不同方法檢測丹參多酚酸對血小板功能影響的比較

華曉東，侯 娟，徐 琳，稅鳳春

(天津市藥品檢驗研究院，天津 300070)

血小板功能檢測最經典的方法是血小板聚集試驗，由于該方法需要制備富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)，影響因素較多，試驗者的操作經驗對結果的影響較大，因此試驗的可靠性較差。CD62p又名血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白，是血小板活化的特異性生物標志物。降低血小板的CD62p表達是臨床活血化瘀方劑抗血小板治療效果監測的高特異性指標，與其臨床效應密切相關。采用流式細胞術檢測CD62p的表達，進而評價血小板的功能[1],方法快速穩定，簡單可靠，影響因素少，靈敏度也高于血小板聚集試驗。本研究擬通過比較這兩種血小板功能的評價方法，為在臨床前研究中綜合評價血小板功能提供一種新途徑。

1 材料與方法

1.1藥品 注射用丹參多酚酸：淺棕色疏松塊狀物， 規格：100 mg/支，批號20180501，試驗時分別采用氯化鈉注射液按丹參多酚酸含量計算稀釋至試驗所需濃度備用。單抗 anti-mouse/rat CD62p-PE/Cy7(藻紅蛋白-青花素7標記的抗大/小鼠CD62p抗體，批號B223759)、anti-mouse/rat CD61-PE(藻紅蛋白標記的抗大/小鼠CD61抗體，批號B216420)，均由美國Biolegend公司生產；同型對照 Rat IgG2a-PE/Cy7(藻紅蛋白-青花素7標記的大鼠IgG2a，批號4290714)、Rat IgG-PE(藻紅蛋白標記的大鼠IgG，批號 4281135)，美國eBioscience公司生產。ADP(批號SLBP6247V，SIGMA公司生產)。

1.2儀器 ACEA流式細胞儀，ACEA Bioscience,Inc；LBY-NJ4血小板聚集儀，北京生化儀器廠生產；XS-205DU電子天平，精度0.1 mg，試劑稱量用；XP2001S電子天平，精度1 g，動物稱量用。

1.3動物 SD大鼠，體重 220～250 g，雌雄各半，雌鼠應無孕，斯貝福(北京)生物技術有限公司，SCXK(京)2016-0002。

1.4方法

1.4.1注射用丹參多酚酸對大鼠體外血小板聚集功能的影響 取SD大鼠8只，雌雄各半，體重230～250 g，大鼠腹腔注射20%烏拉坦5 ml/kg麻醉。……