飼料中添加微生態制劑對中華鱉幼鱉生長、消化及生化指標的影響

■賀 剛 方春林* 吳 斌 張志紅 王慶萍 王偉萍 鄧宏奎 王菊華

（1.江西省水產科學研究所，江西南昌330000；2.江西省科學院生物資源研究所，江西南昌330000）

中華鱉(Trionys sinensis)是重要的淡水特色養殖動物，具有豐富的營養價值和較高的經濟價值，隨著池塘養殖的迅速擴大和產量不斷增加，導致各種疾病隨之而來。在養殖過程中，防治水產動物疾病的各類抗生素和化學藥物的濫用，出現了養殖廢水污染、藥物殘留超標、產品質量下降等問題，嚴重影響了中華鱉養殖產業的健康發展。中華鱉產品質量安全問題，也受到廣泛的關注，微生態制劑被認為是抗生素的有效替代物之一，通過營養手段提高養殖動物的抗病力已成為研究的熱點。微生態制劑具有增強消化酶活性、提升抗氧化功能和改善免疫應答等功能，在一定程度上可增強中華鱉體質，提升個體品質，芽孢桿菌(Bacillus)是一種應用較多的微生態制劑[1]。

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）能以芽孢的形式在各種養殖水體中廣泛存在，具有穩定性、耐高溫、抗逆性等優點，直接代謝產生多種營養物質并分泌某些酶類，具有促進生長、增強消化、改善內環境、刺激免疫能力、改善養殖水環境等作用，是具有應用前景廣闊的益生菌[2-3]，現已應用在草魚（Ctenopharyngodon idellus）[4]、青魚(Mylopharyngodon piceus）[5]、凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)[6]、團頭魴(Megalobrama amblycephala)[7]、吉富羅非 魚（Genetic Improvement of Farmed Tilapia）[8]等多種水產動物，并取得了較好的效果。光合細菌（Photosynthetic Bacteria）是一種厭氧型革蘭氏陰性菌，分布于各種養殖水體的缺氧區，含多種維生素、類胡蘿卜素、輔酶Q等生理活動物質，能凈化養殖水質、吸收有害物質，促進腸道消化吸收，減少魚類病害發生[9-10]。目前，微生態制劑對中華鱉幼鱉相關影響的研究甚少，本研究以中華鱉幼鱉為對象，通過在基礎飼料中添加不同含量的微生態制劑，檢測幼鱉的生長性能、消化酶活性、血液生化免疫指標來探討不同含量微生態制劑對中華鱉幼鱉機體的影響，為中華鱉的飼料運用及苗種培育提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和飼料

試驗用中華鱉幼鱉購自江西添鵬生態農業公司，挑選初始平均體重（45.54±10.65）g 中華鱉，用5%生理鹽水浸泡4～5 min，放入溫室水泥池馴養7 d 后，開始進行投喂試驗。

按中華鱉對營養成分需求標準為參照，以CP%含58%進口魚粉、43%膨化大豆、43%豆粕的原料配制基礎飼料，原料配比及營養成分見表1。

表1 飼料組成與營養成分（風干，%）

試驗用微生態制劑為復合添加劑，主要是沸石粉6.4 kg、麩皮2.8 kg、液體微生物（含枯草芽孢桿菌、光合細菌等）4 kg、殼聚糖（脫乙酰率為95%以上）100 g等物質混合均勻制備而成，測定微生物含量為3億個/g，pH=6.8。

1.2 試驗設計

試驗幼鱉隨機分為4 組，在基礎飼料中添加復合制劑0（對照）、1.5 g/kg（Ⅰ組）、3 g/kg（Ⅱ組）、6 g/kg（Ⅲ組）的試驗飼料，每組重復3 次，共12 個池，每池（5.7 m×1.9 m×1.2 m）放養100只，池底鋪10 cm細沙，用石棉瓦做曬背臺和食臺，水深40 cm。試驗開始后每日投喂2次，分別在5：00～6：00和17：00～18：00投喂面團狀飼料，日投餌量為幼鰲體質量的3%～5%，每組設1個固定投喂點，投喂后2 h清理殘餌。養殖期間，用增氧泵不間斷增氧，水體pH值7.0～8.0，水溫27～30 ℃，每周換水一次，每次換1/3的水。養殖試驗進行60 d。

1.3 樣本采集與分析

1.3.1 生長性能

養殖結束后，對各池的中華鱉幼鱉進行計數、稱重，計算增重率、特定生長率、餌料系數和存活率。

增重率(%)=[(末均重-初均重）/初均重]×100

特定生長率(%/d)=[ln(終末體質量)-ln(初始體質量)]/試驗時間×100

餌料系數=攝入干物質質量/(末均重-初均重)

存活率(%)=每池結束存活數量/初始投入數量×100

1.3.2 消化酶活性

稱重結束后，將所有試驗幼鱉迅速斷頸處死，各組選3～5 只取動脈血，4 ℃靜置2 h，用于血液生化指標測定。迅速解剖，取出腸道，剔除脂肪，用4 ℃雙蒸水沖洗，濾紙吸干多余水分后放入液氮中冷凍2 min，然后置于-80 ℃冰箱中保存，供測酶活性用。

測定酶活性時，將冷凍的腸道4 ℃解凍后稱重，加入10 倍體積的4 ℃雙蒸水勻漿，然后4 ℃3 600 r/min離心15 min，上清液即為酶粗提液，置于4 ℃冰箱內保存，24 h 內分析完畢。酶粗提液蛋胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

1.3.3 生化指標

將靜置的血液5 000 r/min 離心分離，收集血清，當天測定完成，所有生化指標均在全自動生化分析儀(MD, 美國)上完成。

1.4 數據處理

采用SPSS16.0 軟件對試驗數據進行數據統計分析，所有數據均用“平均值±標準差”表示。采用單因素方差分析(One-way ANOVA)和Duncan's法多重比較分析各試驗組間指標的差異，P＜0.05為差異顯著水平。

2 結果與分析

2.1 生長性能（見表2）

表2 復合微生態制劑對中華鱉幼鱉生長性能和餌料系數的影響

添加不同含量復合微生態制劑對中華鱉幼鱉體重、增重率、特定生長率、餌料系數和存活率的影響見表2。試驗結束時，Ⅱ組體重和增重率極顯著高于對照組和Ⅰ組（P＜0.01）。Ⅱ組特定生長率極顯著高于其他試驗組和對照組（P＜0.01），餌料系數極顯著低于對照組和其他試驗組（P＜0.01），而Ⅲ組的增重率、特定生長率均極顯著高于對照組和Ⅰ組。餌料系數極顯著低于對照組和其他試驗組（P＜0.01），Ⅰ組各指標略高于對照組。此外，試驗各組的存活率均為100%。

2.2 腸道消化酶（見表3）

表3 復合微生態制劑對中華鱉腸道消化酶活性的影響(U/g prot.)

由表3 可知，添加復合制劑的試驗組三種酶活性均高于對照組。Ⅱ組、Ⅲ組的脂肪酶活性顯著高于對照組和Ⅰ組（P＜0.05）；Ⅱ組的淀粉酶和蛋白酶活性顯著高于其他組（P＜0.05），且Ⅰ組和Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 血液生化及免疫指標（見表4）

各試驗組的總蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白均高于對照組，但組間差異不顯著（P＞0.05）。各試驗組總膽固醇含量逐漸降低，Ⅲ組顯著低于對照組（P＜0.05），而其他組間無顯著差異。各試驗組甘油三酯含量顯著高于對照組（P＜0.05），但Ⅱ、Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）；各試驗組的尿素氮均低于對照組（P＜0.05）。除Ⅱ、Ⅲ組的IgG低于其他試驗組外，各試驗組IgA、IgM、IL-2、IL-6的含量均無顯著差異（P＞0.05）。各試驗組溶菌酶、總抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶差異不顯著（P＞0.05），而Ⅱ組的谷胱甘肽過氧化物酶高于其他試驗組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 復合微生態制劑對中華鱉幼鱉生長性能的影響

本試驗結果顯示，飼料中添加復合微生態制劑（枯草芽孢桿菌、光合細菌和少量殼聚糖）能促進中華鱉幼鱉生長，提高飼料利用效率，適宜添加量為3 g/kg[11-12]。當添加量為6 g/kg時，中華鱉生長指標和飼料利用有所下降，原因可能是過量微生態制劑造成機體腸道菌群結構失調，還可能是由于產生過量的酶從而抑制有機體內源酶的活性，降低了內源酶對營養物質的降解作用，進一步降低了動物的生產性能[13]。

表4 復合微生態制劑對中華鱉血液生化及免疫指標的影響

Wang[14]在凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)飼料中同時添加光合細菌和芽孢桿菌，質量增加率顯著提高；鞠守勇等[4]在草魚(Ctenopharyngodon idellus)飼料中添加不同含量的枯草芽孢桿菌，試驗魚增重率和特定生長率顯著增強；管越強等[15]發現添加枯草芽孢桿菌飼料的中華鱉生長性能高于對照組，餌料系數有所降低。本研究表明，在飼料中添加枯草芽孢桿菌、光合細菌和少量殼聚糖的混合微生態制劑促進幼鱉的生長，在增重率、特定生長率等指標較為顯著。一方面芽孢桿菌競爭奪氧維持腸道厭氧環境，阻止有害菌的生長，而光合細菌能改善水體養殖環境，提高有機體的免疫和抗病力，兩種細菌共同協作促進了幼鱉消化吸收營養物質的能力；另一方面少量的殼聚糖能維持飼料在水中穩定時間，減少有效成分的溶解損失，促進有機體的生長。

3.2 復合微生態制劑對中華鱉幼鱉腸道消化酶的影響

本試驗添加枯草芽孢桿菌、光合細菌和少量殼聚糖等復合制劑后幼鱉的腸道消化酶活性均有所改善，適宜添加量為3 g/kg。鞠守勇等[4]在飼料中添加枯草芽孢桿菌，草魚腸道中淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性均顯著高于對照組。黃靈等[16]研究發現在飼料中分別添加芽孢桿菌、光合細菌制劑后，虎龍斑腸道胰蛋白酶、淀粉酶活性顯著提高。桂琳等[17]研究表明在飼料中添加1～2 g/kg 復合益生菌，平均體重為（227.48±14.42）g 中華鱉的腸道脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶活性均有所增強。本試驗與上述研究結果相似，研究表明，枯草芽孢桿菌、光合細菌和殼聚糖等復合制劑能提高幼鱉腸道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性，作用機制可能是微生態復合制劑引起腸道消化酶的分泌，改善消化道的生理環境，促進了腸道健康發育。另外，本試驗結果顯示，消化酶活性增強也有限制，因有機體內要維持正常菌群平衡，當復合制劑含量增加到一定程度時酶活性不會持續增強。

3.3 復合微生態制劑對中華鱉幼鱉代謝、免疫及抗氧化指標的影響

血液中各生化指標反映有機體內蛋白代謝和生化免疫的水平程度。總蛋白和白蛋白是重要的營養和健康指示器，前者主要參與多種轉運和免疫功能，后者主要為氨基酸的合成提供能量和轉運代謝產物[18]。各試驗組與對照組的總蛋白、白蛋白含量差異均不顯著，可能是試驗條件符合幼鱉發育生長，沒有感染疾病，飼料營養全面。

甘油三酯、總膽固醇是血液中脂肪的重要組成部分，其含量大小反映出脂類代謝狀況。高含量的甘油三酯、總膽固醇會引發有機體的各種疾病，適量的添加枯草芽孢桿菌、光合細菌和少量殼聚糖等復合制劑加強幼鱉中總膽固醇的代謝，降低了膽固醇的含量[4]。試驗組中幼鱉血液中甘油三酯含量有所增加是由于復合制劑產生的各種蛋白酶促進腸道對甘油三酯吸收。高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是衡量脂類代謝程度的指標[19]，低密度脂蛋白含量過高對機體有害，而高密度脂蛋白含量越高對有機有利，在這兩個指標上，各試驗組與對照組間總體差異不大。尿素氮指標水平反映肝、腎臟功能的異常程度，各試驗組的尿素氮低于對照組，可能是復合制劑促進了蛋白質的沉積，降低了肝、腎中尿素的積累，加快尿素從幼鱉體內的排出，對有機體組織起到特異性保護的作用。

IgA、IgG、IgM 是血清中主要的免疫球蛋白，能維持機體生理平衡和免疫保護作用[6]；白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）均刺激T細胞和成纖維細胞產生的淋巴因子，主要參與機體的免疫調節。本試驗顯示，各組免疫球蛋白指標差異不大，說明飼料營養價值全面，養殖環境單一，幼鱉病害較少。

非特異性免疫是評價幼鱉機體健康程度的重要指標。微生態復合制劑可以刺激機體細胞和體液免疫，產生非特異性免疫因子，主要抗氧化、溶菌酶、補體系統等組成[20]。主要超氧化物歧化酶（SOD）是生物體內氧自由基的天然去除劑；溶菌酶（LSM）可以清除體內的異物；丙二醛是脂質過氧化反應的最終產物，間接反映出細胞受損程度；谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）是機體內廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，主要保護細胞膜的結構完整和功能不受損傷[21-22]。本研究表明，各試驗組的多數非特異免疫指標如超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSM）、丙二醛、過氧化物酶含量高于對照組，當添加量為3 g/kg 時，谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）含量顯著高于其他組，這可能是因為復合制劑產生的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性增強幼鱉的抗氧化能力，與桂琳等[17]的研究結果相似。

4 結論

在飼料中添加復合微生態制劑（枯草芽孢桿菌、光合細菌和少量殼聚糖）能提高中華鱉幼鱉的增重率、特定生長率，降低餌料系數，增強腸道胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性；同時，能提高幼鱉的非特異性免疫和抗氧化能力，降低無氧代謝水平，增強其抗脅迫能力。復合制劑適宜添加量為3 g/kg。