前哨淋巴結組織冷凍切片與標準化操作方法的探討

程宇

（浙江大學醫學院附屬第二醫院，浙江 杭州 310008）

0 引言

乳腺癌是一種較為常見的乳腺疾病，據相關研究表明：乳腺癌的發病率約占女性惡性腫瘤總數的10 %，該疾病的發病因與遺傳、年齡有關，好發于婦女絕經期前后，該疾病也會發于男性患者，但數量較少，約占乳腺癌總數的1 %。該疾病不僅嚴重影響患者的心理健康，更威脅了患者的生命健康安全[1]。乳腺癌腋窩淋巴轉移是乳腺癌中較為重要的獨立預后因素，該因素決定了治療方案的最終選擇[2]。特別是在乳腺外科手術范圍不斷精準及縮小的形式下，對腋窩淋巴結的處理成為了當前的主要問題[3]。前哨淋巴結主要是指收納器官或某區域組織淋巴結液的第一站淋巴結，如前哨淋巴結未發生轉移，就不需要對腋窩淋巴結進行清掃[4-5]。因此，如何準確、迅速地對其進行診斷，成為了臨床所需要思考的問題[6-7]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院病理科2018 年7 月至2019 年7 月收治的680 例乳腺癌患者，隨機分為對照組及觀察組，每組各340 例。對照組患者均為女性，年齡24～68歲，平均（38.84±4.53）歲，病程時長3 個月至6年，平均（2.43±0.23）年；觀察組患者均為女性，年齡22～69 歲，平均（38.87±4.52）歲，病程時長4 個月至6 年，平均（2.42±0.25）年。兩組患者一般資料無明顯差異，P<0.05，具有可比性。

1.2 方法

對照組使用術后石蠟切片進行診斷：選取個人綜合素質較高的醫生進行操作，需要使用的相關儀器包括：醫用鑷子、手術刀、紗布、組織脫水機（Therom）、切片機。需要使用的試劑：蘇木精染色液、水溶性伊紅、梯度酒精、二甲苯、石蠟溶液以及10 %福爾馬林溶液。在術后選取患者新鮮前哨淋巴結，放入10 %福爾馬林溶液中臨時固定，后再將組織放入組織脫水機中固定、脫水、浸臘，制成組織蠟塊，切片經HE 染色待用。觀察組則使用冷凍切片進行病理診斷：選取個人綜合素質較高的醫生進行操作，術前對相關儀器進行消毒，需要使用的相關儀器及試劑包括：OCT 包埋劑、1 %鹽酸乙醇分化液、蘇木精染色液、水溶性伊紅及梯度乙醇、恒溫冰凍切片機、玻璃立缸。在術后選取患者新鮮病變組織，大小一般為1.5 cm×1.5 cm×0.4 cm，將其放置于倒有少量OCT 包埋劑的金屬標本托盤上，將其冷凍，冷凍時間分為2 min、5 min、10 min，并切為2 μm、4 μm、6 μm、8 μm 的切片樣本，采用100 mL 95 %乙醇溶液作為固定液，將切好的冰凍切片浸入玻璃立缸，常溫下固定時間為2 min。隨后將固定的切片進行清洗，再加入蘇木精染液染色，染色后用1 %鹽酸乙醇分化液分化并用清水藍化25 s，再加入伊紅染液染色。完成后放入梯度乙醇內脫水，再浸入二甲苯使切片透明，以中性樹膠封片。

1.3 觀察指標

觀察以對照組為標準，觀察不同冷凍時間、不同質量的冷凍切片的診斷準確率。

1.4 統計學方法

運用統計學軟件SPSS 18.0 處理患者資料，計量資料用均數±標準差（±s）表示，計數資料用率（%）表示，采用t和χ2檢驗，以P<0.05 為準，說明差異較大，具有臨床對比價值。

2 結果

2.1 不同冷凍時間下切片診斷正確率對比

以石蠟切片診斷為標準，觀察不同冷凍時間下冷凍切片的準確性，結果表明：冷凍時間為2 min的切片診斷的準確率最高，明顯優于其他兩組，詳情見表1。

表1 不同冷凍時間下切片診斷正確率的對比[n(%)]

2.2 不同質量下切片診斷正確率對比

以石蠟切片診斷為標準，觀察不同質量下冷凍切片的準確性，結果表明：切片厚度為4 μm 時，診斷準確率最高，明顯優于其他兩組，詳情見表2。

表2 不同質量下切片診斷正確率對比[n(%)]

3 討論

冷凍切片在制作過程中對于切片的固定具有較為重要的作用[8]。因此，在選擇切片固定、染色時，需要保持玻片和切片的溫差[9]。如發生切片脫落，應當仔細對情況進行分析，一般情況下，切片脫落主要由以下原因所致：（1）載玻片存在異物；（2）固定液濃度不足；（3）組織壞死細胞過多[10]。對于上述問題，可采取以下處理方式：（1）加強載玻片的清潔工作，避免載玻片被污染；（2）定時更換固定液，如實驗取樣較多時，應當及時更換固定液；（3）在條件允許的情況下多取幾組樣品，或延長切片固定的時間。

通過此次研究發現：不同的冷凍時間以及不同厚度的切片質量均會對前哨淋巴組織冷凍切片的準確率產生影響，因此，我們應當及時探索其規律，選取最為合理的切片質量及冷凍時間，從而增加冷凍切片的診斷確診率。此外，還值得注意的是：除冷凍切片的質量以及冷凍時間，脫片問題以及染色過程及其他問題也需要我們關注。冷凍切片在染色時需要注意蘇木精染液以及固定液的濃度。在染色工作完成后，應對其進行觀察，確保切片合格。

綜上所述，經過研究發現：在前哨淋巴結組織冷凍切片的制作過程中，應當嚴格制作過程，并精準控制冷凍切片的各細節步驟，并將冷凍時間控制在2 min、切片厚度控制在4 μm，以此來提高前哨淋巴組織冷凍切片的準確率。