調(diào)心安神針法預(yù)處理對缺血再灌注性心律失常模型兔的心肌保護(hù)作用

王長春，王 銳*，李明妍，郭 麗，崔華峰，陳新勇，韓 晶，徐 敏，王碧君，趙蒙蒙

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南 250011；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，濟(jì)南 250014）

缺血再灌注性心律失常是缺血心肌再灌注后引起的損傷，與氧自由基、細(xì)胞間耦聯(lián)、鈣離子、自主神經(jīng)及體液系統(tǒng)等多種因素相關(guān)[1]。前期研究證實(shí)，調(diào)心安神針法可以調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞Cx43磷酸化水平及心肌血管緊張素Ⅱ受體、β腎上腺素能受體的表達(dá)，明顯縮短室性心律失常的持續(xù)時(shí)間[2-4]。本實(shí)驗(yàn)通過左冠狀動脈前降支結(jié)扎的方法制作兔RA模型，觀察調(diào)心安神針法對其血清CK-MB、LDH、SOD的影響，探討該針法對RA兔的心肌保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動物分組與造模 40只健康家兔，體重1.5～2.0 kg左右，雌雄各半，由濟(jì)南西嶺角生物科技有限公司提供，合格證號：SCXK（魯）20150001。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、針刺組、胺碘酮組，每組10只。再灌注性心律失常模型復(fù)制參照Reffelmann的方法，耳緣靜脈注射20%烏拉坦（4 mL/kg）全身麻醉，將呼吸機(jī)導(dǎo)管連接氣管插管，給予機(jī)械通氣，呼吸頻率30次/min，吸呼比1：1.5，通氣流量根據(jù)肺膨脹大小調(diào)整。開胸，在左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿線、結(jié)扎，立即監(jiān)測心電圖Ⅱ?qū)?lián)T波、ST段的變化。以左室前壁發(fā)紺及心電圖ST段抬高≥0.5 mV為缺血標(biāo)志。結(jié)扎40 min后，松開硅膠管，恢復(fù)左前降支灌流60 min。恢復(fù)心肌血流灌注后，抬高的ST段相對降低（＞50%），并且缺血區(qū)域心外膜顏色恢復(fù)紅潤。連續(xù)記錄心電圖至手術(shù)完畢。假手術(shù)組：穿線，不結(jié)扎，靜置100 min。針刺組：在造模7天前開始給予調(diào)心安神針法預(yù)治療，1次/d，共7 d。針刺組和模型組第8天造模取材。胺碘酮組：于再灌注即刻泵入胺碘酮（3 mg/kg溶于生理鹽水5 mL中），5 min泵入完畢。所有實(shí)驗(yàn)均遵循國家實(shí)驗(yàn)動物護(hù)理和使用指南進(jìn)行。

1.2 針刺方法 參照中國針灸學(xué)會實(shí)驗(yàn)針灸研究會制訂的“動物針灸穴位圖譜”，針刺靈臺、神道、內(nèi)關(guān)、百會。靈臺、神道穴位于背部胸椎6、7及5、6棘突間，均向上斜刺5 mm，用震顫法快速小幅度行針1 min后起針；內(nèi)關(guān)穴位于前臂下1/6折點(diǎn)處內(nèi)側(cè)，橈、尺骨間隙中，雙側(cè)內(nèi)關(guān)分別直刺5 mm，行針1 min后接電針治療儀，疏密波，刺激強(qiáng)度以家兔上肢出現(xiàn)輕微顫動為度；百會穴位于第7腰椎與第1薦椎棘突間，向后平刺5 mm。

1.3 檢測指標(biāo)及方法 試驗(yàn)結(jié)束后，取頸動脈血離心，取上清液，- 20℃冰箱凍存，酶聯(lián)免疫法檢測CKMB、LDH、SOD。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采集后，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，并進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較，見表1。

3 討論

近年來，隨著缺血/再灌注（I/R）的治療進(jìn)展，RA因其與心源性猝死密切相關(guān)[5]而逐漸引起人們的重視。研究[6]發(fā)現(xiàn)，RA的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多因素相互作用的級聯(lián)反應(yīng)，能量代謝障礙和再灌注后產(chǎn)生過多的活性氧簇（ROS）是再灌注損傷發(fā)生的主要病理生理基礎(chǔ)；大量ROS損傷生物膜，并使線粒體結(jié)構(gòu)和功能受損，導(dǎo)致鈣超載，心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載引起的觸發(fā)活動和再灌注后ROS的爆發(fā)導(dǎo)致的折返激動是RA發(fā)生的主要機(jī)制[7]。RA還與再灌注時(shí)間有關(guān)，時(shí)間過短，心肌電穩(wěn)定性強(qiáng)；時(shí)間過長，則損傷大，導(dǎo)致電活動也喪失，二者均不易發(fā)生RA[8]。

表1 各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較（±s ，n = 10）

表1 各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較（±s ，n = 10）

注：與假手術(shù)組比較，# P＜0.01；與針刺組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.01

組 別CK-MB/（ng/mL）LDH/（ng/mL）SOD/（U/mL）假手術(shù)組 16.17±4.32 69.30±14.39 111.38±10.23模型組 79.87±6.65# 321.02±14.16# 26.38±7.41#胺碘酮組 43.23±4.16#△▲ 176.49±16.89#△▲ 69.80±9.18#△▲針刺組 48.63±4.68#▲ 191.34±13.49#▲ 59.26±9.61#▲

CK和LDH是心肌細(xì)胞胞質(zhì)中存在的兩類酶，當(dāng)細(xì)胞膜通透性增加時(shí)，這些物質(zhì)能透過細(xì)胞膜釋放到冠狀動脈中[9]。心肌酶的釋放量是缺血心肌損害程度的重要標(biāo)志[10]，而心肌酶漏出是心肌缺血再灌注損傷主要表現(xiàn)之一[11]。SOD廣泛存在于組織細(xì)胞內(nèi),可通過自身氧化還原反應(yīng)將毒性極強(qiáng)的超氧化物自由基陰離子O2-而岐化成無毒的O2和H2O2，是消除自由基對機(jī)體損傷的關(guān)鍵酶[12]。本研究發(fā)現(xiàn)，RA模型兔血清CK-MB和LDH含量均明顯升高，SOD含量明顯降低。

胺碘酮為一種常用的高效抗心律失常藥物[13]，對心肌細(xì)胞膜的鈉、鈣和鉀通道有抑制作用，可降低竇房結(jié)、普肯耶纖維的自律性和傳導(dǎo)性，特別對急性心梗后發(fā)生的室速是最有效藥物之一[14]。此外，胺碘酮也有擴(kuò)張冠狀動脈，減少心肌耗氧量，及清除氧自由基，保護(hù)心肌細(xì)胞免受氧化損傷作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，胺碘酮能顯著降低RA模型兔血清CK-MB、LDH含量，提高SOD含量。

心肌缺血預(yù)適應(yīng)（IPC）[15]對心肌具有強(qiáng)大的內(nèi)源性保護(hù)作用，能顯著減少在隨后較長時(shí)間缺血后所引起的高能磷酸化合物的耗竭和心肌梗死面積，有效地減少心肌缺血再灌注損傷。近年來，IPC誘導(dǎo)因素發(fā)展到針灸預(yù)適應(yīng)，即通過針刺預(yù)處理達(dá)到缺血預(yù)適應(yīng)樣的作用。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，調(diào)心安神針刺法預(yù)處理可明顯降低RA模型兔CK-MB、LDH水平，提高SOD水平。這可能是通過提高SOD活性，減輕自由基對細(xì)胞的損傷，減輕心肌超微結(jié)構(gòu)破壞，促進(jìn)離子通道功能恢復(fù)等多種途徑，從而恢復(fù)心肌正常收縮及傳導(dǎo)功能，實(shí)現(xiàn)針刺對RA心肌的保護(hù)作用。