小兒急性淋巴細胞白血病細胞形態特征與誘導化療反應性的關系研究

朱君

南京醫科大學附屬兒童醫院檢驗科，江蘇南京 210000

急性淋巴細胞白血病指前體B、T 或成熟B 淋巴細胞克隆性異常增殖，是兒童常見腫瘤性疾病，發病與遺傳、環境、感染、免疫缺陷等多種因素有關[1]。 化療是臨床治療該病主要方法， 其中誘導化療指從化療開始至腫瘤完全緩解，以后還需要一段時間的維持緩解以鞏固治療[2]。 對于誘導化療階段， 有學者提出采用強烈抗白血病藥物以提高療效，但存在并發癥發生率高的問題，因此，如何掌握急性淋巴細胞白血病治療強度， 在保證療效的同時減少并發癥，成為研究的關鍵[3]。 近年研究發現，急性淋巴細胞白血病細胞形態對誘導化療反應存在影響， 繼而影響療效及預后[4]，文章現以2016 年4 月—2018 年1 月該院200 例急性淋巴細胞白血病患兒為例進行分析探討，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取該院收治的200 例急性淋巴細胞白血病小兒為研究對象。 納入標準：經細胞形態學、免疫學、遺傳學等綜合檢查確診急性淋巴細胞白血病， 符合WHO 標準及分型；初治病例，行誘導緩解化療；年齡6 個月～3 歲，性別不限；接受骨髓細胞染色檢查與化療隨診；患兒家屬知情同意；倫理委員會批準。 排除標準：合并其他惡性腫瘤、血液疾病、免疫系統疾病，以及嚴重臟器疾病與功能障礙；骨穿禁忌證；臨床資料不全。 入選患兒中，男117 例，女83例；年齡6 個月～3 歲，平均（1.76±0.42）歲；標準危險性淋巴細胞白血病（SR-ALL）177 例，高度危險性淋巴細胞白血病（HR-ALL）23 例。

1.2 方法

1.2.1 細胞形態檢查方法 全部患兒治療前均接受骨髓細胞染色檢查。 以患兒髂前上棘后上方最寬處為穿刺點，常規消毒鋪巾，局部浸潤麻醉，取合適型號的穿刺針垂直進針至骨髓腔，抽吸0.5 mL 骨髓液，常規送檢實驗室，制成骨髓涂片標本，經組織化學染色后，鏡下檢查。 形態學分類和計數參照WHO 前體B 和T 腫瘤細胞標準。觀察細胞胞漿空泡、核仁、凋亡細胞情況，以及有無嗜天青顆粒、偽足等。 空泡計分參照美國兒童腫瘤協作組（CCSG）分期系統，鏡下計數原幼淋巴細胞100 個，觀察細胞胞漿，無空泡記0 分， 有空泡1～2 個記1 分，3～4 個記2 分，5 個及以上記3 分，取總積分錄入。 細胞內核仁表現：細胞核染色質濃聚，核仁不清，或細胞核染色細密、彌散，核仁清晰可見。 凋亡細胞：鏡下計數原幼淋巴細胞300 個，觀察可見細胞質濃縮、染色質凝集、膜包繞的核質凋亡小體，即為凋亡細胞。

1.2.2 誘導緩解化療方法 明確診斷后，予以患兒VDLP 化療方案。 注射用硫酸長春新堿 （H20043326），1.5mg/m2靜滴，1 次/周， 用 藥4 次； 注 射 用 鹽 酸 柔 紅 霉 素（H20083726），30 mg/m2靜滴，1 次/周，SR-ALL 用藥2 次，HR-ALL 用藥3 次； 注射用門冬酰胺酶（H20023613）10 000U/m2靜滴， 隔天1 次，SR-ALL 用藥6 次，HR-ALL 用藥8 次；醋酸潑尼松片（H33021207），每日60 mg/m2，分3次口服，療程28 d，減停7 d。

1.2.3 研究方法 比較觀察治療30 d 時， 不同空泡計分、不同數量細胞內核仁（參照75%未見核仁或不清與）、不同凋亡細胞計數患兒誘導緩解化療的臨床效果。 空泡計分以15 分為臨界，劃分＜15 分和≥15 分比較；細胞內核仁數量參照急性淋巴細胞白血病亞型分型， 劃分＞75%核仁未見或不清晰和≥25%核仁明顯比較；凋亡細胞以百分比20%為臨界，劃分＜20%和≥20%比較。

1.3 腫瘤緩解標準

完全緩解：無貧血、出血、感染及腫瘤細胞浸潤表現；血小板100×109/L 以上，血紅蛋白90 g/L 以上，無幼稚細胞，白細胞計數正常或減低；紅細與巨核細胞系正常，原始細胞加幼稚細胞不超過5%[5]。 部分緩解：上述臨床、血象、骨髓象3 項中1～2 項未達到完全緩解標準，原始細胞加早幼細胞不超過20%。 未緩解：臨床、血象、骨髓象均未達標，原始細胞加早幼細胞超過20%。 該研究以腫瘤完全緩解為反應性最高，未緩解為低反應性。

1.4 統計方法

以SPSS 21.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 空泡與化療誘導反應性

空泡計分＜15 分與空泡計分≥15 分的患兒腫瘤完全緩解率、部分緩解率與未緩解率均有統計學差異，后者化療反應性更高，見表1。

表1 不同空泡計分患兒療效比較[n(%)]

2.2 核仁與化療誘導反應性

≥25%核仁明顯患兒腫瘤完全緩解率高， 未緩解率低，與＞75%核仁未見或不清晰比較差異有統計學意義（P＜0.05），≥25%核仁明顯患兒化療反應性更高，見表2。

表2 不同數量核仁患兒療效比較[n(%)]

2.3 凋亡細胞與誘導化療反應性

凋亡細胞數＜20%患兒腫瘤完全緩解率高于凋亡細胞≥20%患兒， 部分緩解與未緩解率低于凋亡細胞數≥20%患兒，差異有統計學意義（P＜0.05），前者化療反應性更高，見表3。

表3 不同凋亡細胞數患兒療效比較[n(%)]

3 討論

近年，隨著新型抗白血病藥物的研發與使用，以及化療方案的不斷創新與改進， 小兒淋巴細胞白血病的預后得到明顯改善， 但不同患兒對化療藥物及方案的反應性存在差異[6]，明確影響因素，遵循個體化原則治療，對改善小兒預后具有重要意義。

近年研究發現，小兒急性淋巴細胞白血病細胞形態特征對誘導化療反應存在影響， 與小兒預后存在相關性[7]。其中，空泡變性指胞核內出現大小不一的空泡，引起原幼淋巴細胞蜂窩狀或網狀改變，既往被認為是L3 型白血病特征，但近年研究發現，其計分與急性淋巴細胞白血病臨床危險度分型有關，計分不超過15 分者多為中、高危型淋巴細胞白血病，此類患兒病情相對急重，預后欠理想[8]。該研究中， 空泡計分＜15 分患兒誘導化療反應性亦不及15 分及以上患兒理想，與上述文獻觀點有著內在一致性。核仁是負責核糖體組裝與核糖核酸合成的重要細胞組成，在腫瘤細胞中深染，能夠反映細胞蛋白質代謝與核糖核酸合成的活躍度[9]，有研究[10]指出同腫瘤完全緩解時間存在密切相關性，25%以上白血病細胞可見明顯核仁者，30 d 腫瘤完全緩解率達95%， 平均腫瘤完全緩解時間為23.5 d。該次臨床研究中，≥25%核仁明顯患兒腫瘤完全緩解率為92.20%，與上述報道結論相近。凋亡細胞指基因控制下自主有序死亡的細胞[11]，該研究發現，凋亡細胞數占比高的患兒誘導化療反應性明顯要低， 誘導化療完全緩解時間明顯延長。 對于導致這一現象的原因，推測可能原因為，凋亡細胞參與了急性淋巴細胞白血病的啟動過程，誘導更易被侵襲的細胞群體癌變[12]，從而促進腫瘤進展，加重患兒病情，降低化療反應性，具體有待進一步驗證。

綜上所述，不同空泡、核仁與凋亡細胞數的小兒急性淋巴細胞白血病誘導化療反應存在差異， 觀察上述細胞形態特征能夠對該病治療及預后評估提供一定指導，具備參考價值。