微小核糖核酸miR-613通過下調E2F5的表達抑制前列腺癌細胞增殖

何 巖，韓廣業(yè)，劉 沛，李澤宇，李建昌，吳春磊

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院泌尿外科，河南衛(wèi)輝 453100)

微小RNA(miRNA)是一類含有18～24個核苷酸的短小非編碼RNA，可以結合信使RNA(mRNA)的3′非翻譯區(qū)(3′-untranslated regions,3′-UTRs)，然后促進miRNA-mRNA誘導沉默復合物形成，并降解靶向的mRNA[1]。已有很多研究表明miRNA參與多種生物學過程，如細胞分化、增殖、凋亡和轉移[2]。miRNA與癌癥的發(fā)生密切相關，主要作為潛在的致癌基因和腫瘤抑制基因發(fā)揮作用，越來越多的數據顯示，miRNA是新型治療靶點和生物標志物的新興候選者，能夠預測腫瘤患者的預后[3-4]。miR-613在多種腫瘤中表達異常，并可能與腫瘤的預后相關，參與調劑多種腫瘤細胞的侵襲、轉移和增殖等生物學過程，如乳腺癌、肝癌、前列腺癌等[5-7]。因此，2016年9月至2018年2月期間，我們實驗組用前列腺癌細胞系PC3和LnCap細胞為研究對象，研究miR-613在前列腺癌中的表達及對前列腺癌細胞增殖的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料miR-613和miR-NC(廣州銳博生物科技有限公司)；人前列腺上皮細胞RWPE-1以及人前列腺癌細胞系LnCap、DU145和PC3；胎牛血清、Opti-MEM?無血清培養(yǎng)基、Keratinocyte-SFM培養(yǎng)基(美國GIBCO公司)、RPMI1640培養(yǎng)基(美國GIBCO公司)；Lipo 3000轉染試劑、PCR引物(上海Invitrogen公司)；SYBR Green Real Time PCR Master Mix試劑盒、PrimeScriptTMRT-PCR逆轉錄試劑盒(大連寶生物工程有限公司)、All-in-oneTMmiRNA qPCR kit(廣州復能基因公司)；一抗鼠抗E2F5(英國 abcam公司)；辣根過氧化物酶標記的二抗羊抗小鼠IgG(武漢博士德公司)、一抗GAPDH(武漢博士德公司)；Cell Counting Kit-8試劑盒(上海碧云天公司)；RNA酶抑制劑(美國 Sigma公司)；Dual-Luciferase Reporter System (美國Promega公司)；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)；超敏ECL發(fā)光試劑盒(美國 Millipore公司)。

1.2 前列腺癌組織提取及細胞培養(yǎng)前列腺癌組織和前列腺正常組織于2017年5月至10月收集于河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院泌尿外科。……