單雙側原發性乳腺癌HER-2基因擴增差異及與臨床預后的關系分析

董 赟 梅金紅 黃先明 劉志良 黃傳生 吳毓東 孫正魁

乳腺癌在女性惡性腫瘤患病率中位列第一，在歐美一些國家乳腺癌發病率占所有女性惡性腫瘤的25%～30%[1]。近些年我國也成為乳腺癌發病率增速最快的國家之一，2009年我國女性乳腺癌的發病率為21.21/10萬，占所有惡性腫瘤第六位(7.24%)；在女性惡性腫瘤中的發病率為42.55/10萬，占第一位；死亡率為10.24/10萬(為女性第五位)[2-3]。HER-2為人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2)，是1個跨膜的酪氨酸激酶受體，在20%～30%的乳腺癌中呈陽性表達[4]。HER-2與乳腺癌的侵襲性有關，可作為乳腺癌預后的獨立評估因素。雙側原發性乳腺癌(bilateral primary breast cancer，BPBC)是指兩側乳房同時或先后發生獨立的原發性乳腺癌[5-6]，近年隨著乳腺癌診療水平的提高和患者生存率的延長，發病率也在不斷上升，國外發病率報道占同期乳腺癌的1.4%～11.8%[7]，業界對于雙側原發性乳腺癌的預后與單側乳腺癌的預后差異比較一直存有爭議[8-11]。本課題項目試圖應用組織芯片技術及熒光原位雜交(FISH)技術聯合檢測單側原發性乳腺癌、雙側原發性乳腺癌各30例樣本(共90份蠟塊)中HER-2基因的表達情況，探討HER-2基因在雙側原發性乳腺癌與單側乳腺癌患者中的表達差異性，比較雙側原發性乳腺癌與單側乳腺癌患者的預后優劣。

1 材料與方法

1.1 資料

準備2003年1月至2010年1月期間于江西省腫瘤醫院行手術治療的單側原發性乳腺癌、雙側原發性乳腺癌石蠟包埋組織標本各35例(備用，統計各選擇30例)，病例采取抽樣法。均為浸潤性癌(伴或不伴導管內癌成分)，患者均為女性，年齡在28～52歲，均未絕經。根據AJCC臨床分期標準病情均為Ⅱ～Ⅲ期，組織學分級Ⅱ級。所有病例均直接行手術治療，且ECOG體力評分≤1分。所有病例均未接受曲妥珠單抗的治療。

1.2 實驗方法

把乳腺癌樣本蠟塊中的浸潤性癌成分挑選出來，按照10份標本設計2×5的陣列排列做成組織芯片，聯合FISH技術檢測HER-2基因。HER-2基因判讀標準為2014版乳腺癌HER2檢測指南：選擇細胞核大小一致，核的邊界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)染色均一、細胞核無重疊、信號清晰的細胞。隨機計數至少20個浸潤癌細胞核中的雙色信號觀察，觀察時依據情況隨時調節顯微鏡焦距，準確觀察位于細胞核不同平面上的信號以免遺漏。同時查閱每例患者3年總生存率，制表、并記錄。

1.3 統計學方法

應用SPSS 19.0軟件中χ2檢驗進行數據統計及分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

60例共90份普通切片，IHC檢測HER-2蛋白表達陽性(3+)13例、可疑陽性(2+)42例、陰性(1+或0)35例；利用組織芯片進行FISH檢測結果顯示，HER-2擴增的有11例，無擴增的為79例(表1)。IHC和FISH結果符合率為87.7%(79/90)，兩者相關(P<0.01)，利用組織芯片檢測雙側乳腺癌標本更加直觀。

表1 60例單雙側原發性乳腺癌HER-2的IHC和FISH檢測結果比較

本實驗檢測結果顯示，30例單側乳腺癌患者中HER-2基因陽性患者為9例，擴增率30%，HER-2基因陰性患者21例(70.0%)；30例雙側原發性乳腺癌患者中HER-2基因陽性患者為2例(均為單側)，擴增率為3.3%，HER-2基因陰性患者58例(96.7%)。經統計學分析，χ2=10.91、P<0.01，有顯著性差異。

30例單側乳腺癌患者3年生存率為73%，30例雙側原發性乳腺癌患者3年生存率為93%；χ2=4.32、P<0.05，有顯著性差異。

3 討論

近年雙側原發性乳腺癌(bilateral primary breast cancer，BPBC)的發病率不斷上升，可能歸因于患者生存期延長引起的危險因素暴露時間延長。對于雙側原發性乳腺癌的預后，一些研究顯示預后差于單側乳腺癌[12]；而另一些研究認為預后與第一原發癌灶有關，對側乳腺癌的發生不會降低患者生存率[13]。HER-2基因是乳腺癌的1種重要的生物學標志物，其擴增決定患者需要接受曲妥珠單抗的治療[14]。早在20世紀80年代，人們認識到HER-2基因對預后的價值[15]，2000年美國病理學家協會宣布，HER-2對疾病的預后和預測是有意義的[16]。HER-2擴增和過度表達會啟動信號的級聯反應，表現為惡性腫瘤的侵襲行為，分裂加快、侵襲性增強[17]。HER-2在乳腺癌發生發展預后評估中起重要作用，是乳腺癌疾病進程中最有用的預后評價指標之一[18]。目前關于HER-2基因與雙側原發性乳腺癌的相關性研究非常少，而且結果都不一致，美國Anderson癌癥中心Newman等[13]檢測雙側原發性乳腺癌與單側乳腺癌各70例中HER-2基因表達情況，結果顯示無顯著差異性。而Safal等[19]對照研究21例雙側原發性乳腺癌和101例單側乳腺癌HER-2表達情況，結果顯示雙側原發性乳腺癌高于單側乳腺癌。

本此研究顯示HER-2基因擴增比率在單側原發性乳腺癌患者中所占比率高于雙側原發性乳腺癌患者，雙側原發性乳腺癌患者的預后優于單側原發性乳腺癌患者。我們分析所有患者均未接受靶向藥物曲妥珠單抗治療的情況下，HER-2基因擴增的這一部分單側乳腺癌患者預后差，在尚未罹患健側乳腺癌之前即發生了死亡的不良事件，從而導致在雙側原發性乳腺癌患者中HER-2陽性的檢出率比在單側原發性乳腺癌患者中HER-2陽性檢出率更低。3年生存率研究數據顯示，雙側原發性乳腺癌患者的預后優于總體單側原發性乳腺癌患者，也因為HER-2基因擴增的單側原發性乳腺癌患者尚未罹患健側乳腺癌即已發生了死亡的不良事件。此次實驗提示熒光原位雜交(FISH)法聯合組織芯片技術能更加直觀地檢測到HER-2基因擴增，可廣泛應用于臨床檢驗中；原發性雙側乳腺癌患者的總生存率(OS)高于單側原發性乳腺癌，HER-2基因擴增可作為乳腺癌患者預后的獨立評估指標。