一種過硫酸氫鉀復合物粉的消毒性能評價

楊俊蕓，黃恩龍，胡軍，劉起軍*

（1.四川省內江市食品藥品檢驗檢測中心，四川 內江 641000；2.四川恒通動保生物科技有限公司，四川 內江 641000）

過硫酸氫鉀復合物粉以過硫酸氫鉀為主要成分，輔以增效劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑和有機酸等輔料，含有效氯不低于10.0%。該產品具有強酸性，其pH值在2.5左右，可以殺滅多種病原菌，其代謝產物不會對人類和環(huán)境帶來影響[1]；該產品還具有強氧化性，溶解后產生高能量、高活性的小分子自由基、活性氧等衍生物[2]，通過循環(huán)鏈式反應系統(tǒng)破壞細菌細胞膜的通透性，所產生的自由基等衍生物作用于DNA、RNA 的磷酸二酯鍵，干擾病原體DNA 和RNA 的合成[3-4]。過硫酸氫鉀復合物粉也具有廣譜性，既克服了H2O2等普通氧化劑氧化能力不強且具有選擇性氧化的缺點，又避免了鹵素類消毒劑有毒副產物生成而對人體健康有危害的風險。

“全衛(wèi)效康”是四川某動保公司聯(lián)合國內科研機構開發(fā)的一種長效過硫酸氫鉀復合物粉消毒劑。為觀察驗證其消毒效果和方便臨床使用，筆者開展了本次試驗。

1 材料

1.1 藥品

1.1.1 “全衛(wèi)效康”（過硫酸氫鉀復合粉），粉紅色顆粒狀粉末，有檸檬氣味，有效氯含量不低于10.0%。四川某動保公司生產，批號：20190701。

1.1.2 “衛(wèi)可”（過硫酸氫鉀復合粉），粉紅色顆粒狀粉末，有檸檬氣味，有效氯含量不低于10.0%。杜邦公司生產，批號：1706BA0210。

1.2 供試菌株 大腸桿菌（8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、枯草芽孢桿菌黑色變種（ATCC9372），均由中國普通微生物菌種保藏管理中心提供。

1.3 標準培養(yǎng)基 普通肉湯培養(yǎng)基，普通瓊脂培養(yǎng)基，參照藥典[5]自配。

1.4 試劑 稀釋液[6]：0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（PBS）、生理鹽水、蒸餾水，自制；中和劑：0.5%硫代硫酸鈉+1%吐溫-80，用生理鹽水稀釋，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.5 試驗菌懸液的制備[7]開封凍干菌種后，用普通肉湯溶化懸浮菌體，然后劃線接種于適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)18 h，選擇典型的單個菌落進行傳代培養(yǎng)，傳至3 代后接種到適宜的普通肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)24 h即得菌懸液。

2 方法與結果

2.1 中和劑選擇試驗

2.1.1 試驗菌 大腸桿菌與金黃色葡萄球菌。將制備好的菌懸液用平板計數(shù)法進行細菌計數(shù)，使試驗菌含菌量為1×106～1×107CFU/mL。

2.1.2 方法步驟 試驗共設6個組，第1組：消毒劑+菌懸液；第2 組：（消毒劑+菌懸液）+中和劑；第3 組：中和劑+菌懸液；第4 組：（消毒劑+中和劑）＋菌懸液；第5 組：PBS+菌懸液；第6 組：未接種菌的培養(yǎng)基對照。按順序分別在1～5 組加入相對應的消毒劑（0.25%）、中和劑、消毒劑與中和劑混合液（1∶9）、PBS 各4.5 mL，菌懸液均為0.5 mL，除第2、4 組前二者混合作用10 min 再加入第三者外，其余各組均混合作用10 min，再取出0.5 mL，用生理鹽水等量稀釋后，做細菌培養(yǎng)并計數(shù)。試驗重復3次。

2.1.3 結果判定 當?shù)? 組不長菌，其他各組間細菌數(shù)相差不超過10%，第1 組不長菌或長菌數(shù)遠少于第2組，第2組長菌數(shù)超過100 CFU/mL，根據(jù)中和劑鑒定試驗標準判為所選的中和劑濃度。

2.1.4 試驗結果 0.5%硫代硫酸鈉+1%吐溫-80為所選中和劑濃度，且中和劑及其產物對細菌及培養(yǎng)基無影響。結果見表1。

表1 中和劑選擇試驗結果

2.2 細菌定量消毒試驗[8-9]

2.2.1 方法步驟 將菌液進行活菌計數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5×105～5×106CFU/mL 的菌懸液。將消毒劑用滅菌蒸餾水稀釋成3 個不同濃度，各吸取4.5 mL 分別加入3 個試管內，置于20±2 ℃水浴中。待試管內液體溫度與水浴溫度平衡后，在3個試管中分別加入上述配好的0.5 mL菌懸液，混勻并開始記時。分別于4 個不同間隔時間，各取0.5 mL 菌液混合液移入4.5 mL 中和劑中，混勻，中和10 min，作適當稀釋后進行活菌計數(shù)。陽性對照以洗脫液代替消毒液，按上述步驟同時進行。

2.2.2 結果判斷 按不同稀釋度推算出每個樣本存活菌數(shù)（CFU/mL），按下式計算殺滅率：

式中，Nt為空氣中細菌的自然消亡率；V0與Vt分別為對照組試驗開始前和試驗過程中不同時間點的空氣含菌量；V0′與Vt′分別為試驗組消毒處理前和消毒過程中不同時間點的空氣含菌量；Kt為消毒處理對空氣中細菌的殺滅率，應達到99.9%以上。

2.2.3 試驗結果“全衛(wèi)效康”（1∶400）能在10 min 內殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌黑色變種芽孢，殺菌效果與“衛(wèi)可”（1∶400）相同。結果見表2。

表2 兩種產品不同濃度下的定量消毒試驗結果

2.3 硬水拮抗試驗

2.3.1 方法步驟 將菌液進行活菌計數(shù)，并用稀釋液稀釋成含菌量為5×105～5×106CFU/mL 的菌懸液。將消毒劑用硬水稀釋成3 個不同濃度，各吸取4.5 mL分別加入3個試管內，置于20±2 ℃水浴中。待試管內液體溫度與水浴溫度平衡后，在3 個試管中分別加入上述配好的0.5 mL 菌懸液，混勻并開始記時。分別于4 個不同間隔時間，各取0.5 mL 菌液混合液移入4.5 mL 中和劑中，混勻，中和10 min，作適當稀釋后進行活菌計數(shù)。陽性對照以洗脫液代替消毒液，按上述步驟同時進行。

2.3.2 結果判斷 結果判斷同2.2.2。

2.3.3 試驗結果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”都有很強的抗硬水能力，實驗條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的抗硬水能力一致，硬水對兩種消毒劑殺菌能力的影響不顯著。結果見表3。

表3 硬水條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌性能

2.4 有機物保護試驗[10]

2.4.1 方法 以無菌小牛血清作為有機物代表，在菌懸液中加入小牛血清，使其濃度為10%。通過定量殺菌試驗進行測定，各組試驗至少重復3次，計算不同濃度有機物存在時的殺菌率，并作比較。

2.4.2 試驗結果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”都有很強的抗有機物能力，實驗條件下，“全衛(wèi)效康”（1∶400）的抗有機物能力優(yōu)于“衛(wèi)可”（1∶400），有機物對兩種消毒劑消毒效果的影響不明顯。結果見表4。

表4 有機物條件下“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌性能

2.5 能量試驗[10]

2.5.1 方法步驟 將兩種消毒劑用標準硬水稀釋成3個濃度的消毒液，每個濃度分裝3 mL于無菌試管內，然后分別于第0、10、20 min（第1、2、3次）加入1 mL菌懸液，并于第8、18、28 min分別取20 μL混合液于含中和劑的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管中，一式5份；取2支含5 mL中和產物的營養(yǎng)肉湯管，向其中加入5 μL試驗菌液作為陽性對照。將以上各試驗組與對照組的樣本試管置于37 ℃培養(yǎng)48 h，觀察是否有細菌生長。

2.5.2 結果判定 在第1次和第2次加入菌懸液的5 管樣本中，有2 管或2 管以上不長菌的消毒劑濃度作為最低合格濃度[6]。

2.5.3 試驗結果“全衛(wèi)效康”和“衛(wèi)可”的殺菌效果接近，對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最低合格濃度為0.5%。結果見表5。

表5 "全衛(wèi)效康"和"衛(wèi)可"的能量性能測試對比

2.6 過硫酸氫鉀復合物粉的臨床快速鑒別方法

2.6.1 聞氣味 將藥品溶于水中，應無氯氣釋放或無刺激性氣味；加入大量氯化鈉，應釋放出刺激性氣味（氯氣）。

2.6.2 觀顏色 將藥品兌水，觀察是否能夠長時間不褪色；保持時間越長，說明配方組分越穩(wěn)定。

3 小結

過硫酸氫鉀復合鹽兼顧了氯制劑、氧化劑、酸制劑的三重功效，殺菌譜廣，持續(xù)時間長，副作用小，安全性高[11-12]。該消毒劑成分復雜，主要包括過硫酸氫鉀、硫酸氫二鉀和硫酸鉀等復合物，屬于以硫酸根自由基為基礎的強氧化活性殺菌成分。過硫酸氫鉀復合鹽易溶于水，一旦溶于水即產生豐富的活性氧、羥基自由基等高能量、高活性的小分子物質，能對各種微生物進行破壞和殺滅。

本試驗表明，“全衛(wèi)效康”在定量殺菌、抗硬水和抗有機物等方面與原研單位生產的過硫酸氫鉀復合物粉（衛(wèi)可）基本一致，在某些方面（抗有機物等）甚至優(yōu)于“衛(wèi)可”。