慢病毒介導FGFR1沉默對肺癌細胞增殖和凋亡的影響

（開封市中心醫院 心胸外科，河南 開封 475000）

肺癌是常見的惡性腫瘤，發病率居惡性腫瘤的第2位，病死率居首位，對人類健康造成嚴重威脅，因此探尋早期診斷的特異性指標成為目前肺癌的研究熱點[1]。成纖維生長因子受體 1（fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1）在乳腺癌、胃癌、肺癌等惡性腫瘤組織中呈高表達，且應用于臨床鱗狀細胞癌的篩查，在肺癌靶向治療中具有廣闊前景，但具體作用機制尚未完全闡明[2-4]。本研究探討慢病毒介導FGFR1沉默對肺癌細胞增殖、凋亡的影響，以期為肺癌靶向治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 細胞系

肺癌細胞A549、H3255、A-427購自美國典型菌種保藏中心（ATCC），腎上皮細胞293T購自中國科學院上海生命科學研究院生物化學與細胞生物學研究所。

1.2 主要試劑與儀器

慢病毒載體pLVTHM購自武漢淼靈生物科技有限公司，MTT試劑盒購自上海嶸崴達實業有限公司，Trizol、PrimeScriptTMRT Reagent Kit購自大連寶生生物工程有限公司，AnnexinV-FITC/PI細胞凋亡雙染試劑盒購自杭州昊鑫生物科技股份有限公司，酶標儀購自美國Molecular Devices公司，BCA檢測試劑盒購自北京天根生化科技有限公司，FBS、DMEM購自美國Gibco公司，37℃、5%二氧化碳CO2培養箱購自中國賽默飛世爾科技有限公司（上海），FGFR1單克隆抗體購自武漢艾美捷科技有限公司，β-actin單克隆抗體購自上海西格瑪奧德里奇貿易有限公司，IRDye 680RD Donkey Anti-mouse IgG購自美國LI-COR公司，FACScan流式細胞儀購自美國BD公司。

1.3 篩選高表達 FGFR1 mRNA 的肺癌細胞

采用含10% FBS的DMEM完全培養基，在37℃、5% CO2培養箱中培養A549、H3255、A-427肺癌細胞。用Trizol法分別提取細胞總RNA，按照PrimeScriptTMRT Reagent Kit說明書將提取的總 RNA 逆轉錄為cDNA，用德國 Mastercycler?ep realplex 實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）儀檢測 FGFR1 mRNA 的相對表達量。……