一起豬瘟和豬藍(lán)耳病混合感染的診斷與防控

楊芳，龔興建，杜明倉，謝國永

(1.保山市動物疫病預(yù)防控制中心，云南 保山 678000；2.保山市隆陽區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，云南 保山 678000)

隨著生豬流動的日益頻繁，加之養(yǎng)豬戶生物安全措施的不完善，豬病防控將會變得越來越復(fù)雜，由多種致病因子混合感染引起毒株變異、混合感染等情況會越來越多，豬病防控難度會進(jìn)一步加大，危害較嚴(yán)重。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載，大部分豬場因豬病的混合感染導(dǎo)致豬死淘率在15%以上[1]。而農(nóng)村散養(yǎng)戶對豬病缺乏認(rèn)識，環(huán)境衛(wèi)生消毒意識不強(qiáng)，生物安全措施不到位，造成環(huán)境中存在著多種病原體。一旦環(huán)境、氣候發(fā)生變化，豬的抵抗力降低、應(yīng)激反應(yīng)、強(qiáng)毒力毒株(細(xì)菌)侵襲，將出現(xiàn)從單一病原體感染發(fā)展到多種病原體混合感染的病例會明顯增多，導(dǎo)致豬群的高發(fā)病率和高死亡率。混合感染的存在與發(fā)生，使我國養(yǎng)豬生產(chǎn)中流行的豬病更為復(fù)雜，也給疾病診斷和防治帶來極大困難[2]。隨著2017年豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病(以下簡稱生豬“兩病”)退出國家強(qiáng)制免疫后，很多地方生豬“兩病”免疫密度大幅度下降，免疫保護(hù)率明顯降低，導(dǎo)致豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病零星散發(fā)疫情時有發(fā)生。近期，某村發(fā)生了一起生豬疫情，經(jīng)過流行病學(xué)調(diào)查、病理剖檢、實驗室診斷，最終確診為豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病混合感染而引發(fā)的生豬疫情。筆者對該起疫情的發(fā)病情況、臨床表現(xiàn)、病理剖檢、實驗室診斷等方面進(jìn)行全面闡述，并結(jié)合多年來從事動物疫病監(jiān)測和防控工作實踐，對該起生豬疫情的病因進(jìn)行分析，提出綜合防控措施，旨在為廣大農(nóng)村養(yǎng)殖戶科學(xué)防控生豬疫病提供參考。

1 發(fā)病情況

某村共有養(yǎng)殖戶145戶，生豬存欄1922頭，自2019年1月20日前后開始陸續(xù)發(fā)病死亡，有47戶養(yǎng)殖戶的生豬發(fā)病，發(fā)病生豬513頭，死亡467頭，發(fā)病率26.69%，病死率91.03%。發(fā)病死亡豬沒有明顯的年齡、性別區(qū)分，各個年齡段豬只、公豬、母豬均有發(fā)病死亡情況。發(fā)病戶均為散養(yǎng)戶，發(fā)病前該村未從外地引進(jìn)豬只，均屬于自繁自養(yǎng)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該村養(yǎng)殖戶防疫意識淡薄，2018年秋防僅免疫少部分生豬，2019年春防未免疫過任何疫苗。

2 臨床癥狀

發(fā)病豬精神沉郁，被毛粗亂，采食量下降，嚴(yán)重個體食欲廢絕，發(fā)病初期個別豬只發(fā)燒，隨后迅速蔓延至其他豬；患豬呼吸困難，氣喘、咳嗽，出現(xiàn)結(jié)膜炎癥狀；多數(shù)病豬出現(xiàn)便秘，糞便秘結(jié)，呈球狀，有部分豬出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，尿量少而黃、混濁，個別病豬突然死亡；多數(shù)嚴(yán)重的病豬耳后耳緣發(fā)紺，腹下和四肢等多處皮膚有斑塊，呈紫紅色；患豬漸進(jìn)性消瘦，病程稍長的病豬全身蒼白，出現(xiàn)貧血現(xiàn)象。

3 病理剖檢

心臟表面大量出血，有少許黃斑，大小無異常；肝臟稍腫大，部分出現(xiàn)瘀血斑，質(zhì)地較脆；脾臟壞死不腫大，但出現(xiàn)瘀血斑，質(zhì)地?zé)o異常；肺臟表面顏色較淡，剖開有泡沫狀滲出物，大小無異常；腎臟表面蒼白，不腫大，少部分皮下有瘀血斑；腹股溝、頜下淋巴、腸系膜淋巴結(jié)水腫瘀血；小腸表面出現(xiàn)點狀出血，大腸內(nèi)壁有瘀血斑(癥狀見圖1-圖6)。

圖1 心臟出血 圖2 肝臟瘀血

圖3 脾臟壞死 圖4 肺臟出現(xiàn)泡沫

圖5 腎臟出血 圖6 腸系膜點狀出血

4 實驗室診斷

4.1 檢測方法及試劑

4.1.1檢測方法

運用普通PCR試驗進(jìn)行了非洲豬瘟、古典豬瘟(巢式PCR)、高致病性豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)Ⅱ型病毒核酸檢測，通過核酸提取、體系配制、反應(yīng)體系擴(kuò)增、凝膠成像等步驟依次進(jìn)行檢測。

4.1.2試劑來源

病毒核酸提取試劑盒購自西安天隆科技有限公司，生產(chǎn)的批號為E0118110161的成品試劑盒；Taq酶、dNTPs、DNA Marker 2000等相關(guān)反應(yīng)試劑均為寶生物工程有限公司生產(chǎn)；瓊脂糖為西班牙進(jìn)口；引物由云南省動物疫病預(yù)防控制中心提供。

4.1.3擴(kuò)增條件及產(chǎn)物片段大小

非洲豬瘟：50℃ 2min，95℃ 10min，95℃ 15s,62℃ 30s,72℃ 30s，進(jìn)行40個循環(huán)；最后再72℃延伸7min；預(yù)期核酸片段大小約257bp。

古典豬瘟(兩步法)：第一步：50℃ 30min，94℃ 2min，95℃ 15s，54℃ 30s，72℃ 1min，進(jìn)行35個循環(huán)；再72℃延伸10min；第二步：94℃ 2min，95℃ 15s,54℃ 30s,72℃ 1min，進(jìn)行30個循環(huán)；再72℃延伸10min；預(yù)期核酸片段大小約270bp。

高致病性豬藍(lán)耳病：50℃ 30min，94℃ 2min，95℃ 15s,50℃ 30s,72℃ 1min，35個循環(huán)后，再72℃延伸10min；預(yù)期核酸片段大小約485bp。

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型：94℃ 5min，95℃ 15s，55℃ 45s,72℃ 1min，進(jìn)行30個循環(huán)后；再72℃延伸10min；預(yù)期核酸片段大小約460bp。

最后取8μL擴(kuò)增產(chǎn)物，在限壓120V，30min進(jìn)行1%瓊脂凝膠電泳，在凝膠成像系統(tǒng)中觀察結(jié)果。

4.2 檢測樣品

現(xiàn)場采集樣品17份，其中病豬組織2份(包括心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié))、病豬全血7份、圈舍環(huán)境棉拭子8份。

4.3 檢測結(jié)果

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂凝膠電泳成像，并以DNA Marker 2000為對照，以判斷產(chǎn)物大小，在凝膠成像系統(tǒng)照射下，陽性樣品出現(xiàn)了一條清晰的條帶，其大小與預(yù)期擴(kuò)增的目的片段相符，陰性對照管未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶。被檢樣品經(jīng)過與對照條帶比對，在送檢的17份樣品中，非洲豬瘟病毒核酸檢測全部為陰性，在全國非洲豬瘟防控的風(fēng)口浪尖，首先經(jīng)實驗室檢測排除非洲豬瘟病毒感染的可能；檢出豬瘟病毒核酸陽性15份(組織1份、全血6份、圈舍棉拭子8份)，陽性檢出率為88.24%；檢出藍(lán)耳病毒核酸陽性13份(組織2份、全血3份、圈舍棉拭子8份)，陽性檢出率為76.47%； 檢出豬圓環(huán)Ⅱ型病毒核酸陽性1份(來自組織病料)；根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、病理變化以及實驗室檢測結(jié)果，診斷為豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病混合感染,存在圓環(huán)病毒繼發(fā)感染的可能，凝膠電泳檢測結(jié)果如圖7-圖10所示。

M:DL2000 DNA Marker；+:陽性對照；-：陰性對照；S：檢測樣品

圖7：ASFV凝膠成像圖；圖8：PCV凝膠成像圖；圖9：CSFV凝膠成像圖；圖10：PRRSV凝膠成像圖

5 病因分析

5.1 養(yǎng)殖戶防疫意識淡薄，防疫員責(zé)任心不強(qiáng)

近年來，保山市大力推行“集中免疫、整村推進(jìn)”免疫新模式和生豬“321”免疫新技術(shù)，使豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病免疫密度和免疫質(zhì)量都保持在較高水平，連續(xù)幾年疫情保持平穩(wěn)。但自2017年秋防豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病退出國家強(qiáng)制免疫后，部分地方政府沒有足額投入資金購買疫苗，導(dǎo)致免疫密度呈“斷崖式”下降，致使部分地方豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病零星散發(fā)疫情時有發(fā)生，而豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病最經(jīng)濟(jì)有效的防控手段還是疫苗免疫。該村2018年秋季生豬“兩病”防疫免疫率低，2019年春防未及時進(jìn)行疫苗免疫，豬體缺乏免疫保護(hù)，加上近來環(huán)境氣候忽冷忽熱，一旦豬體抵抗力下降，極易導(dǎo)致疫病的發(fā)生。

5.2 生豬飼養(yǎng)管理不當(dāng)，生物安全水平較低

該村生豬存欄量較大，但都是散養(yǎng)，多數(shù)散養(yǎng)戶都是人畜混居，畜舍擁擠，通風(fēng)不良，且存在一屋多用的情況，上用于堆放雜物，下用于飼養(yǎng)家畜，缺乏必要的防蚊防鼠措施；平時不注意衛(wèi)生消毒，飼養(yǎng)管理不當(dāng)、生物安全水平低下是導(dǎo)致本次發(fā)病不可忽視的原因之一。

5.3 疫情上報不及時，防控技術(shù)措施不力

疫情發(fā)生后，散養(yǎng)戶沒有引起高度重視，病急亂投醫(yī)，在沒有查清病原的情況下請村獸醫(yī)自行對癥治療，未及時上報，疫情沒有得到科學(xué)、快速處置，且未采取嚴(yán)格的隔離、封鎖、消毒措施，導(dǎo)致疫情散發(fā)，加上鄉(xiāng)村獸醫(yī)挨家串戶醫(yī)治未進(jìn)行嚴(yán)格的消毒措施，導(dǎo)致疫情進(jìn)一步蔓延擴(kuò)散。

6 防控措施

6.1 發(fā)生疫情時的防控?fù)錅绱胧?/h3>

對于豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病目前尚無特效藥物治療，發(fā)生疫情時主要采取綜合防制措施及對癥療法，一般在發(fā)病初期用抗生素和清熱解毒藥用于緩解癥狀，控制繼發(fā)感染，最根本的辦法還是消除病豬、帶毒豬和徹底消毒，切斷傳播途徑，防止擴(kuò)散[3]。本次疫情通過采取撲殺、無害化處理、消毒、緊急免疫等綜合防控措施，按照“早、快、嚴(yán)、小”的原則迅速將該起疫情控制、撲滅。首先是撲殺病豬，無害化處理病豬和病死豬；其次是對圈舍、環(huán)境、無害化處理場所進(jìn)行徹底消毒，切斷傳播途徑，防止擴(kuò)散；再次對健康豬使用豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗進(jìn)行緊急免疫注射。

6.2 平時的預(yù)防控制措施

6.2.1加強(qiáng)生豬“兩病”疫苗免疫

防控生豬“兩病”最經(jīng)濟(jì)有效的手段還是疫苗免疫。國家雖然將生豬“兩病”退出強(qiáng)制免疫，但散養(yǎng)戶生豬“兩病”發(fā)生風(fēng)險仍然較大，一旦發(fā)生疫情，養(yǎng)殖戶損失較大。建議各地應(yīng)整合資金，增加投入，將生豬“兩病”納入地方性強(qiáng)制免疫。

6.2.2加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高生物安全水平

養(yǎng)殖戶特別是農(nóng)村散養(yǎng)戶要提高認(rèn)識，做好豬舍的通風(fēng)換氣、防寒保暖、防蚊滅蠅等科學(xué)飼養(yǎng)管理措施，同時要定期做好圈舍清潔衛(wèi)生消毒工作，對異常畜禽要做好隔離、觀察、消毒，對病死畜禽要進(jìn)行無害化處理，禁止出售、轉(zhuǎn)運、隨意丟棄病死畜，發(fā)現(xiàn)疫情，及時上報。

6.2.3加強(qiáng)疫情監(jiān)測和檢疫監(jiān)管

加強(qiáng)對豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病疫情的監(jiān)測預(yù)警，凡監(jiān)測出的陽性豬只應(yīng)進(jìn)行撲殺、無害化處理，對豬群監(jiān)測免疫抗體陽性率達(dá)不到70%的應(yīng)及時進(jìn)行補(bǔ)免。加強(qiáng)生豬引種、流通、屠宰環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管，嚴(yán)格執(zhí)行引種申報檢疫制度，防止疫病傳入，嚴(yán)格產(chǎn)地檢疫，防止疫病因流通傳播。

6.2.4加強(qiáng)動物疫病防控知識宣傳

豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病等重大動物疫病防控工作涉及千家萬戶，不僅僅是動物防疫部門的事，而應(yīng)該是政府和全社會共同關(guān)注的大事[4]。建議各級要通過多種形式加大動物防疫工作宣傳力度，加強(qiáng)對動物防疫知識的宣傳和教育，進(jìn)一步提高廣大養(yǎng)殖戶對動物防疫工作重要性的認(rèn)識，讓廣大農(nóng)村散養(yǎng)戶自愿接受疫苗免疫，使社會各界理解、支持生豬“兩病”的防疫工作，形成全社會共同參與豬病防控的良好氛圍。