CEACAM 5與PCNA在唾液腺腺樣囊性癌中的表達及與預后的關系

馬 賽 安 峰 劉振麗 張 璇 劉 博 張 慧

唾液腺腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma，ACC）是口腔頜面外科常見的一類生長緩慢的惡性腫瘤。但由于腫瘤細胞容易沿著或圍繞神經及血管生長，故患者早期容易出現疼痛、面癱等癥狀，故ACC 備受臨床關注。癌胚抗原相關細胞黏附分子（CEACAMs）是對一組同源性的哺乳動物免疫球蛋白的統稱，屬于免疫球蛋白基因超家族，研究證實其家族成員在全身多個系統的惡性腫瘤組織中均具有較高的檢測價值，對評估腫瘤的生物學活性及腫瘤患者的預后有較高的指導意義[1～3]。本研究通過免疫組織化學法檢測CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中的表達，并分析兩者的相關性及其與臨床預后的關系，以期為早期評估唾液腺ACC 的惡性程度和判斷預后提供相關依據。

資料和方法

1.研究對象：把2005 年6 月～2015 年8 月河北北方學院附屬第一醫院病理科常規病理學檢查證實的54 例原發性唾液腺ACC 患者的組織標本作為實驗組。所有患者術前均未接受放療、化療及免疫治療等其他治療，且均有完整的臨床病理資料及術后隨訪資料。另取唾液腺多形性腺瘤（salivary gland pleomorphic adenoma，SPA）標本及癌旁正常唾液腺組織各30 例作為對照組。

2.試劑及實驗方法：鼠抗人CEACAM 5 單克隆抗體購于PTG 公司，鼠抗人PCNA 單克隆抗體購自R&D 公司，SP 試劑盒及DAB 顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。將實驗組和對照組蠟塊分別切成3～4 微米的切片，常規脫蠟至水，0.01MPBS 沖洗5min×3 次，放入枸櫞酸溶液中熱修復，一抗CEACAM 5 和PCNA 抗體滴度分別為1：500、1：200，以后按SP 試劑盒說明書操作，蘇木素復染，常規脫水，中性樹脂封片。

3.結果判定：細胞質或細胞膜上出現顆粒狀棕黃色為CEACAM 5 陽性細胞、細胞核內出現顆粒狀黃色或棕色為PCNA 陽性細胞。以細胞染色程度及染色細胞百分率來對標本做出判定結果評定。染色程度：基本無色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3 分；再按陽性細胞百分率評分：陰性為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分。染色程度得分與陽性細胞百分率的乘積為免疫組化最后的評分：0～1 分為陰性（-），2～3 分為弱陽性（+），4～6 分為陽性（++），6 分以上為強陽性（+++），將陰性和弱陽性表達定義為陰性組，陽性和強陽性表達定義為陽性組。

4.隨訪及預后：所有患者的隨訪時間均以術后第2 天開始統計。失訪患者的隨訪時間以患者最后一次來院復查時間為準。本研究最后觀察日期為2019 年6 月。

5.統計學方法：運用SPSS17.0 對數據進行統計學分析，用陽性率計數資料表示，采用χ2檢驗，相關分析采用Spearmen 檢驗、生存數據采用Kaplan-Meier 分析并繪制生存曲線，應用Log-rank檢驗差異性，P＜0.05 為差異有統計學意義。

結果

1.CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組、SPA組及癌旁正常唾液腺組織中的表達。

在唾液腺ACC 組、SPA 組及癌旁正常唾液腺組中，CEACAM 5 與PCNA 分別呈棕黃色顆粒狀表達于細胞的細胞質和細胞核中（圖1～6）。唾液腺ACC組、SPA 組及癌旁唾液腺組中CEACAM 5 和PCNA 陽性率分別為62.96%（34/54）、30%（9/30）、23.33%（7/30） 和55.56%（30/54）、33.33%（10/30）、16.67%（5/30），三組相比較，差異均有顯著性（P＜0.01），見表1。

表1 CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組、SPA 組及癌旁正常唾液腺組織中的表達（倒數，%）

2.CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中的表達及與臨床病理特征的關系。

實性型唾液腺ACC 中CEACAM 5 與PCNA 陽性表達率均明顯高于腺樣/管狀型（P＜0.01），TNM分期Ⅲ+Ⅳ期者CEACAM 5、PCNA 陽性表達率均明顯高于唾液腺ACC Ⅰ+Ⅱ者（P＜0.01）；有轉移者CEACAM 5、PCNA 陽性表達率均明顯高于無轉移者（P＜0.05）；有神經侵犯者CEACAM 5、PCNA 表達陽性率均明顯高于無神經侵犯者（P＜0.01）。CEACAM 5 和PCNA 在唾液腺ACC 組中不同年齡、性別、部位的陽性表達率無顯著性差異（P＞0.05，表2）。

表2 不同病理特征的涎腺ACC 中CEACAM 5、PCNA 的表達（例數，%）

圖1 CEACAM 5 在ACC 中的表達（SP×200）

圖2 PCNA 在ACC 中的表達（SP ×200）

圖3 CEACAM 5 在SPA 中的表達（SP ×200）

圖4 PCNA 在SPA 中的表達（SP ×200）

圖5 CEACAM 5 在正常唾液腺組織中的表達（SP ×200）

圖6 PCNA 在正常涎腺組織中的表達（SP ×200）

3.唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 表達的相關性。

唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 均陽性表達者28 例，均陰性表達者18 例。CEACAM 5和PCNA 的表達呈正相關（rs＝0.703，P＝0.000）（表3）。

表3 CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 組中表達的相關性

4.唾液腺ACC 組中CEACAM 5 與PCNA 的表達對臨床預后的影響。

54 例唾液腺ACC 患者隨訪時間為22～104 個月，平均隨訪64 個月，失訪7 例，其中因ACC 因素死亡者13 例，死于其他原因者3 例。所有隨訪患者的病理標本中CEACAM 5、PCNA 表達陽性者術后平均生存時間分別為57.764±1.314 個月、57.950±1.513 個月，中位生存時間分別為59.000±1.919 個月、58.000±1.891 個月；CEACAM 5、PCNA 表達陰性者術后平均生存時間分別為87.316±2.701 個月、84.429±3.151個月，中位生存時間為89.000±0.430 個月、89.000±0.445 個月，CEACAM 5 與PCNA 表達陰性者的生存時間均明顯長于陽性者表達（P＝0.000、P＝0.000），（圖7、8）。

圖7 CEACAM 5 陽性/陰性表達組生存曲線

圖8 PCNA 陽性/陰性表達組生存曲線

討論

CEACAM 5 蛋白是CEACAM 5 基因（又稱為CD66e）的表達產物，具有七條特征性的細胞外Ig 鏈和一個葡萄糖磷脂酰肌醇鏈，其域結構是N-A1-B1-A2-B2-A3-B3，它在正常組織內主要作為細胞粘附分子通過嗜同種鏈接和嗜異種鏈接介導細胞間接觸[4]。而在惡性腫瘤中，CEACAM 5 基因是一種重要癌基因。研究發現，CEACAM 5 是腫瘤細胞分化和增殖的重要調節分子，其表達水平的增高破壞了細胞極性和正常組織結構，阻礙細胞的分化成熟，并且通過其抗失巢凋亡的功能影響惡性腫瘤的分化和侵襲潛能[5～8]。另有研究發現[9]，CEACAM 5在腫瘤細胞內表達的部位不同所代表的意義也不盡相同，細胞膜陽性表達可能是癌前病變的標志，而細胞質陽性表達則對腫瘤的侵襲和轉移有指向作用。茹國慶等人[10]研究發現CEACAM 5 在胃癌中的表達水平與患者的生存時間呈負相關。既往對CEACAM 5 的研究主要集中在胃腸、乳腺、肺等上皮性腫瘤，而CEACAM 5 是否對唾液腺ACC 的診斷與預后評估發揮作用，國內少有報道。本研究結果顯示唾液腺ACC 中CEACAM 5 的表達明顯高于對照組，這可能是和腫瘤的惡性程度高、浸潤性和轉移潛能強有關。此外，研究結果還顯示CEACAM 5陰性表達患者的生存時間明顯長于陽性表達患者。這說明CEACAM 5 在唾液腺ACC 中的表達水平可能對評估腫瘤的惡性程度及預后有一定指導意義。

惡性腫瘤的增殖活性越強其惡性程度往往越高。因此，臨床上將評估腫瘤細胞的增殖活性作為腫瘤組織學分級的重要依據。PCNA 是一種僅存在于增殖期細胞內的多肽，PCNA 的表達水平可以反映細胞增殖能力和所處的細胞周期。目前，經常通過聯合檢測目標因子與PCNA 在腫瘤組織中的表達水平及兩者之間的相關性來評價目標因子對腫瘤增殖的影響[11～14]。本研究結果證實在唾液腺ACC 中PCNA 的表達水平明顯高于對照組，且表達水平與ACC 的惡性程度、浸潤性、轉移潛能呈正比，且PCNA 陽性表達患者的生存時間明顯短于陰性患者。說明PCNA 陽性表達患者預后較差，這和PCNA對其他系統惡性腫瘤患者預后的影響一致[15～17]。本研究結果還顯示唾液腺ACC 中CEACAM 5 與PCNA 的表達呈正相關，這說明CEACAM 5 對腫瘤的增殖起到調控作用，這種調控的機制可能是CEACAM 5 作為上游或下游因子參與到了PCNA調控增殖的通路當中。

綜上所述，唾液腺ACC 中CEACAM 5、PCNA高表達可能預示著腫瘤惡性程度高、侵襲性強、轉移率高、預后差。但CEACAM 5 與PCNA 在唾液腺ACC 中調控增殖的具體機制及方式，有待進一步研究，從而為唾液腺ACC 的精確診斷、分子靶向治療和預后評估提供科學依據。