HPLC 法同時測定3 種材質藥用塑料瓶中5 種抗氧劑含量

饒艷春 熊 煒 朱碧君

江西省藥品檢驗檢測研究院江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，江西南昌 330029

藥用塑料瓶是由塑料吹塑加工成型而成，常用的材料有聚丙烯（PP）、聚乙烯（PE）、聚酯（PET）等，因具有無毒、耐腐蝕、強度高及質輕攜帶方便等優點，現已廣泛用于固體制劑和液體制劑的包裝[1-3]。在塑料的生產過程中，為使其在儲存、使用過程中更加穩定，不因光、氧等因素的影響而導致材料老化、性質改變等問題，通常需加入多種助劑，如抗氧劑、抑酸劑、潤滑劑等，這些添加劑在適當的條件下可以從塑料中遷移出來，影響藥物的穩定性，進入人體易引發安全性風險[4-6]。“藥品包裝材料與藥物相容性試驗指導原則”規定塑料包裝材料應重點考察添加劑、加工時分解產物對藥物的影響[7]。本研究參考相關文獻[8-15]，建立了高效液相色譜法同時測定PP、PE、PET 為原料制成的藥用塑料瓶中5 種抗氧劑含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260 高效液相色譜儀（美國Agilent）；MS105 電子天平（瑞士梅特勒公司0.01 mg）；BAS224S 電子天平（德國賽多利斯0.1 mg）；Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Micropure uv/uf 超純水儀（美國賽默飛世爾）。

1.2 試藥

抗氧劑1010、168、1076、330，批號：MKBC8710、MKAA3717、MKBB8963、05928TI，含量：98%、98%、99%、99%，均由SIGMA-ALDRICH 提供；抗氧劑BHT（批號：LB68565，含量99.9%），由SUPELCO 提供；甲醇為色譜純，由SIGMA-ALDRICH 提供；水為超純水。22 批樣品由13 個廠家提供，見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇（A）∶水（B），梯度洗脫（0～7 min，90%A；7～8 min，90%A→100%A；8～43 min，100% A；43～44 min，100% A →90% A；44～55 min，90%A），檢測波長278 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，進樣量10 μL。

表1 樣品信息

2.2 對照液制備

2.2.1 對照儲備液 精密稱取抗氧劑BHT、330、1010、1076、168 各0.05 g，分別置于100 mL 容量瓶中，加稀釋液（甲苯∶甲醇=2∶3）至刻度。

2.2.2 混合對照液 精密吸取上述對照儲備液各5 mL置50 mL 量瓶中，加稀釋液至刻度，再依次稀釋成5、10、20、30、40、50 mg/L。

2.3 供試品溶液

精密稱取剪碎樣品2 g，置具塞錐形瓶中，加稀釋液20 mL，稱定重量，加熱回流3 h，放冷，用稀釋液補足減少的重量，用0.25 μm 微孔濾膜過濾。

2.4 空白溶液

不加樣品，按照“供試品溶液”制備方法進行操作。

2.5 系統適用性試驗

取空白溶液、混合對照液、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結果顯示，5 種抗氧劑理論塔板數均＞20 000，各成分峰分離良好，分離度均＞5.0。見圖1。

2.6 線性關系考察

取“2.2.2”項下混合對照液，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積Y 為縱坐標，質量濃度X（mg/L）為橫坐標進行線性回歸，結果見表2。

2.7 檢測限與定量限

取混合對照液逐步稀釋后，按“2.1”項下色譜條件測定，以信噪比3∶1、10∶1 時的進樣量為檢測限、定量限。見表3。

2.8 精密度試驗

精密吸取“2.2.2”項下濃度為50 mg/L 混合對照液，按“2.1”項下色譜條件，進樣6 次，結果抗氧劑BHT、1010、330、1076、168 峰面積的RSD 分別為0.21%、0.10%、0.23%、0.09%、0.11%（n ＝6），說明方法精密度良好。

2.9 重復性與穩定性試驗

精密稱取3 種材質的樣品（批號：170501、161003、16011901），各6 份，分別加入對照液適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件測定，計算含量（n=6），取重復性試驗樣品液分別于0、2、4、8、12、24 h 進樣10 μL，記錄峰面積，結果顯示方法的重復性良好，供試品溶液在24 h 內穩定。見表4。

圖1 空白溶液、混合對照品和供試品溶液高效液相色譜圖

表2 回歸方程、相關系數和線性范圍

表3 檢測限與定量限結果（ng）

2.10 樣品含量測定

取“2.3”項下制備的供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定（n=2），結果顯示，抗氧劑BHT 均未檢出，口服液體藥用聚酯瓶、聚酯藥用滴眼劑瓶未檢出抗氧劑，其余結果見表5。

表4 重復性與穩定性試驗的結果（RSD，%，n=6）

表5 樣品含量測定結果（μg/g）

2.11 加樣回收率試驗

精密稱取3 種材質已知含量的樣品（批號：170501、161003、16011901，分別為樣品1、2、3，樣品3 中未檢出抗氧劑）適量，各9 份，按樣品含量的80%、100%、120%分別加入對照液適量。按“2.3”項下方法制備回收率溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。樣品1、2 加樣回收率結果見表6。

3 討論

通過比較丙酮、環己烷、異丙醇、甲苯∶甲醇等溶劑對抗氧劑的提取情況，結合提取溶劑與流動相互溶情況，確定以甲苯∶甲醇（2∶3）作為提取溶劑，預實驗選擇超聲和加熱回流兩種提取方法進行比較，回流提取效果更好，同時比較回流時間對抗氧劑提取量的影響，結果加熱回流3 h 基本提取完全[16-20]。

分別以甲醇∶水、乙腈∶四氫呋喃∶水、乙腈∶甲醇為流動相，不同流速、不同梯度洗脫程序考察抗氧劑的分離效果，采用甲醇∶水為流動相梯度洗脫，各成分色譜峰分離效果最佳。

表6 加樣回收率試驗結果（n=9）

由于樣品中未檢出抗氧劑或檢出部分抗氧劑，所以樣品加入對照液進行重復性和穩定性試驗。國內外標準及相關資料，對抗氧劑限度均有規定，如食品藥品監督管理局要求食品中抗氧劑總量不得超過0.02%，《歐洲藥典》規定非腸道制劑及眼科制劑用容器PE、PP等材料中抗氧劑添加不能超過3 種，單個抗氧劑及抗氧劑總量均不得超過0.3%。GB9685-2016 規定抗氧劑BHT 在PE、PP 中不得超過0.5%，PET 中不得超過0.13%，抗氧劑1010、330、1076 在PE、PP、PET 中均不得超過0.5%，抗氧劑168 在PE 中不得超過0.2%，PP 中不得超過0.25%[21-23]。本次試驗每批樣品中檢出的抗氧劑不超過3 種，總量≤0.047%，小于《歐洲藥典》和GB9685-2016 規定的限值，該方法可用于3 種材質藥用塑料瓶中5 種抗氧劑的測定，可為藥用塑料瓶質量研究及藥物相容性試驗提供參考。