多巴胺D2受體Taq1A和A-241G多態性對利培酮所致女性高催乳素血癥的影響

姚樹永 劉威

（蘇州市廣濟醫院 江蘇 蘇州 215137）

精神分裂癥是精神科最常見的精神疾病之一。國外的調查顯示，普通人群中精神分裂癥的終生患病率在全世界大約是1%[1]。目前，精神分裂癥的病因尚未完全闡明，有多種假說，在神經生化方面的假說里多巴胺（DA）假說占主流地位。DA受體根據親和力的不同分為5個亞型，其中D2受體的多態性與抗精神病藥物的關聯研究被廣泛關注。結節漏斗束和下丘腦垂體束中分泌的DA是調節催乳素（prolactin，PRL）分泌的主要因子，DA通過垂體泌乳細胞表面的D2受體抑制PRL合成和分泌[2]。高催乳素血癥可導致多種臨床癥狀，患者出現高催乳素血癥副反應是中斷治療的主要原因之一。PRL升高可導致女性月經異常、乳汁分泌、男性乳房女性化、性功能障礙等；長期升高則可引起如骨質疏松、動脈栓塞、垂體腺瘤、乳腺癌等病癥。許多抗精神病藥物可導致精神病患者合并高催乳素血癥，發生率為25%～89%[3]，因此目前抗精神病藥物引起的高催乳素血癥副反應在臨床上引起了密切的關注。

利培酮是臨床常用的新型抗精神病藥物之一，研究發現它對血漿的PRL影響較大。國外學者Mihara K等發現抗精神病藥物引起的錐體外系反應與Taq1A基因多態性A1的等位基因沒有顯著關系[4]。美國精神病學研究所對7～17歲的患者進行長期利培酮治療，探討高催乳素血癥和利培酮長期治療的兒童和青少年的DRD2基因變異之間的關聯。研究顯示，多巴胺D2受體Taq1A和A-241G等位基因與PRL濃度升高有關[6]。國內僅見喬屹等研究了DRD2基因Taq1A多態性與利培酮治療前后PRL濃度變化的相關性，結果顯示，Taq1A多態性與利培酮治療前后PRL濃度變化無關聯[7]。由于目前國內外開展的利培酮導致高催乳素血癥與DRD2基因多態性的相關研究不多，樣本量有限，相關結果也不一致，故本文擬探討多巴胺2（D2）受體基因Taq1A和A-241G多態性與利培酮治療女性精神分裂癥所致高催乳素血癥之間的相關性。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集來自我院2017年1月1日—2018年8月31日住院首發精神分裂癥女性患者，年齡18～45歲。入組標準：診斷符合中國精神疾病診斷與分類標準（第三版CCMD-3）。排除腦器質性疾病或軀體疾病所致精神障礙；藥物、酒精濫用或依賴者；妊娠、哺乳期、月經期、口服激素類或多巴胺受體激動劑患者；有子宮和卵巢切除史者。共入組36例患者；其中28例完成全部研究，本研究所取外周血及研究內容均獲得所有受試者的知情同意。

1.2 檢驗試劑

全血基因組DNA快速提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司；DRD2基因目的條帶PCR擴增引物由上海生工生物科技有限公司合成；MaeⅢ和exonuclease內切酶購自美國Thermo公司；血清泌乳素測定試劑盒購自日本Tosoh corporation公司。

1.3 檢驗儀器

瓊脂凝膠電泳槽與凝膠成像系統（Bio-Rad公司），PCR擴增儀（杭州朗基科技科學儀器有限公司），全自動免疫分析儀（日本Tosoh corporation公司），高速冷凍離心機（艾本德中國有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 藥物治療方案 所有受試者入組后服用利培酮至治療量（2～6mg/d）維持到結束。出現錐體外系不良反應時，可使用鹽酸苯海索片對癥治療。在治療前和治療8周后測定血清PRL水平，治療8周后測定D2受體Taq1A基因和A-241G基因型多態性。

1.4.2 基因多態性檢測 使用EDTA抗凝管抽取患者外周靜脈血5ml，-80℃保存，按常規方法提取基因組DNA。DRD2 Taq1A和A-241G基因多態性分析均采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態分析（RFLP-PCR）的方法。

Taq1A基因的測定：PCR擴增，上游引物5'-GCTGGCCAAGT TGTAAAT-3'，下游引物5'-TGGAGCTGAACTGGACT-3'。PCR反應條件：95℃預變性5min，35個循環（94℃變性30s，59℃退火30s，72℃延伸45s），72℃延伸10min。Taq1A基因分型：取擴增產物4μl以MaeⅢ限制性內切酶酶切，酶切產物以2%瓊脂糖凝膠電泳，120V 30min后觀察分型。

A-241G基因的測定：PCR擴增，上游引物5'-AAA GGA GAA GAC TGG CGA GCA-3'，下游引物5'-TGG AAC GGG TAG GAG GGG TT-3'。PCR反應條件：95℃預變性5min，35個循環（94℃變性30s，62℃退火30s，72℃延伸45s），72℃延伸10min。A-241G基因分型：取擴增產物4μl以exonuclease限制性內切酶酶切，酶切產物以1%瓊脂糖凝膠電泳，120V 30min后觀察分型。

1.4.3 催乳素水平檢測 使用EDTA真空采血管收集外周血后當天送至廣濟醫院檢驗科。采用免疫磁微粒酶免法檢測患者治療前后血清PRL水平。女性正常血清催乳素的范圍設定為4.1～28.9ng/ml。

1.5 統計學方法

采用SPSS21.0進行統計分析，計算方差和Fisher精確檢驗值，P＜0.05認為差異具有統計學意義。統計分析工作由上?？道栳t學檢驗所有限公司協助完成。

2.結果

2.1 女性首發精神分裂癥患者接受利培酮治療前后催乳素水平比較

本研究入組病例在接受利培酮治療8周后，血清催乳素水平較用藥前顯著升高（見圖1），這與之前的研究結果一致[6-7]。

2.2 Taq1A基因分型及治療前后血清PRL水平比較

28例患者中Taq1A 3種基因型分布情況：A1/A1基因型9例，A1/A2基因型19例，A2/A2基因型 0 例。初始泌乳素水平在A1和A2基因型之間無差別（圖1A）；終期泌乳素水平在A1/A2基因型中高于A1/A1，但差異無統計學意義（P=0.065＞0.05，圖1B）；攜帶A1/A2基因型的患者服用利培酮后，血清泌乳素水平升高幅度遠高于A1/A1基因型的患者，平均變化水平2倍，差異顯著P=0.008＜0.05（圖1C）。根據泌乳素變化率將患者分成三組，變化率小于50%，50%～200%以及200%以上。催乳素變化率=（催乳素終期-催乳素初始）/ 催乳素初始值。Fisher精確檢驗表明A1/A2基因型患者服用利培酮后血清泌乳素變化率更高（P=0.013＜0.05）。該結果表明患者接受利培酮治療后催乳素升高水平在Taq1A不同基因型患者之間具有顯著差異，見表1。

圖1：A圖Taq1A不同基因型初期泌乳素水平對比；B圖為Taq1A不同基因型終期泌乳素水平對比；C圖為Taq1A不同基因型泌乳素終期與初期差值對比。

表1 Taq1A不同基因型血清PRL水平比較（±s）

表1 Taq1A不同基因型血清PRL水平比較（±s）

PRL（mIU/L）A1/A1（n=9）A1/A2（n=19）FP治療前1080.0±600.0755.0±230.01.910.18治療后2030.0±680.02910.0±580.03.720.065治療前后差值950.0±460.02160.0±580.08.110.0085

2.3 A-241G基因分型及治療前后血清PRL水平比較

28例患者中A-241G3種基因型分布情況：A/A基因型19例，A/G基因型9例，G/G基因型0例。患者初始泌乳素水平在A/A和A/G基因型之間無顯著差別；終期泌乳素水平在A/G基因型患者中顯著高于A/A基因型患者（P＜0.05）；而A/A和A/G基因型患者接受利培酮治療后血清泌乳素變化水平沒有顯著差異（P＞0.05）（見圖2）。該結果說明患者接受利培酮治療后催乳素升高水平與A-241G基因多態性可能無關（表2）。

圖2：A圖A-241G不同基因型初期泌乳素水平對比；B圖為A-241G不同基因型終期泌乳素水平對比；C圖為A-241G不同基因型泌乳素終期與初期差值對比。

表2 A-241G不同基因型血清PRL水平比較（±s）

表2 A-241G不同基因型血清PRL水平比較（±s）

PRL（mIU/L）A/A（n=19）A/G（n=9）FP治療前780.0±219.01030.0±640.01.090.30治療后2320.0±520.03280.0±880.04.480.044治療前后差值1540.0±500.02250.0±1060.02.270.144

3.討論

近年來，越來越多的研究表明抗精神病藥物阻斷DRD2受體是治療精神分裂癥的主要機制之一，DRD2受體的基因多態性可以影響抗精神病藥物的療效和副反應[8]。López-Rodríguez 等對健康志愿者的研究顯示DRD2受體Taq1A多態性與抗精神病藥物導致的PRL分泌相關[9]。而Nagai等研究了DRD2基因（Taq1A和-141C ins/del）多態性與阿立哌唑治療過程中泌乳素濃度之間的關系，結果顯示，DRD2基因多態性與阿立哌唑所致催乳素濃度變化并沒有關聯[10]。因此DRD2基因的多態性與血清催乳激素濃度變化的相關性具有一定的爭議。利培酮作為臨床常用的抗精神病藥物，其主要副反應是高催乳素血癥。關于利培酮所致的PRL升高和DRD2受體基因多態性的相關性研究不多，國內研究更少，且各項研究結果不一致。

本研究中，結果顯示DRD2 Taq1A的基因多態性位點與利培酮治療患者前后的血清催乳素差異具有統計學意義，這表明DRD2 Taq1A的基因多態性與利培酮治療所導致的女性高催乳素血癥存在相關性。這與Chadi A等研究結果相一致[9]，但與喬屹等研究結果不同[6]。這可能是由于研究人群不同（本研究為女性患者）或者樣本量較少造成的。而DRD2 A-241G的基因多態性位點與利培酮治療患者前后的血清催乳素差異無統計學意義，這表明DRD2 A-241G的基因多態性可能與利培酮所致的女性高催乳素血癥無關，該結果與Chadi A等研究結果不一致[6]。這可能是由于種族差異造成的，不同種族甚至同一種族不同亞群間也存在一定的遺傳差異，但由于該研究樣本量較少， 研究結果需要進一步驗證。

另外我們也必須考慮到，作為數量性狀，血液中催乳素水平必然是受到多個基因、多個位點的共同調控的。根據PharmGKB數據庫（https://www.pharmgkb.org/）提供的數據，DRD2/ANKK1基因的rs1800497位點，MC4R基因的rs489693位點，DRD2基因的rs1799978位點，UGT1A1基因的rs10929302位點、rs1976391位點、rs887829位點等，其不同基因型也和服用利培酮之后的血催乳素水平升高程度有關聯。因此，我們將來需要更加嚴謹細致的實驗設計，將這些因素都納入考慮之中。

本研究揭示了中國漢族女性患者在接受利培酮治療后催乳素水平與DRD2受體基因多態性之間的相關性，這對于我國女性精神分裂癥患者利培酮的臨床用藥具有一定的指導意義。