MicroRNA-7-5p調控p53表達對非小細胞肺癌增殖及侵襲能力的影響

（云南省第二人民醫院 腫瘤科，云南 昆明 650021）

非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）在肺癌中的比例約為85%，并且67%肺癌患者年齡≥65歲[1-2]。人類抑癌基因p53的失活能夠改變其對細胞生長、凋亡和DNA修復的調控作用，從而轉變為癌基因并對腫瘤形成起重要作用[3-4]。在p53基因的調控作用中，microRNA-7-5p（miR-7-5p）能夠對其起到正向作用[5]。本研究以人NSCLC細胞株NCI-H1975作為研究對象，深入剖析miR-7-5p對NCI-H1975增殖、侵襲能力的干擾。

1 材料與方法

1.1 試劑與細胞

肺癌細胞株NCI-H1975購自中國科學院細胞庫，胎牛血清購自美國Gibco公司，鏈霉素、青霉素及胰蛋白酶購自美國HyClone公司，DMEM高糖培養基、細胞裂解液及MTS細胞增殖檢測試劑盒購自南京凱基生物科技有限公司，Trizol試劑、PCR引物和脂質體Lipo fectamine? 2000購自美國Invitrogen公司，實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）試劑盒購自日本TaKaRa公司，p53抗體購自美國Santa Cruz公司，雙熒光素酶檢測報告系統試劑盒購自北京普洛麥格生物技術有限公司。miR-7-5p等引物序列由上海吉瑪公司合成。

1.2 細胞培養

NCI-H1975培養于含1%鏈霉素、青霉素和10%胎牛血清的高糖DMEM中，并置于5%二氧化碳CO2、37℃恒溫環境中培養，待細胞生長至對數期，即融合度達80%左右時進行傳代培養，若未達到傳代密度，則每2天更換新鮮培養基。

1.3 熒光素酶活性檢測

按1×106個/孔將NCI-H1975細胞鋪板于6孔板中，培養24 h后均進行轉染。轉染中使用了2種螢火蟲熒光素酶的質粒載體，分別是沒有表達作用的pMIR-report-3'UTR非突變體和具有表達作用的pMIR-report-3'UTRm突變體，兩者在實驗中被分別設置到不同的共轉染細胞作為對照。此外，質粒采用的是具有表達海腎熒光素酶的pRL-TK質粒。……