三種丙型肝炎病毒檢測方法結果分析

陳武轉 李錦霞 陶敏 常艷軍

摘要：目的：比較酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法、膠體金法檢測丙型肝炎抗體和熒光定量PCR法檢測HCV-RNA三種方法檢測丙型肝炎病毒的結果，為臨床提供參考數據。方法：采用ELISA法和膠體金法檢測2000例患者血清中丙型肝炎病毒抗體；用熒光定量PCR法檢測HCV抗體陽性患者血清HCV-RNA。結果：2000例患者ELISA檢測抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%；膠體金法檢測抗HCV陽性27例，陽性率為1.35%；ELISA法檢測HCV抗體陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例，膠體金法檢測抗HCV陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例；熒光定量PCR法HCV-RNA檢測陽性患者ELISA法和膠體金法檢測結果均為陽性。結論：目前臨床檢測丙型肝炎病毒感染主要有ELISA法、膠體金法和熒光定量PCR法三種，ELISA法和膠體金法檢測HCV抗體陽性率基本一致；ELISA法和膠體金法HCV抗體陽性者熒光定量PCR法檢測HCV-RNA結果一致。

關鍵詞：丙型肝炎病毒 ELISA法膠體金法熒光定量PCR

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）主要經輸血途徑傳播，母嬰垂直、吸毒等途徑也可傳播，感染者可引起丙型肝炎。我國HCV感染率約為3.2%，大約有3～4千萬感染者，是HCV感染的高流行的國家之一[1]，山西省運城市中心醫院丙型肝炎抗體陽性率約為1.4%[2]。急性HCV感染者如不能及時給予有效的治療，部分患者會發生急性丙型肝炎，又有部分患者會轉變為慢性丙型肝炎、進一步發展為肝硬化、肝癌，肝癌患者需要放療、化療等綜合治療，會給患者及其家庭帶來巨大的精神和經濟負擔，感染者也可能會繼續傳染給他人，嚴重威脅人類的生命健康。由于目前丙型肝炎病毒還沒有研制出有效的相關疫苗，因此，丙型肝炎病毒感染成為威脅人類的病毒之一，醫院有必要開展相應的檢測方法，我院開展了用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）和膠體金法檢測血清中抗HCV，開展熒光定量PCR法檢測HCV-RNA，為臨床提供丙型肝炎病毒相關檢測。本課題選取山西省運城市中心醫院來院就診患者，用ELISA法和膠體金法檢測其血清中丙型肝炎抗體，用熒光定量PCR檢測血清中HCV-RNA，并分析三種方法的檢測結果。

1資料與方法

1.1 一般資料回顧分析2018年7月至12月山西省運城市中心醫院2000例住院和門診患者，其中，男988例，女1012例，年齡7～75歲。所有被選患者均進行了ELISA法和膠體金法檢測丙型肝炎病毒抗體，抗HCV陽性患者進行熒光定量PCR法HCV-RNA檢測。

1.2檢測方法

所有來院受試患者均早上空腹，在肘靜脈按標準步驟采血，分別采集3 ml兩管靜脈血于真空采血管，用低速離心機分離血清，ELISA法和膠體金法檢測血清中丙型肝炎病毒抗體用其中一管，熒光定量PCR法HCV-RNA檢測用另一管，三種檢測方法均嚴格按說明書操作規程進行檢測。三種方法進行實驗時，均在分析前、分析中和分析后給予質量控制，（1）分析前：標本采集按操作規范采集、實驗室環境適宜，檢查移液器、洗板機、酶標儀、PCR分析儀等儀器狀態；（2）分析中：實驗過程能要正確選擇檢驗試劑，且所選用的試劑盒在使用有效期內，試劑盒包裝完整，無細菌污染。加樣過程中加樣準確、嚴格孵育時間、保持實驗過程中儀器運行狀態；（3）分析后：檢測完成后，由檢驗專業人員對報告進行審查；所有檢驗標本均冷凍保存，以備再次核查。ELISA法檢測HCV抗體試劑盒購自珠海麗珠試劑股份有限公司，膠體金法檢測HCV抗體試劑條購自杭州艾康生物科技有限公司，熒光定量PCR法HCV-RNA檢測試劑盒購自湖南圣湘科技股份有限公司。

3 結果

2000例患者ELISA檢測抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%；膠體金法檢測抗HCV陽性27例，陽性率為1.35%；ELISA法檢測HCV抗體陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例，膠體金法檢測抗HCV陽性者熒光定量PCR法HCV-RNA陽性5例；熒光定量PCR法HCV-RNA檢測陽性患者ELISA法和膠體金法檢測結果均為陽性。

4討論

丙型肝炎病毒可引起丙型肝炎，急性丙型肝炎病毒感染者如不能早期診斷，得不到有效的治療可發展為慢性丙型肝炎、進一步可發展為肝硬化，甚至部分患者發展為肝癌，最后給患者的健康和其家庭的生活質量造成嚴重的危害，因此，必須加大對HCV感染的檢測。目前臨床上主要用ELISA法和膠體金法檢測HCV抗體，其中ELISA法試劑成本低，所用儀器不復雜，一般臨床醫院都可提供相應試劑盒設施，也適用于批量標本檢測，是目前用于血液篩查和臨床檢測最廣泛的檢測HCV抗體的方法，但對于標本量特別少的機構和急診檢測就不太適合；膠體金法檢測抗HCV的原理是用膠體金作為標記抗體，當樣品中有抗HCV時則與HCV抗原結合后而出現紅色線，此法操作簡單、快速、無需特殊的儀器，10min可以判讀結果，是一種優化的方法，一般臨床醫院甚至診所基本都能滿足相應的條件，對于急診和標本量特別少的機構來說有其優點，但對于弱陽性的表現度較差，容易造成弱陽性標本的漏讀和誤讀，陽性率低于ELISA法。本課題ELISA法檢出抗HCV陽性28例，陽性率為1.40%，而膠體金法檢測抗HCV陽性為27例，陽性率為1.35%，可見，膠體金法陽性率略低于ELISA法，而且膠體金法與ELISA法比較試劑成本偏高、靈敏度相對較低，性價比跟準確度方面都略遜于傳統的ELISA法。膠體金和ELISA法檢測出抗HCV陽性也可能是曾經感染過，要確定有丙肝感染還需進行HCV-RNA檢測，本課題熒光定量PCR法測HCV-RNA陽性5例。HCV是嗜肝臟病毒，主要在肝臟中復制，血液內的含量與丙型肝炎的輕重有關[3]，也是反映HCV傳染性的指標[4]。熒光定量PCR與ELISA法和膠體金法檢測HCV感染方法相比較，環境要求高，在全封閉的環境下進行HCV-RNA及產物的擴增檢測，實現了PCR的擴增、探針的雜交及產物分析一體化，大大減少了實驗室污染因素，檢測過程操作簡便、速度快，對整個反應過程實現了實時監控，是目前診斷丙肝病毒感染的重要參考指標，還可以對丙肝患者治療進行監測。

由此可見，丙型肝炎病毒檢測對人群健康具有重要的作用，目前臨床檢測丙型肝炎病毒感染主要有ELISA法、膠體金法和熒光定量PCR法三種，ELISA法和膠體金法檢測HCV抗體陽性率基本一致；ELISA法和膠體金法HCV抗體陽性者熒光定量PCR法檢測HCV-RNA結果一致。對于篩查丙肝感染者可選擇膠體金和ELISA法，急診、標本量少者可選擇膠體金法。對于有條件者可開展HCV-RNA檢測，為臨床提供有效的檢測方法。無論哪種方法，均需進行嚴格的質量控制，保證結果的準確性。

參考文獻：

[1]Wasley A，Alter MJ.Epidemiology of hepatitis C：geographic differences andtemporal trends[J].Semin Liver Dis，2000，20（1）：11-16.

[2]陳武轉，常艷軍，趙瓊瓊.2014年-2016年運城某醫院丙型肝炎抗體檢測結果分析[J].基層醫學論壇 2017，21（16）：2114-2115.

[3]韓俊英，曾瑞萍.熒光定量PCR技術及其應用.國外醫學遺傳學分冊[J]，2000，23（3）：117—120.

[4]趙秀麗，單實年，張建瓊，等.樹狀DNA技術在HCV檢測中的應用[J].臨床檢驗雜志，2003，21（1）：27.