胎率達到97.72%,明顯高于健康對照組產后3 個情期的受胎率,表明宮凈液有良好的促進子宮機能恢復、促進卵巢功能、提高受胎率的作用。試驗結果見表2。

表2 臨床治療奶牛子宮內膜炎情況

2.2 宮凈液對患牛血液炎性和子宮局部炎性細胞的影響 治療前患牛白細胞總數均高于正常值,治愈后恢復到正常范圍,治療前嗜中性細胞比例明顯升高,治療后亦恢復到正常范圍,治療前淋巴細胞比例明顯降低,治療后亦恢復到正常范圍。檢查53例病牛子宮頸口分泌物白細胞,治療前白細胞量(++)～(++++)的47 例,(+)的6 例;治療后43 例轉為(-),6 例為(+),4 例為(++)。治療后隨著炎癥減輕或痊愈,分泌物中白細胞減少或消失。試驗結果見表3。

表3 53 例子宮內膜炎治療前后血液白細胞數

2.3 宮凈液對子宮內膜炎病原菌的作用 宮凈液對6 種159 株病原菌的化膿鏈球菌、乳房鏈球菌、乳鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺菌作用較強,3～5 min 即可全部殺死;對綠膿桿菌效果弱,需要10 min 以上方可殺死。試驗結果見表4。

表4 宮凈液對6 種159 株病原菌的抑菌結果

2.4 治療前后子宮病理組織學變化 治療前子宮內膜活檢,鏡檢可見子宮內膜上皮細胞腫大、變形、核固縮,黏膜下固有膜有大量嗜中性粒細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤、聚集,黏膜表面本身變成膿膜。治療后子宮內膜活檢,鏡檢可見子宮內膜炎癥反應消退,黏膜下微小膿腫灶消失。檢查結果見表5。

2.5 對子宮內膜炎患牛乳中孕酮含量的影響治療前卵巢有黃體的30 例子宮內膜炎患牛乳汁孕酮含量平均為(9.44±6.65)ng/mL;第一次子宮灌注宮凈液后,9 例在3 d 內、14 例在6 d 內、其余均在15 d 內乳汁孕酮含量降至2 ng/mL 以下,說明宮凈液有較好的溶解黃體的作用;治療后平均(13.8±8.4)d 降至(1.0±0.9)ng/mL 時,表明黃體消退、卵泡發育;而臨床上觀察的發情時間平均為治療后(38.2±21.7)d,較孕酮分析確定的卵泡發育晚25 d 左右。

表5 治療前后子宮內膜病理組織變化結果

治療前卵巢無黃體患牛,乳汁孕酮平均含量為(0.65±0.36)ng/mL,治療后孕酮含量在低水平波動,到(15.8±9.1)d 乳汁孕酮開始升高,(21.3±8.6)d 增至(4.14±2.54)ng/mL 時,并繼續增高,表明已有泡發育、排卵并形成黃體,以后轉為18 d 左右的正常周期性變化。這些患牛臨床觀察到的發情時間平均為治療后(41.7±19.6)d,較孕酮分析確定的卵泡發育晚26 d 左右。

2.6 預防效果 奶牛子宮內膜炎大多數是由于產后早期感染所至。妊娠期子宮局部處于免疫抑制狀態,產后早期子宮的正常防御機制還未建立起,而此時子宮頸口開張,病原菌可以自由進入,子宮復舊過程中脫落的母體胎盤、殘留在子宮內的血液和胎水都為病原菌繁殖提供了良好的基質和營養。前蘇聯學者報道,正常分娩母牛產后第1 天,子宮沖洗液1 mL 內含有52.5 萬個細菌,第3 天含有273 萬個,第5 天含有948 萬個,第7 天含有325 萬個,第15 天含有34.8 萬個。產后5 d 是子宮內細菌最易繁殖的時期,在此時給奶牛子宮灌注宮凈液獲得了理想的效果,試驗組子宮內膜炎發病率只有5%而同期對照組發病率為16.9%,比較差異顯著(P＜0.05);產后3 個情期受胎率試驗組較對照組提高9.43%。試驗結果見表6。

表6 宮凈液對奶牛子宮內膜炎預防試驗

3 結論

宮凈液是治療奶牛子宮內膜炎的純中藥制劑,該藥組方清熱解毒、活血化瘀、抗菌消炎、縮宮排膿的治療原則。試驗表明,宮凈液對引起子宮內膜炎的常見病原菌有很好的抑制和殺滅作用;能抑制慢性炎灶中的肉芽組織增生,減輕炎癥過程的病理損傷,有良好的抗炎和促進組織恢復的作用;可以增強子宮平滑肌的興奮性,促進子宮收縮,但不引起子宮的強直性收縮,有良好的縮宮排膿作用;對卵巢機能有良性調節作用,有利于母牛生殖機能的恢復,提高治愈牛的受胎率。臨床應用取得了良好的治療和預防效果,療效確實,治愈后的奶牛奶產量有增加的趨勢,得到了養殖戶的認可,是治療奶牛子宮內膜炎的理想藥劑。