提高乳康舒膠囊質量標準的研究

任會旭，吳嫣艷，胡浩彬

1 南京中醫藥大學，南京 210023；2 江蘇省食品藥品監督檢驗研究院，南京 210019

乳康舒膠囊由鹿角、淫羊藿、白芍、郁金、王不留行、丹參6 味藥材組成。具有益腎疏肝、止痛散結等作用，用于乳腺增生病證屬腎虛肝郁、沖任失調者。原質量標準為原國家食品藥品監督管理局標準（YBZ00592009），其僅有淫羊藿苷、芍藥苷、原兒茶醛的薄層色譜鑒別和淫羊藿苷、芍藥苷的含量測定。為提高乳康舒膠囊質量標準，本文擬建立淫羊藿、王不留行的薄層色譜鑒別法，以及乳康舒膠囊中淫羊藿苷、王不留行黃酮苷、芍藥苷3 個成分的高效液相色譜法，為該制劑的質量控制提供參考[1-5]。

1 儀器與藥品、試劑

1.1 儀器

LC-20AB HPLC（日本島津）；CPA224S 型，BS21S 型電子天平（德國Sartorius 公司）；MX5 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）。

1.2 藥品與試劑

乳康舒膠囊（批 號16100791、171116ML、171118MM，江蘇恒瑞醫藥有限公司）；淫羊藿苷對照品（純度94.2%，批號110737-201516）、王不留行黃酮苷對照品（純度92.6%，批號111853-201303）、芍藥苷對照品（純度95.7%，批號110736-201741）、淫羊藿對照藥材（批號121632-201101）、王不留行對照藥材（批號121094-201305），均購自中國食品藥品檢定研究院；陰性對照制劑為實驗室自制。

乙腈（色譜純，Fisher Scientific 公司），其余試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 淫羊藿

供試品溶液制備：取本品內容物2 g，置錐形瓶中，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，固體物加甲醇2 mL 使溶解，即得。

對照藥材溶液制備：取淫羊藿對照藥材0.5 g，余同“供試品溶液制備”。

對照品溶液制備：取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.4 mg 的溶液，即得。

陰性對照溶液制備：取缺淫羊藿的陰性樣品，余同“供試品溶液”制備方法。

薄層色譜鑒別方法：吸取供試品、對照藥材、對照品溶液及陰性對照溶液各2～5μL，點于同一硅膠G薄層板上，以甲醇-丁酮-三氯甲烷-水（4∶6∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。于供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同的綠色熒光斑點，陰性制劑無干擾。見圖1。

2.1.2 王不留行

供試品、對照品、陰性對照溶液制備：同“2.1.1”。

圖1 淫羊藿TLC 色譜圖

鑒別方法：除展開劑為正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸（4∶1∶5∶0.5）的上層溶液，5%三氯化鋁乙醇顯色外，余同淫羊藿鑒別方法。結果可見供試品在與對照品色譜相應的位置上顯相同的藍色熒光斑點，陰性無干擾。見圖2。

圖2 王不留行TLC 色譜圖

2.2 乳康舒HPLC 法測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SBC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B）（梯度洗脫：0～23 min，12%A；23～25 min，29%A；25～40 min，29%A）；檢測波長：230 nm（芍藥苷）、270 nm（淫羊藿苷、王不留行黃酮苷）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取淫羊藿苷、芍藥苷、王不留行黃酮苷對照品適量，加60%甲醇制成每毫升含40 μg、40 μg、10 μg 的混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 取本品內容物研細，取約0.3 g 精密稱定，加入60%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用60%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性供試品溶液制備 按本膠囊生產工藝制備缺淫羊藿、白芍、王不留行藥材的陰性供試品樣品，按“2.2.3”項下方法制備，即得。

2.2.5 專屬性考察 取對照品、供試品、陰性供試品溶液，精密吸取20 μL，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定，結果見圖3。陰性供試品在對照品相同保留時間處未出現對應色譜峰，表明陰性無干擾。

圖3 檢測波長（A）230 nm、（B）270 nm 下的高效液相色譜圖

2.2.6 線性關系 精密稱取淫羊藿苷、王不留行黃酮苷、芍藥苷對照品適量，加60%甲醇制成濃度分別為2、10、20、40、80、100、160、200 μg·mL-1的系列對照品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下分別進樣20μL。以濃度（X，μg·mL-1）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，結果見表1。3 種成分在各自濃度范圍內線性關系良好。

表1 線性關系考察結果

2.2.7 進樣精密度試驗 精密吸取“2.2.2”項下對照品溶液20 μL，在“2.2.1”項色譜條件下連續進樣測定6 次，計算得淫羊藿苷、王不留行黃酮苷和芍藥苷峰面積的RSD 分別為0.12%、0.60%和0.14%，表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩定性試驗 取“2.2.3”項下供試品溶液，按“2.2.1”項色譜條件于0、2、4、6、8、10、12、24 h 進樣測定，測得淫羊藿苷、王不留行黃酮苷和芍藥苷的峰面積RSD 分別為0.52%、1.35%和0.24%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.2.9 重復性試驗 取同一批樣品（批號16100791），按“2.2.3”項下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定，測得淫羊藿苷、王不留行黃酮苷和芍藥苷含量的RSD 分別為0.29%、1.72%和0.76%，表明該方法重復性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 取本品適量（批號171116ML），研細，取約0.15 g，精密稱定，精密加入混合對照品溶液（含淫羊藿苷55.27 μg·mL-1、王不留行黃酮苷17.22 μg·mL-1、芍藥苷84.19 μg·mL-1）25 mL，再加入60%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，用60%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。按“2.2.1”項色譜條件進樣測定。結果淫羊藿苷的回收率為103.94%～105.41%，平均回收率為104.90%，RSD 為0.53%（n=6）；王不留行黃酮苷的回收率為99.81%～101.70%，平均回收率為100.90%，RSD 為0.72%（n=6）；芍藥苷的回收率為100.99%～102.84%，平均回收率為102.00%，RSD 為0.69%（n=6）。

2.2.11 定量限 取“2.2.6”項下對照品溶液（淫羊藿苷1.93 μg·mL-1、芍藥苷1.95 μg·mL-1、王不留行黃酮苷1.87 μg·mL-1）稀釋，按“2.2.1”項色譜條件進樣測定，信噪比為10 時，即為定量限，淫羊藿苷、王不留行黃酮苷、芍藥苷的定量限分別為0.89、4.65、4.30ng。

2.2.12 樣品含量測定 取3 批樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，另取“2.2.2”項下對照品溶液，均在“2.2.1”項色譜條件下依法測定，結果見表2。

表2 含量測定結果（n=2）

3 討論

3.1 薄層色譜法展開系統的篩選

在淫羊藿TLC 定性鑒別時，選擇以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水、三氯甲烷-甲醇-水下層溶液等[1]展開劑進行考察，最終確定了甲醇-丁酮-三氯甲烷-水（4∶6∶6∶1）作為展開劑。在王不留行TLC 定性鑒別時，選擇以三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液、甲醇-水、正丁醇-乙酸乙酯-水的上層溶液等[1，5]展開劑進行考察，均不太理想，最終確定了正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸（4∶1∶5∶0.5）的上層溶液作為展開劑。

3.2 高效液相色譜法相關條件的篩選

本實驗對提取溶劑（50%、60%、70%甲醇）、提取方法（超聲、靜置1 h 后超聲）、超聲提取時間（30、45、60 min）進行了考察比較，最終確定供試品溶液提取方法為60%甲醇、超聲提取30 min。

本法采用DAD 檢測器，在190～800 nm 波長范圍內進行掃描，結果淫羊藿苷、王不留行黃酮苷在波長270 nm 附近有最大吸收，芍藥苷在波長230 nm附近有最大吸收，故選擇270nm、230nm 為檢測波長。