EpCAM在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移預(yù)后關(guān)系

吳海喬 邵 威 胡君程 楊冰洪

中國人民解放軍第一七四醫(yī)院病理科，福建省廈門市 361003

非小細(xì)胞肺癌約占肺癌的85%，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已發(fā)生全身轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良，病死率高，ⅢA期、Ⅳ期患者5年生存僅為5%和1%，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1]。經(jīng)血循環(huán)和淋巴結(jié)播散是肺癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移在內(nèi)的多臟器轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，檢測(cè)有效指標(biāo)篩選出發(fā)生轉(zhuǎn)移的高危患者對(duì)預(yù)測(cè)遠(yuǎn)期效果和指導(dǎo)臨床治療具有重要意義[2]。上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM)基因定位于染色體2p21，是相對(duì)分子量40 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白，其編碼的糖蛋白具有表皮細(xì)胞黏附分子功能，參與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞增殖等多種生物學(xué)功能[3]。相關(guān)研究[4-5]顯示，EpCAM過表達(dá)與乳腺癌、胃癌等多種癌癥的轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，目前國內(nèi)尚未見非小細(xì)胞肺癌EpCAM表達(dá)的相關(guān)報(bào)道。本研究對(duì)2011年2月—2013年2月在我院經(jīng)病理確診并手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本進(jìn)行研究并對(duì)患者進(jìn)行隨訪，探討EpCAM在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及其與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移預(yù)后關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年2月—2013年2月在我院經(jīng)病理確診并手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理證實(shí)符合非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，病理診斷為肺腺癌；(2)首次診斷，既往未行放療、化療等抗癌治療；(3)均由同一組醫(yī)師行胸腔鏡下肺癌根治術(shù)；(4)TNM分期[6]Ⅰa～Ⅰb期；(5)患者對(duì)研究知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；(2)合并其他部位原發(fā)惡性腫瘤者；(3)患者依從性差，明確拒絕隨訪者。共納入非小細(xì)胞肺癌患者126例，其中男74例，女52例；年齡32～73歲，平均年齡(53.72±11.47)歲。

1.2 研究方法 (1)免疫組化法檢測(cè)EpCAM表達(dá)：采用福爾馬林常規(guī)固定24h，酒精脫水，石蠟包埋，采用2mm芯片針，以組織芯片儀，在腫瘤組織、癌旁組織和正常肺組織取材，按預(yù)先做好的病例數(shù)目，在模板蠟塊中進(jìn)行組織列陣，然后對(duì)組織芯片蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片，厚度4μm，40℃裱片，50℃烤片后37℃恒溫箱中過夜，常溫保存?zhèn)溆谩２捎妹庖呓M化法檢測(cè)組織中EpCAM表達(dá)，檢查程序?yàn)槊撓灐⒃偎⒖乖迯?fù)、去除內(nèi)源性過氧化物酶、封閉、一抗反應(yīng)(1∶100)、二抗反應(yīng)和顯色(按Dakocytomation Envision+TM System HRP試劑盒說明書進(jìn)行操作)、蘇木精復(fù)染細(xì)胞核、中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果，判定標(biāo)準(zhǔn)：EpCAM表達(dá)部位在細(xì)胞膜，棕黃色顆粒沉著，400×光鏡至少觀察至少5個(gè)視野，按陽性細(xì)胞百分比作為判定標(biāo)準(zhǔn)：<5%為陰性(-)，5%～25%為+，26%～50%為++，>51%為+++。(2)隨訪：對(duì)所有患者進(jìn)行定期隨訪，隨訪計(jì)劃為2年內(nèi)為3個(gè)月復(fù)查1次，2年后6個(gè)月隨訪1次。未能按時(shí)返院復(fù)查者用電話隨訪。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t法，計(jì)數(shù)資料采用率或百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用Radit分析，生存期比較采用KM曲線Log-rank分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中EpCAM表達(dá)情況 肺癌組織EpCAM表達(dá)陽性率高于正常組織和癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中EpCAM表達(dá)情況

2.2 非小細(xì)胞肺癌患者遠(yuǎn)期預(yù)后與EpCAM表達(dá)的相關(guān)性 EpCAM陰性患者生存率和中位生存時(shí)間均高于陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2和圖1。

表2EpCAM表達(dá)與5年生存率和中位生存時(shí)間關(guān)系

圖1不同EpCAM表達(dá)患者生存曲線比較

2.3 EpCAM表達(dá)與患者轉(zhuǎn)移的關(guān)系 EpCAM陰性患者5年內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均低于EpCAM陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3EpCAM表達(dá)與患者轉(zhuǎn)移的關(guān)系[n(%)]

3 討論

絕大多數(shù)肺癌患者死于癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，尋求影響肺癌轉(zhuǎn)移的基因，控制轉(zhuǎn)移，可顯著提高肺癌患者的生存期限和生活質(zhì)量。EpCAM屬黏附分子家族，是由腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)1基因編碼的單次跨膜蛋白，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附、介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移、增殖、分化等功能[7]。生理情況下，EpCAM表達(dá)于除鱗狀上皮之外的所有正常上皮，多表達(dá)于細(xì)胞間緊密連接處，結(jié)締組織和造血系統(tǒng)來源的細(xì)胞幾乎不表達(dá)EpCAM[8]。

研究[9]顯示，EpCAM過表達(dá)可上調(diào)癌基因C-myc和周期素A、E，加快細(xì)胞周期促進(jìn)細(xì)胞增殖。在腫瘤細(xì)胞中，EpCAM過表達(dá)可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖活性，提高腫瘤細(xì)胞的侵襲性，下調(diào)EpCAM表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[10]。近年來的研究[11]顯示，EpCAM是Wnt-β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的靶基因，被認(rèn)為是腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，具有干細(xì)胞功能的特征。魯明典等研究顯示，胃癌組織EpCAM的陽性表達(dá)率為92.3%，而正常組織陽性率僅為13.9%[12]。黃宇珊[13]研究顯示，EpCAM在胃癌中高表達(dá)，且與腫瘤浸潤程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和組織分化程度呈正相關(guān)，與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。Went等[14]對(duì)3 347份組織的研究顯示，EpCAM在食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌均達(dá)到或接近100%，在乳腺癌中表達(dá)為73%，而在淋巴瘤中無表達(dá)。體外研究[15]顯示，siRNA下調(diào)EpCAM表達(dá)可抑制胃癌、哈癌、舌鱗狀細(xì)胞癌的黏附、浸潤和遷移。Zhou等[16]研究顯示，EpCAM是轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1的下游靶基因，過表達(dá)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1可增強(qiáng)EpCAM表達(dá)，增強(qiáng)肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，與預(yù)后不良相關(guān)。

本研究中，肺癌組織EpCAM表達(dá)陽性率高于正常組織和癌旁組織，EpCAM陰性患者5年內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率均低于EpCAM陽性患者，EpCAM陰性患者生存率和中位生存時(shí)間均高于陽性患者，結(jié)果提示EpCAM在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，且與Ⅰ期非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后遠(yuǎn)期轉(zhuǎn)移和生存相關(guān)，提示干擾EpCAM功能可能是非小細(xì)胞肺癌的新治療靶點(diǎn)。