TGF-β通過Lnc-ATB促進(jìn)食管癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

魯之中，李軍民，胡云芝，李曉輝，李衛(wèi)，姜富國，李帥，劉學(xué)慶

（焦作市人民醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科，2.兒科，3.腫瘤外科，河南 焦作 454002；4.重慶醫(yī)科大學(xué) 公共衛(wèi)生與管理學(xué)院，重慶 400016）

食管癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，對(duì)健康危害極大[1]。隨著醫(yī)學(xué)及生命科學(xué)的發(fā)展，食管癌發(fā)病機(jī)制及治療靶點(diǎn)的研究已成為醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）是一組新發(fā)現(xiàn)的可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的TGF超家族，其在腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[2-3]。然而在食管癌細(xì)胞中TGF-β所發(fā)揮的作用及機(jī)制目前仍不完全清楚。本研究擬深入探討TGF-β在食管癌的功能及機(jī)制，為進(jìn)一步揭示食管癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

食管癌細(xì)胞系EC9706（中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫），RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司），Lnc-ATB siRNA及對(duì)照（廣州銳博科技有限公司），Trizol裂解液（美國Sigma公司），TGF-β（深圳百恩維生物科技有限公司）；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑（美國Invitrogen公司），Transwell小室（德國Millipore公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染用含10% Gibco胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)食管癌細(xì)胞系EC9706，溫度為37℃，二氧化碳CO2濃度為5%，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至70%左右的融合度后，將5μl Lnc-ATB-siRNA及Lnc-ATB對(duì)照經(jīng)250μl LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)入EC9706細(xì)胞中，將轉(zhuǎn)染后的EC9706細(xì)胞分為L(zhǎng)nc-ATB-siRNA組及Lnc-ATB-NC組。

1.2.2 Lnc-ATB表達(dá)水平檢測(cè)待食管癌細(xì)胞加入10 ng/ml TGF-β，將給予TGF-β處理的細(xì)胞作為TGF-β組，未給予TGF-β處理的細(xì)胞作為對(duì)照組。48 h后，收集兩組細(xì)胞，用Trizol裂解細(xì)胞，分別提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模板。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative realtime polymerase chain reaction, qRT-PCR）的反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3 min，95℃變性15 s，59℃退火35 s，共進(jìn)行39個(gè)循環(huán)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。……