低氧對人胃癌細(xì)胞p53異構(gòu)體表達(dá)的影響及意義

潘光敏，申婷婷，陳寧，季萬勝，高志星，代洪生，王津迪

（1.濰坊醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261053；2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 濰坊 261031）

胃癌是我國常見的高發(fā)病率和高死亡率的惡性腫瘤之一，且在消化道惡性腫瘤中居首位[1]。胃癌高死亡率一個很重要的原因是早期發(fā)現(xiàn)的生物標(biāo)志物很少，早期診斷率低。低氧是惡性腫瘤生長的微環(huán)境特征之一。Δ133p53和p53β是p53選擇性表達(dá)的2種常見異構(gòu)體，兩者在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[2]。目前，有關(guān)p53異構(gòu)體在低氧環(huán)境中的報道較少。本實驗利用二氯化鈷CoCl2模擬腫瘤低氧微環(huán)境[3]，觀察低氧對胃癌細(xì)胞生長、遷移的影響，以及p53異構(gòu)體表達(dá)變化。探討p53異構(gòu)體在缺氧誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的作用及分子機制，為篩選胃癌精細(xì)治療的靶分子，以及為臨床早期診斷和治療提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胃癌細(xì)胞株SGC7901由第四軍醫(yī)大學(xué)饋贈，二氧化鈷CoCl2（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），CCK-8（上海翊圣生物科技有限公司），RPMI 1640培養(yǎng)液（美國Hyclone公司），胎牛血清（杭州四季青公司），胰蛋白酶及青鏈霉素混合液（北京索萊寶科技有限公司），Trizol試劑（北京康為世紀(jì)生物科技有限公司），實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）試劑盒（日本東洋紡株式會社），巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（nested reverse transcription-polymerase chain reaction, nRTPCR）擴增試劑（Pre-mix Taq）（北京康為世紀(jì)生物科技有限公司），瓊脂糖（上海YIto企業(yè)有限公司），PCR引物（上海生工生物工程股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI 1640完全培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，100 u/ml青鏈霉素）中，置于5%二氧化碳CO2、37℃飽和濕度培養(yǎng)箱中。……