復(fù)合真菌多糖調(diào)節(jié)免疫活性研究

摘 要：真菌多糖具有多方面的生物活性。本文選取多種食用真菌，提取復(fù)合真菌多糖溶液，測定其多糖含量及免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)果表明：溶液中多糖含量為4.82%，中劑量組、高劑量組能顯著提高免疫低下小鼠的機(jī)體免疫功能，具有免疫調(diào)節(jié)功效。

關(guān)鍵詞：復(fù)合真菌多糖;使用真菌;免疫調(diào)節(jié)

食用真菌是我國的一大產(chǎn)業(yè)。多糖是由多個單糖分子縮合、失水而成，是一類分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜的糖類物質(zhì)。研究表明，食用真菌所含的真菌多糖具有多方面的生物活性，如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒等方面，因此對真菌多糖進(jìn)行研究具有十分重要的意義[1-2]。

1 復(fù)合真菌多糖溶液制備

選取香菇、茯苓、靈芝和猴頭菌等干燥食用真菌，混合粉碎過篩，加入3倍體積（重量）的水，煎煮30 min，

離心;沉淀繼續(xù)加水，重復(fù)煎煮1次，離心，合并離心上清液，減壓濃縮至原重量。

2 多糖含量測定

除去樣品中的蛋白質(zhì)后，利用還原糖的還原特性，以次甲基藍(lán)為指示劑，先加入定量鐵氰化鉀溶液，然后用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)滴定液進(jìn)行氧化還原滴定，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)滴定液的消耗量，計算還原糖含量，最終得出多糖含量。

3 免疫調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)

3.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級小鼠，體重：20～30 g，合格證號：44002100010104，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.2 主要試劑及儀器

主要試劑：環(huán)磷酰胺、西班牙瓊脂糖，購于瑞舒生物科技有限公司;凍干豚鼠血清（補(bǔ)體）、兔抗綿陽紅細(xì)胞抗體（溶血素），購于鄭州生物科技有限公司。

主要儀器：電子分析天平AE240、高速冷凍離心機(jī)、微量取樣器。

3.3 實(shí)驗(yàn)方法

將小鼠隨機(jī)分成正常對照組、模型對照組、復(fù)合多糖低劑量組、中劑量組和高劑量組。每組10只（每組用15只，防止部分小鼠死亡）。參考FDA推薦量，以人體10倍劑量為低劑量組，20倍劑量為中劑量組，30倍劑量為高劑量組對各組小鼠灌胃：低劑量組3.3 mL/（kg·d）（以體質(zhì)量計，下同），中劑量組灌胃6.6 mL/（kg·d），高劑量組9.9 mL/（kg·d），模型組和正常對照組灌胃蒸餾水，灌胃量為0.01 mL/g，每天一次，連續(xù)30天。模型對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組均于首次給藥后第1、3、5、17、19天和21天皮下注射環(huán)磷酰胺40 mg/kg，1次/天，建立免疫功能低下小鼠模型;正常對照組小鼠皮下注射等量生理鹽水。于末次給藥后，各組小鼠禁食不禁水12 h，然后進(jìn)行各免疫指標(biāo)測定。

將持續(xù)灌胃30 d的小鼠稱質(zhì)量后引頸處死，解剖取小鼠脾、 胸腺， 稱質(zhì)量，計算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)測得多糖含量為4.82%，動物實(shí)驗(yàn)表明（表1所示），模型組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均低于其他各組，和空白組相比，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明環(huán)磷酰胺降低了模型小鼠的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù);復(fù)合真菌多糖中劑量組、高劑量組的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)高于模型組，且中劑量組與模型組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高劑量組與模型組的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明復(fù)合真菌多糖中劑量組、高劑量組可提高免疫低下小鼠的脾臟、胸腺指數(shù)。

表中數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;*、**分別代表與模型組相比在P<0.05和P<0.01水平上的差異。

5 結(jié)論

本文采用環(huán)磷酰胺作為免疫抑制劑，建立了免疫低下模型小鼠，研究復(fù)合真菌多糖對模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明，復(fù)合真菌多糖中劑量組、高劑量組能顯著提高免疫低下小鼠的機(jī)體免疫功能，具有免疫調(diào)節(jié)功效。對復(fù)合真菌多糖相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)具有參考意義。

參考文獻(xiàn)

[1]歐陽天贄，李小定，榮建華.真菌多糖抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18（3）：524-528.

[2]郭春沅.真菌多糖的免疫調(diào)節(jié)作用[J].中國食用菌，2000，19（3）：6-7.

作者簡介：周建湘（1988—），男，漢族，湖南湘潭人，碩士，工程師。研究方向：食品生物技術(shù)、藥品研發(fā)。