豬群在不同生長期白細胞介素監測

細胞因子具有多種生物學效應，由特定的細胞分泌的小分子多肽，它能夠調節細胞免疫功能、介導炎癥反應，還參與免疫反應、機體的修復等多種生理活動。細胞因子通常可分為趨化與黏附因子、集落刺激因子和生長因子、白細胞介素（IL）、干擾素和腫瘤壞死因子。

作為一類細胞因子，白細胞介素主要通過與細胞表面的受體相結合，作用于白細胞，同時也可作用于其他細胞。它們可作用于同一種免疫細胞,之間可以相互作用,而它們自身又受到機體內多種因素的調節。白細胞介素具有多種生物學功能,可刺激細胞增殖和分化、提高機體抗感染和細胞殺傷能力、調節細胞膜表面分子的分泌合成、調理炎性反應、協助完成造血干細胞、血管內皮細胞和神經細胞的生命活動等。白細胞介素多肽鏈被糖基化，因糖基不同，其半衰期及功能都有所不同。

白細胞介素根據產生反應的不同分為Th1和Th2種類型，其中Th1白細胞介素包括IL-2、IL-12、IL-18等，主要參與細胞介導的免疫應答，也可以刺激B細胞產生抗體；Th2白細胞介素包括IL-4、IL-5、IL-10等，通常參與B細胞活化，并調節抗體的產生，主要調節動物機體體液免疫應答。白細胞介素可作為分子佐劑，適用于多種抗原疫苗，以增強疫苗的免疫效果。IL-2、IL-4、IL-5是三種功能不同的白介素，但它們之間有密切的相關性。IL-2能調控免疫系統中白細胞的活性，促進T細胞的增殖，參與抗原抗體反應及造血和腫瘤的監控；IL-4活化B細胞、刺激T細胞增殖，增強CTL細胞毒活性、巨噬細胞的吞噬及表達MHCII的能力，還可以促進EPO、G-CSF、M-CSF和IL-3的克隆；IL-5促進B細胞生長、分化，并刺激B細胞產生抗體，促進B細胞、T細胞產生IL-2受體，誘導CTL形成，促進酸性粒細胞分化、成熟。本文通過監測不同生長階段豬群IL-2、IL-4、IL-5的水平，來評估動物在不同階段的免疫水平，為提高動物抵御疫病能力及養殖場生產效率提供依據。

一、材料與方法

1.實驗器材。單道、12道移液器、96孔U型血清稀釋板、37℃恒溫培養箱、洗液器、離心機、iMark-酶標儀。

2.血清樣品。江西某養殖場提供2、4、6、8、10、12、24周齡商品豬血清各30份。

3.所用試劑盒。豬白細胞介素2、豬白細胞介素4、豬白細胞介素5酶聯免疫分析試劑盒，均購自上海酶聯生物科技有限公司。

4.實驗方法及判定標準。采用固相ELISA測定實驗動物血清中IL-2、IL-4、IL-5的水平,具體方法如下：

1）分別設置標準品孔和樣品孔，標準品孔加50uL不同濃度的標準品。

2）設置空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，剩余步驟相同）、待測樣品孔。在待測樣品孔中先加樣品稀釋液40uL，然后再加待測樣品10uL。

3）每孔加入酶標試劑100uL，空白孔除外。

4）用封板膜封板后，置于37℃避光溫育30min。

5）將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。

6）小心揭開封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，如此重復5次，拍干。

7）每孔先加入顯色劑A 50uL，再加入顯色劑B 50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min。

8）每孔加終止液50ul，終止反應（此時藍色轉變為黃色）。

9）以空白孔調零，測定各孔的OD450nm（測定應在加終止液后15min以內進行）。

結果計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

二、結果

1.在豬群的生長階段，IL-2始終處于相對較高的水平，IL-5次之，IL-4含量相對較低。

2.豬群在2～10周齡三種白細胞介素的含量變化不明顯，處于相對穩定的水平，10～12周齡三種白細胞介素的含量均有所升高，IL-2的增高幅度較為明顯，監測到24周齡，三種白細胞介素都出現下降趨勢(見表1、圖1）。

三、討論

1.2～4周齡仔豬處于哺乳階段，因母乳中含豐富的細胞因子，仔豬可以通過攝取母乳來獲得IL-2、IL-4、IL-5；此階段豬只的免疫系統還發育不完善，受外界物質刺激不能夠產生大量的白細胞介素。

2.6～8周齡仔豬已經斷奶，仔豬又不能從其他途徑獲得IL-2、IL-4、IL-5，而不同的白細胞介素有各自的半衰期，使IL-2、IL-4、IL-5開始出現下降趨勢。

表1 三種白細胞介素在豬群不同生長階段的檢測結果

圖1 豬群生長周期內三種白細胞介素含量對比

3.10周齡的豬只免疫系統已經完善成熟，為提高動物機體的抗病能力，此時集中開始接種各種動物疫苗，在疫苗抗原的刺激下，IL-2、IL-4、IL-5增加明顯；隨著時間的延續，12～24周齡IL-2、IL-4、IL-5逐漸開始下降。

4.IL-2、IL-4、IL-5不僅可以作用于免疫細胞，而且它們之間也相互作用調節，這種嚴密的調節機制，能使機體免疫機能處于相對穩定的狀態，更高效的發揮各種細胞因子在體內的調節作用。

綜上所述，白細胞介素在機體免疫應答過程起著重要的作用，同時它們的水平也能反應出豬群在各個生長階段抵御疫病侵襲的能力，為養殖戶做好動物疫病的防控提供科學可靠的參考依據，最大限度的提高生產效率。