血清IL-28A和HMGB1在強直性脊柱炎中的表達及與疾病活動和療效的關系

李曉琴，段雨函

(恩施土家族苗族自治州中心醫院檢驗科，湖北 恩施 445000)

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種以骶髂關節和脊柱附著點炎癥為主要癥狀的自身免疫性慢性疾病，可引起多器官損傷和殘疾，威脅人體健康，降低其生活質量[1]。盡管近年來醫學技術發展迅速，但仍未確定其病因，且無根治方法；但就目前臨床診斷標準，大部分AS患者在確診時已進入穩定期，失去治療最佳時機，因此尋找有效診斷指標，提高早期診斷率，延緩進展速度對AS患者十分重要[2]。白細胞介素-28A (interleukin-28A，IL-28A)是一種III型干擾素，在類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡及系統性硬化癥等免疫性疾病發生發展中占有一定地位[3-4]。但對于IL-28A與AS的關系目前研究尚少。高遷移率族蛋白B1(high mobil ity group protein B1，HMGB1)是近年發現的一種重要炎癥因子，與急性肺炎、膿毒癥及關節炎等發病等密切相關[5-6]。本研究選取95例AS患者作為研究對象，探討IL-28A和HMGB1在強直性脊柱炎中的表達情況，并分析其與疾病活動及療效的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年1月至2018年12月恩施土家族苗族自治州中心醫院收治的95例AS患者作為研究對象，納入標準：(1)符合1984年美國風濕病學會修訂的AS紐約標準[7]；(2)入組前1月未給予任何治療者。排除標準：(1)合并炎癥性腸病、系統性紅斑狼瘡及類風濕性關節炎等；(2)合并感染等其它活動性疾病者；(3)合并惡性腫瘤者；(4)依從性差者。將95例患者分為活動組(≥1.3)和穩定組(<1.3)，分別為60例和35例?；顒咏M：男性50例，女性10例；年齡21～50歲，平均(41.74±8.92)歲；穩定組：男性30例，女性5例；年齡20～50歲，平均(42.03±9.05)歲；活動組和穩定組在性別及年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。選取同期性別及年齡與其匹配的70例健康體檢者作為對照組。本研究所有研究對象均簽署知情同意書，并通過本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 參考強直性脊柱炎的治療指南[8]，活動組患者給予塞來昔布膠囊(輝瑞制藥有限公司，規格：0.25 g×60片)和柳氮磺吡啶腸溶片(上海福達制藥有限公司，規格：0.2g×18粒)，后者起始劑量為1.0 g/d，每周增加0.5 g，最高為2.0 g/d，具體根據患者病情而定，維持此劑量治療3個月，并行病情評估。

1.2.2 檢測方法 采用SSTI II真空采血管抽取對照組和AS患者治療前后空腹靜脈血5 mL，4 000 r/min離心10 min，收集上清液保存于EP管中，并于-80 ℃冰箱保存，待所有標本集齊后一起檢測。采用酶聯免疫吸附(ELISA)雙抗體夾心法檢測血清IL-28A和HMGB1水平，其試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司，具體操作步驟參考試劑盒說明書，儀器為瑞士tecan全自動酶標儀。

采用速率散射比濁法檢測CRP，儀器及試劑均為美國貝克曼公司產IMMAGE 800 型全自動特定蛋白分析系統及配套試劑，嚴格執行本室SOP。

1.3 疾病活動度評分

ASDAS-CRP[9]是國際脊柱關節炎評價工作組針對AS癥狀提出的新的評價指標，須根據患者腰背痛、外周關節腫脹/疼痛、晨僵持續時間及患者總體評價及CRP計算獲得，ASDAS-CRP=0.073×外周關節腫脹/疼痛+0.121×腰背痛+0.058×晨僵持續時間+0.11×患者總體評價+0.579×Ln(CRP+1)。根據ASDAS-CRP值進行分類：(1)非活動期：<1.3；(2)1.3≤低度活動<2.1；(3)2.1≤中度活動<3.5；(4)高度活動：≥3.5。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 各組血清IL-28A和HMGB1水平比較

治療前活動組、穩定組和對照組3組血清IL-28A和HMGB1水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 血清IL-28A和HMGB1對AS的診斷效能

繪制ROC曲線(圖1)，與單項檢測比較，血清IL-28A和HMGB兩者聯合檢測明顯提高了AS特異度和敏感度。見表2。

表1 各組治療前血清IL-28A和HMGB1水平比較

表2 血清IL-28A和HMGB1對AS的診斷效能

2.3 血清IL-28A和HMGB1與AS疾病活動度的關系

經ASDAS-CRP判定，活動組中，低度活動者、中度活動者和高度活動者分別為20例、35例和15例；治療前三者血清IL-28A和HMGB1水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。經Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1與ASDAS-CRP值均呈正相關(P<0.05)，其r值分別為0.675和0.704。

表3 血清IL-28A和HMGB1與AS疾病活動度的關系

2.4 活動組血清IL-28A和HMGB1與AS療效的關系

與治療前比較，治療后活動組血清IL-28A和HMGB1均明顯降低，且差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 活動組血清IL-28A和HMGB1與AS療效的關系

3 討論

AS主要臨床特征是組織炎癥，但目前臨床缺少可量化其病變程度的可靠指標，多以CRP檢測和影像學檢測進行評估；前者與AS疾病活動度密切相關，在活動度及臨床療效評估上有一定價值，但對于部分低度活動期患者僅以局部組織炎癥為主，CRP變化不顯著；后者以核磁共振(MRI)效果最佳，可清晰判斷局部組織炎癥病變情況(肌腱端炎、滑膜炎、及骨髓水腫的有無、范圍及程度)，但對外周疾病活動度意義不大[10-11]。盡管近年各疾病分子機制研究火熱，但仍未發現一個既可反應AS外周疾病活動狀態，又能提示組織炎癥病情情況的生物學指標。

IL-28A是由外周血單個核細胞和樹突狀細胞分泌的細胞因子，其基因結構與IL-10類似，而氨基酸結構則與干擾素(IFN)接近，Zhou等[12]將其命名為IFN-λ，與相應受體結合發揮免疫調節作用，從而具有抗病毒及抗細胞增殖等功能。但關于其與自身免疫性疾病的關系尚不十分清楚。有學者發現，血清IL-28A與人過敏性哮喘病情惡化及嚴重程度密切相關；而在哮喘大鼠模式中也發現IL-28A通過調節肺樹突狀細胞功能，促進Th1細胞分化，從而抑制Th2介導的相關反應，最終達到抑制氣道過敏的效果[13-14]。HMGB1是廣泛存在于真核細胞胞核內的一種高度保守非組蛋白DNA結合蛋白，特別是在機體發生炎癥后，單核巨噬細胞和壞死細胞內HMGB1增多，并通過蛋白質非經典途徑將其轉移至胞外，激活NF-B，啟動多種炎癥因子轉錄，從而促進多重炎癥反應發生[15]。已有研究表明，HMGB1可反映多種其它類型關節炎的炎癥進展[16]。在本研究中，活動組和穩定組血清IL-28A和HMGB1水平均明顯高于對照組，提示IL-28A和HMGB1在AS中高表達，表示其可能參與了AS的致病過程，可輔助診斷AS；為確認兩者在AS中的診斷價值，本研究繪制ROC曲線圖，發現單項檢測對AS均有一定診斷效能，而聯合檢測則可明顯提高其診斷效能，這與武樹朋等[17]研究基本一致，推薦臨床進行聯合檢測。本研究還發現活動組血清IL-28A和HMGB1水平明顯高于穩定組，提示IL-28A和HMGB與AS疾病活動度密切相關。此外，本研究還發現在活動組中，血清IL-28A和HMGB1水平從低度活度者到高度活度者依次升高，提示IL-28A和HMGB1與AS疾病活動嚴重程度相關。后經Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1與ASDAS-CRP值呈正相關，與前述猜想基本吻合，這是因為HMGB1可刺激人單核/巨噬細胞系統，分泌大量IL-28A和CRP，而后者與HMGB1刺激濃度間有顯著劑量依賴性關系，最終達到維持并延長炎癥反應的作用[18]。此外，本研究還發現治療后活動組血清IL-28A和HMGB水平明顯降低，說明其血清IL-28A與AS療效相關，有望成為評估AS的有效指標。

綜上，血清IL-28A和HMGB1在AS中高表達，與疾病活動度呈正相關，在AS診斷及療效評估上有一定價值。