五味接骨膠囊對昆明種小鼠毒性的觀察

王彥坤

（河南省通許縣人民醫院，河南 通許 475400）

五味接骨膠囊是我院制劑室研制的一種中藥制劑，主要成分有馬錢子、自然銅、地龍、枳殼、雞蛋殼，具有散瘀止痛、接續筋骨的作用，用于治療跌打損傷、骨折等。五味接骨膠囊中含有馬錢子（有大毒），為保證臨床用藥安全，我們在河南大學藥物研究所作了急性毒性試驗，以急性毒性研究技術為指導原則［1］，觀察昆明種小鼠灌胃（ig）給予五味按骨膠囊后的毒性反應及嚴重程度。

1 材料與方法

1.1 藥材與藥品

1.1.1 藥材處方馬錢子［制］，自然銅［制］、地龍、枳殼、雞蛋殼組成，藥材來源河南禹州市供應站，經鑒定符合《中國藥典》一部收載藥材，并對馬錢子、自然銅依據《中藥炮制大全》［2］進行炮制，雞蛋殼自制，經洗、挑、揀，除去皮洗凈即得。

1.1.2藥品將五味藥材混合均勻，粉碎成80目，裝入0號膠囊制成五味制劑膠囊，80粒/瓶，每粒0.45 g。本次實驗使用藥品（河南省通許縣人民醫院制劑室提供，批號：20140211）。

1.2 試驗材料

1.2.1 動物動物為昆明種小鼠（由河南省醫學實驗動物中心提供，合格證號：4100115），體質量18～22 g，雌雄各半，在實驗觀察1 w后，隨機分組。基礎飼料由河南省醫學實驗動物中心飼料廠提供，為全價營養顆粒飼料。

1.2.2 實驗條件實驗室溫度：（23±3）℃，濕度：（55±10）%，自然光明7：00～19：00，自由飲水（常用自來水），定量投食，換氣頻率10～15次/h，籠具平均更換1次/3 d，更換后消毒，籠底墊料為刨花木屑，晾曬后消毒使用。

1.3 藥物與試劑

將膠囊內藥物4.05 g加入0.5%的羧甲基纖維納（CMC-Na溶液，上海化學試劑采購供應站，批號：710419）中制成濃度為0.405 g/mL混懸藥液備用。

1.4 實驗與分組

1.4.1 預試驗分組取小鼠20只，隨機分為5組，每組4只，雌雄各半。第1組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10 g，4只小鼠均死亡；第2組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g，3只小鼠死亡。取濃度0.405 g/mL混懸藥液5mL稀釋成0.135 g/mL，備用。第3組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10g，1只小鼠死亡；第4組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g，無小鼠死亡；第5組小鼠灌胃溶積0.19 mL/10 g，1只小鼠死亡。故4/4死亡最小劑量為8.1 g/kg；0/4死亡最大劑量為243 g/kg。

1.4.2 試驗分組取小鼠160只，體質量18～22 g，隨機分為8組，每組20只，雌雄各半。試驗前禁食12h，自由飲水。第1～7組為五味接骨膠囊組，相鄰高、低組給藥劑量比值為1∶0.8，則各組給藥劑量分別為：8.1 g/kg、6.48 g/kg、5.184 g/kg、4.1472 g/kg、3.3178 g/kg、2.6542 g/kg、2.1234 g/kg。第8組為0.5%的CMC-Na溶液對照組。各小鼠灌胃溶積為0.2 mL/10 g。采用低比稀釋法配藥：根據預試結果，小鼠全死劑量Dmas＝8.1 g/kg、k=0.8、n＝20，小鼠體質量為18～22 g，每組20只，總體質量約為400 g，用藥量為0.2 mL/10g（20 mL/kg）。

1號藥液濃度＝Dmax/用藥量=8.1 g/kg/20 mL/kg=0.405 g/mL。

每組藥液量=每組小鼠總體質量×用藥量=400 g×20 mL/kg=8 mL（最少8 mL，為配藥方便并留有余地，取10 mL）。

1號藥液量＝每組藥液量/（1-k）=10/（1-0.8）mL=50 mL。

精確配制濃度為0.405 g/mL混懸藥液50 mL，從中吸取10 mL為1號液供第1組用藥。在余下的40 mL藥液中加入0.5%的CMCNa溶液10 mL，混勻后，從中吸取10 mL為2號液，供第2組用藥。依此類推，配制出一系列比值為1∶0.8的藥液。

1.5 觀察指標

包括一般指標（如動物外觀、行為、分泌物、排泄物等）；死亡情況（死亡時間、死亡時反應等）。大體解剖所有小鼠，器官出現異常時進行組織病理學檢查。

1.6 統計學方法

采用改良寇氏法計算LD50：

注：Xmax為最大劑量的對數值，∑P為各組小鼠死亡率總和，i為相鄰兩組劑量的對數之差。

注：Sx50為LD50的標準差，n為各組小鼠數，∑P為各組小鼠死亡率總和，∑P2為各組小鼠死亡率平方的總和，i為相鄰兩組劑量的對數之差。

LD50的95%平均可信限=LD50士4.5LD50Sx50。

2 結果

2.1 一般指標

用藥后1～7組小鼠均出現明顯鎮靜、閉目等中樞抑制現象，表現為自主活動減少；皮毛、清潔度、兩便均無異常；瞳孔、眼險、分泌物均正常，未見流淚、流涎等現象。對照組小鼠均未出現明顯興奮躁動、豎尾等興奮現象；皮毛、清潔度、兩便均無異常；瞳孔、眼險、分泌物均正常，未見流淚、流涎等現象。

2.2 死亡情況

1～7組小鼠均出現死亡，死亡時間為灌胃后30～85 min。死亡前均出現明顯的興奮不安，逐漸轉為精神萎磨不振，并出現四肢強直性痙攣。對照組無小鼠死亡。各組死亡情況見表1。

2.3 計算結果

按改良冠氏法計算：

LD50的95%平均可信限＝LD50±4.5×LD50×SX50＝ 3.8361±4.5×3.8361×0.02318＝3.8361±0.4001

2.4 臟器

各小鼠于給藥后第14天處死解剖，各器官體積、顏色、紋理均正常。

表1 1～7組小鼠死亡情況

3 討論

五味接骨膠囊中馬錢子為馬錢子科植物馬錢子（Strychnos nux-vomicaL）或云南馬錢子（S.PierrianaA .W.Hill）的干燥成熟種子，味苦、寒、有大毒，歸肝、脾經，且有通絡止痛、散結消腫，用于風濕頑痹、麻木癱瘓、跌打損傷、面神經麻痹、坐骨神經痛等。馬錢子雖有大毒，卻臨床療效顯著，應用千年而不衰，被稱為“毒藥猛劑，善起沉疴”的典范。藥以用量而能，藥以用量而用［3］，馬錢子用量范圍為0.3～0.6 g。馬錢子含總生物堿2%～5%，主要為番木鱉（士的寧）及馬錢子堿，番木鱉堿約占總生物堿45%左右，是主要的有毒成分。為減少馬錢子的毒性，使用之前常需炮制。一般炮制方法為砂炒，實驗發現，砂炒馬錢子因砂燙時受熱程度不同，番木鱉堿的含量亦不同，當溫度達到210℃以上，該堿的含量降低，溫度達290℃時，顏色變成褐色，番木鱉堿含量持續降低，但治療效果也大大降低［4］。為防止番木鱉堿受熱過分分解，砂燙溫度應控制在220℃～240℃，5～6 min即可，顏色一般以棕色至棕褐色為度［5］。我院炮制馬錢子合格，用量適宜，為臨床用藥安全，特對五味接骨膠囊進行小鼠灌胃［ig]毒性試驗，結果顯示，五味接骨膠囊LD50為3.8361（灌胃），相當于臨床用量的56.83倍，提示五味接骨膠囊具有一定的毒性，但毒性較低，對機體產生的毒性反應及嚴重程度較低，臨床用藥安全。