兩種免疫分析儀測定血清甲胎蛋白的比對分析

葉夢霞 李揚宇 秦雪君

甲胎蛋白是含有一條多肽鏈的糖蛋白，主要在胎兒的肝臟和卵黃囊中產生并分布在其他器官中。受孕約30天，在胎兒的血循環中可檢測到甲胎蛋白，隨后分泌到胎兒血清中，妊娠第13周時達到峰值，之后逐漸降低直到胎兒出生。在良性肝臟疾病中，血清甲胎蛋白常有一過性增高。甲胎蛋白是肝細胞癌的一種腫瘤標志物，具有較高的敏感性和特異性，廣泛應用于臨床的篩查，早期診斷和治療[1]。因此，為了滿足日常工作的需要，本科在原來l臺Beckman Coulter Access DXI800的基礎上又添置了1臺Abbott I4000（均為酶促化學發光）。為了確保結果的可靠性和可比性，比較兩種儀器的結果，以避免由于結果之間的差異過大而導致臨床診斷錯誤。

1 資料與方法

1.1 一般資料

樣本：本研究經患者同意，經醫院倫理委員會批準，連續5日（2019年3月4—8日），每日收集8例患者的新鮮血清標本（無溶血、脂血、黃疸），包括低、中、高值，覆蓋分析方法的線性范圍，并根據項目規范的要求進行保存。

1.2 儀器與試劑

Beckman Coulter Access DXI800和Abbott I4000化學發光免疫檢測儀。兩種儀器都使用制造商提供的試劑和校準品。

1.3 方法

1.3.1 實驗原理 兩種儀器的檢測原理都是雙抗體夾心法。

1.3.2 方法選擇、質量控制和標本測定 Beckman Coulter Access DXI800化學發光免疫檢測系統參加了全國室間質評，成績優秀，所以用作參比方法（X），Abbott I4000化學發光測定為待評方法（Y），實驗前對儀器常規維護保養并做質控，確保質控在控后測定樣本，連續5日，每日在兩臺儀器測定符合要求的8份患者新鮮血清，收集得40組數據。

1.4 觀察指標

統計所得甲胎蛋白數據，首先篩查離群值，之后進行精密度比較，再計算出線性回歸方程，觀察結果是否具有統計學意義，最后進行偏倚評估兩臺儀器檢測結果是否具有統計學意義。

1.5 統計學處理

1.5.1 離群點檢查 同時超過相對偏差和絕對偏差平均值的4倍，判斷為離群點。

表1 兩臺儀器檢測甲胎蛋白的精密度比較（ng/mL）

表2 兩臺儀器檢測結果的偏倚評估

1.5.2 相關性分析 計算數據得到回歸方程及相關系數R2。如R2≥0.95，可以認為X的取值范圍合適，線性回歸統計的斜率和截距是可靠的，兩種儀器的結果具有良好相關性。

1.5.3 偏倚評估 目前，臨床上常以甲胎蛋白20 ng/mL和400 ng/mL作為臨床診斷的臨界值[2]，選擇這兩點與所使用儀器線性范圍所達到的水平代入回歸方程，以計算待評方法（Y）和參比方法（X）之間的標準誤（SE）和相對偏倚（SE%）。SE= lYc-Xcl，SE%=（SE /Xc）×100%。本實驗甲胎蛋白的允許總誤差（TEa）為25%，SE%＜1/2TEa為臨床可接受標準。

1.5.4 統計學軟件 使用SPSS 17.0軟件對數據進處理和分析。

2 結果

2.1 離群值篩查

經數據分析，2種檢測系統無離群值。如圖1。

2.2 精密度比較

兩種儀器的CV值均小于8.33%的日間CV允許范圍。測得兩個水平質控的均值（），變異系數（CV），標準差（SD）,見表1。

2.3 線性回歸

兩種儀器的線性回歸方程及相關性分析如圖1所示。相關系數R2=0.998 5＞0.95，截距a=0.097 7，斜率b=1.125 1，回歸方程Y= 1.125 1X +0.097 7表明回歸統計的斜率和截距是可靠的。兩臺儀器測定甲胎蛋白的檢測結果有顯著的相關性，可用于評估兩臺儀器測定甲胎蛋白的偏倚。

2.4 結果偏倚評估

甲胎蛋白醫學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，在Abbott I4000上測定的結果以Beckman測定為參比方法的SE%，均＜1/2TEa。見表2。

3 討論

甲胎蛋白是臨床上使用最廣泛的肝細胞癌標志物[3]，是一種血清糖蛋白，作為腫瘤相關蛋白，其對肝細胞癌的陽性診斷率約為70%。李峰等[4]也提出肝癌是腫瘤的進展性結果，如果在癌癥早期得到充分的重視，對改善患者的預后具有重要的指導意義。血清甲胎蛋白水平可用于評估經導管動脈化療栓塞聯合射頻消融術后原發性肝癌患者的預后[5]。近年來，隨著醫學檢測技術的不斷發展，以及對腫瘤標志物臨床意義的深入研究，再加上國民健康意識的普遍提高，甲胎蛋白已逐漸成為體檢的常規項目，為滿足工作需要，本科有Beckman C o u l t e r A c c e s s D X I 8 0 0 與Abbott I4000兩臺化學發光免疫測定系統，因甲胎蛋白醫學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，如果兩種儀器同時報告結果，在這兩個水平的偏倚過大，將會對臨床的診斷和治療帶來干擾。醫學檢驗結果的相互認可是醫學檢驗發展的需要，報告相互認可的基礎是不同檢驗系統中相同檢驗項目的結果是否具有可比性[6]，所以筆者對兩臺儀器檢測甲胎蛋白做了比對實驗。當比對結果超過規定偏倚時，應分析原因并糾正，以減少不同儀器之間的結果差異，以便正確報告。

本科兩臺儀器測定甲胎蛋白的兩個水平質控日間及總CV均＜8.33%，表明兩組儀器檢測結果可靠，精密度高。在保證檢測系統精度和準確性的前提下，建立了各種檢測系統的標準化長期比較機制，用于實現不同檢測系統之間測量結果的一致性和可比性具有重要的意義[7]。本實驗選擇的甲胎蛋白AFP（alpha-fetoprotein）水平在20 ～ 400ng/mL，在該范圍內檢測甲胎蛋白異質體L3（alpha-fetoprotein L3）AFP L3，測得的結果基本上能反映早期原發性肝癌和非腫瘤性肝病的AFP L3水平狀況[8]。因此，今后可在此基礎上擴展實驗，深入研究甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白異質體L3（AFP L3）和高爾基體跨膜糖蛋白73（golgin 73）對診斷原發性肝癌的意義[9-10]。作為原發性肝癌診斷的新型腫瘤標志物，甲胎蛋白異質體L3可有效彌補單獨檢測甲胎蛋白的不足，并且結合臨床影像學和病理學診斷方法，可以有效提高診斷原發性肝癌的準確性[11]。它還可以擴展到研究慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）肝硬化患者的外周血甲胎蛋白（AFP）、丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2）、白蛋白（albumin）mRNA表達及其臨床意義[12]。

圖1 兩臺儀器測定結果均值散點圖

綜上所述，此次實驗結果顯示：此實驗使用的儀器檢測甲胎蛋白的結果無統計學意義（P＞0.05），并且存在良好的相關性（R2＞0.95 ）。甲胎蛋白的允許總誤差（allowable total error）TEa為25%，以臨床可接受的SE%＜1/2TEa為標準，而甲胎蛋白醫學決定水平分別為20 ng/mL和400 ng/mL，在這兩個取值范圍附近的比對結果未出現較大偏差，均符合SE%＜1/2TEa的標準。因此，實驗結果顯示兩種儀器的檢測結果具有可比性，系統偏差在可接受的范圍內，并且可以同時報告而不影響患者病情的臨床判斷。為患者提供診斷依據，并節省因為不確定病情而導致浪費治療時間，值得推廣及應用[13]。