39例兒童傳染性單核細胞增多癥T細胞亞群分析

林曉彥　馮梅　楊一華

[摘要] 目的 探討T細胞亞群檢測對兒童傳染性單核細胞增多癥（IM）的臨床意義。 方法 采用流式細胞儀檢測2018年1～12月我科收治的39例IM患兒和正常對照組外周血T細胞亞群，觀察CD4+、CD8+淋巴細胞的表達數(shù)量和百分比，并對結(jié)果進行比較。IM組又分為肝功能正常組和肝功能異常組，比較兩組結(jié)果。 結(jié)果 （1）IM組患兒CD4+淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，CD8+淋巴細胞百分比明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。（2）肝功能異常組CD4+淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值明顯低于肝功能正常組（P<0.05），CD8+淋巴細胞百分比明顯高于肝功能正常組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。 結(jié)論 外周血T細胞亞群的檢測對兒童傳染性單核細胞增多癥的診斷、預(yù)后判斷和免疫治療具有重要意義。

[關(guān)鍵詞] 兒童;傳染性單核細胞增多癥;EB病毒;T細胞亞群

[中圖分類號] R725.5? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）23-0027-03

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of T cell subsets detection in children with infectious mononucleosis （IM）. Methods Flow cytometry was used to detect the peripheral blood T cell subsets of 39 children with IM and normal controls from January 2018 to December 2018. The expression quantity and percentage of CD4+ and CD8+ lymphocytes were observed. The results were compared. The IM group was further divided into normal liver function group and abnormal liver function group， and the results of the two groups were compared. Results ①The percentage of CD4+ lymphocytes and CD4+/CD8+ in the IM group was significantly lower than that in the control group， and the percentage of CD8+ lymphocytes in the IM group was significantly higher than that in the control group， and the difference was significant（P<0.01）. ②The percentage of CD4+ lymphocytes and the ratio of CD4+/CD8+ in the abnormal liver function group were significantly lower than those in normal liver function group（P<0.05）. The percentage of CD8+ lymphocytes in the abnormal liver function group was significantly higher than that in the normal liver function group（P<0.01）. Conclusion The detection of peripheral blood T cell subsets is of great significance in the diagnosis， prognosis and immunotherapy of infectious mononucleosis in children.

[Key words] Children; Infectious mononucleosis; Epstein-Barr virus; T cell subsets

傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis，IM）是由EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染所致的一種單核巨噬細胞系統(tǒng)增生性疾病，可表現(xiàn)為發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)腫大、眼瞼浮腫和肝脾腫大，多數(shù)患者為良性自限性疾病，預(yù)后良好，少數(shù)患者進展為慢性EB病毒感染、噬血細胞淋巴組織細胞增生癥及惡性腫瘤。EB病毒感染可刺激細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，引起免疫功能的變化，我們通過流式細胞儀對我院兒科2018年1～12月39例IM患兒的T細胞亞群進行分析，深化對疾病發(fā)病機制的認識，為疾病的診斷、危險評估和治療提供幫助，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2018年1～12月共收治急性IM患兒39例，其中男21例，女18例。年齡10個月～10歲，中位年齡3歲。39例患兒均符合IM的診斷標準[1]：滿足下列臨床指標中任意3項：（1）發(fā)熱;（2）咽扁桃體炎;（3）頸淋巴結(jié)腫大;（4）脾臟腫大;（5）肝臟腫大;（6）眼瞼水腫。且滿足下列實驗室指標中任意1項：（1）抗EBV-VCA-IgM和抗EBV-VCA-IgG抗體陽性，且抗EBV-NA-IgG陰性;（2）抗EBV-VCA-IgM陰性，但抗EBV-VCA-IgG抗體陽性，且為低親和力抗體;（3）雙份血清抗EBV-VCA-IgG抗體滴度4倍以上升高;（4）外周血異形淋巴細胞比例≥0.10和（或）淋巴細胞增多≥5.0×109/L。39例IM患兒臨床特征見表1，其中肝功能異常（谷丙轉(zhuǎn)氨酶>40 U/L）22例，肝功能正常17例。同時選取健康體檢兒童30例作為對照組，其中男15例，女15例，中位年齡4歲。兩組兒童年齡和性別構(gòu)成比較，無顯著性差異（P>0.05）。

1.2 方法

抽取兩組兒童早晨空腹靜脈血2 mL，采用乙二酸銨四乙酸抗凝，2 h內(nèi)檢測。取抗凝血標本和鼠抗人單克隆抗體混勻，靜置15 min，用PBS緩沖液洗滌2次，加1 mL PBS上機，在流式細胞儀（Flow cytometry，F(xiàn)CM）上檢測外周血T淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+淋巴細胞）的表達和百分比，流式細胞儀和單克隆抗體試劑盒均購自美國碧迪醫(yī)療器械（上海）有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗;以P<0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 IM組T細胞亞群與對照組比較

IM組患兒CD4+淋巴細胞百分比明顯低于對照組，CD8+淋巴細胞百分比明顯高于對照組，CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，以上指標變化，差異均有顯著性（P<0.01）。見表2。

2.2 肝功能異常組T細胞亞群與肝功能正常組比較

IM組患兒共有22例出現(xiàn)肝功能異常，另外17例肝功能正常，兩組進行比較，肝功能異常組CD4+淋巴細胞百分比明顯低于肝功能正常組，差異具有顯著性（P<0.05）;肝功能異常組CD8+淋巴細胞百分比明顯高于肝功能正常組，肝功能異常組CD4+/CD8+比值明顯低于功能正常組，差異具有顯著性（P<0.01）。見表3。

3 討論

EBV進入人體口腔后先在咽部淋巴組織內(nèi)增殖，然后進入血液導(dǎo)致病毒血癥，繼而累及周身淋巴系統(tǒng)，出現(xiàn)眼瞼浮腫、咽峽炎、淋巴結(jié)腫大及肝脾腫大等癥狀[2]。B細胞表面有EBV抗體，故EBV主要感染B細胞。導(dǎo)致B細胞的表面抗原發(fā)生改變，繼而引發(fā)T細胞防御反應(yīng)，CD4+ T淋巴細胞是輔助性T淋巴細胞，該細胞內(nèi)分子發(fā)生相互磷酸化，激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程[3]，通過分泌白介素-2（Interleukin，IL-2）、IL-4、IL-21等細胞因子，輔助B細胞、細胞毒T細胞、自然殺傷細胞等的激活，CD8+T淋巴細胞就是具有殺傷作用的細胞毒T細胞（Cytotoxic T lymphocyte，CTL），CTL通過分泌穿孔素、γ干擾素、顆粒酶等直接殺傷靶細胞或者誘導(dǎo)靶細胞凋亡[4-5]。本研究顯示，IM患兒CD8+ T淋巴細胞明顯升高，明顯高于正常對照組，而CD4+ T淋巴細胞因為消耗過多，明顯低于正常對照組，CD4+/CD8+比值明顯下降及倒置，這與文獻報道相一致[6-8]。CD8+ T淋巴細胞數(shù)量和活性增加，可以殺滅被感染的B細胞，清除大部分EBV，最終使疾病等到控制，因此大部分IM患兒病程表現(xiàn)為自限性過程[9]。先天性或者獲得性免疫缺陷者，缺乏這種免疫機制，導(dǎo)致B細胞增殖失控，EBV不能得到有效清除，轉(zhuǎn)化成慢性EBV感染，甚至發(fā)展為淋巴瘤及鼻咽癌。對于免疫缺陷者，應(yīng)給予免疫調(diào)節(jié)、免疫過繼支持治療，而抗病毒治療通常無效[10-11]。

CD8+ T淋巴細胞適當升高，有助于病毒的清除和疾病的自限，但過強的免疫反應(yīng)也可造成免疫損傷及臟器功能的損害，出現(xiàn)一系列并發(fā)癥[12]。本研究中，IM組患兒中共有22例出現(xiàn)肝功能異常，另外17例肝功能正常，兩組進行比較，肝功能異常組CD4+淋巴細胞百分比、CD4+/CD8+比值明顯低于肝功能正常組，CD8+淋巴細胞百分比明顯高于肝功能正常組，提示過強的免疫應(yīng)答造成了肝功能的損害，這與文獻報道相一致[13，14]。過強的免疫反應(yīng)還可并發(fā)胃腸道出血、心肌炎、腎炎、自身免疫性溶血、免疫性血小板減少等，對于重癥患者，短療程應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療可明顯減輕癥狀[15，16]。

少數(shù)IM患兒CD8+淋巴細胞和自然殺傷細胞存在免疫缺陷，EBV感染可刺激這些細胞異常增生，產(chǎn)生高細胞因子血癥及巨噬細胞活化，從而造成廣泛的組織損傷，出現(xiàn)噬血細胞組織細胞綜合征（Hemophagocytic lymphohistiocytosis，HLH），預(yù)后極差，病死率高[17]。這些患者也往往存在基因突變，包括穿孔素基因（PRF1）、突觸融合蛋白11基因（STX11）、X連鎖凋亡抑制蛋白基因（XIAP）等[18，19]。并發(fā)HLH的患者需要給予極強的免疫抑制治療，包括化療、造血干細胞移植等[20]。

綜上所述，IM患兒在EBV感染后出現(xiàn)一系列免疫反應(yīng)，CD8+淋巴細胞的升高具有重要意義，但過強的免疫反應(yīng)也可造成臟器功能損傷，CD8+淋巴細胞的免疫缺陷和異常增生，可并發(fā)HLH等嚴重并發(fā)癥。因此監(jiān)測IM患兒的T細胞亞群，對IM的診斷、預(yù)后和免疫治療具有良好的臨床參考價值。

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（收稿日期：2019-02-19）