農田土壤中3種典型飼料添加劑含量分析方法的建立與優化

鄧輔財 廖桂紅 陳詩其 嚴家俊 羅毓鈞 牛顯春

摘要：研究建立了農田土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇等3種典型飼料添加劑含量分析方法，并進行優化。結果表明：0.05mol/L磷酸二氫鉀作為提取液的提取效果明顯優于rrl醇：水（1：1）、純甲醇2種提取液;超聲提取法也優于斡旋振蕩和搖床振蕩提取法;優化后的分析方法對上述3種藥物的一次加標回收率分別為45.1%-50.0%、54.1%-65.2%和87.4%-100.6%.

關鍵詞：氨苯胂酸;洛克沙胂;喹乙醇;農田土壤;高效液相色譜

中圖分類號：S816.7文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.004

0引言

氨苯胂酸（Arsanilicacid）又稱阿散酸，是一種5價有機砷制劑[1]。砷是一種原漿毒，對蛋白的巰基有很強的親和力，砷可與酶蛋白分子上的2個巰基或羥基結合生成穩定的復合物或環狀化合物，它們可抑制組織中大量巰基依賴性酶并使其失去活性，即引起細胞變性，進而影響正常代謝細胞[2]。洛克沙胂（Roxarsone）化學名為3一硝基-4-輕基一苯胂酸，其分子量為26304，分子式C_{6H6AsN06。洛克沙胂是砷的有機形態，可以轉化成毒性較強的金屬鹽[3]。有機胂藥物飼料添加劑（氨基苯胂酸、洛克沙胂）南于具有抗菌、促生長、改進動物生產品質等作用，在動物養殖方面廣泛應用[1]。喹乙醇（Olaquindox）是一種喹嗯琳類藥物，商品名為快育靈[5]。長期使用喹乙醇飼養動物可引起動物中毒。喹乙醇會引起雞中毒，中毒癥狀為不進食，雞冠呈紫黑色，缺乏活力，腹瀉，最后掙扎而死。毒理學研究發現，喹乙醇及其代謝物會引起動物體光毒反應、腎臟毒性反應、遺傳毒性、致突變性和致癌性[6]。目前對這些藥物的分析方法大多集中為禽畜農產品[7]、飼料[8]、禽畜糞便[9-10]等樣品，對土壤樣品則報道較少。同時靈敏、準確檢測土壤樣品中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇殘留的檢測方法則更是缺乏。因此，研究擬建立一種準確、快速分析土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇殘留的方法，對防治土壤飼用藥物污染和農產品安全生產具有重要的理論和現實意義。}

1材料與方法

1.1試劑與藥品試驗用的3種飼用藥物（氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇）標樣均采購于上海恒遠生物科技有限公工司其純度均大于96%，乙腈和甲醇均為色譜純級;冰醋酸和磷酸二氫鉀均為分析純;試驗用水為高純水，配置緩沖溶液用水為超純水。

1.2方法

1.2.1土壤中3種飼用藥物不同提取液加標回收率測定準確稱量1.00009土壤樣品放入離心管中，加入102ug/mI的氨苯胂酸標準品貯備液、138ug/mI的洛克沙胂標準品貯備液和174ug/ml.的喹乙醇標準品貯備液各1mI，平衡48h后，分別以5mI0.05mol/I磷酸二氫鉀、甲醇與水溶液（1：1）和純甲醇3種試劑作為提取液，分別超聲提取30、60min后，置于離心機中，4000r/min離心5min，將上清液轉移至另一個干凈離心管中。向沉淀土樣中再加入提取液5mL，重復上述步驟，重復提取一次，收集并合并提取液，最后用MultivaporP-12型平行蒸發儀將提取液濃縮至1mI。提取液過0.22um濾膜凈化后，收集于色譜瓶中，待測。同時做不加3種標準貯備液的土樣空白對照。

1.2.2土壤中3種飼用藥物的提取方法回收率對比試驗采用0.05mol/L磷酸二氫鉀提取液5mI溶液，采用3種不同提取方法（斡旋震蕩法、搖床震蕩法、1.3的超聲提取法）對土樣中的上述3種藥飼用物進行加標回收率的測定，同時做不加土樣處理的空白對照。1.2.3高效液相色譜（HPLC）檢測方法色譜條件：流動相為0.05mol/L磷酸二氫鉀一0.3%乙酸與乙腈溶液的比例為0.9：0.1，流速為1mL/min;檢測波長為266nm，進樣體積為20uL，平衡時間為30min，采用Waters018色譜柱，柱溫為30℃。

2結果與分析

2.1提取液的優化將0.05mol/L磷酸二氫鉀、甲醇與水（1：1）、純甲醇3種溶液作為提取液時超聲30min和60min加標回收率見圖1、圖2、圖3。氨苯胂酸、洛克沙胂和喹乙醇3種飼用藥物均能被磷酸二氫鉀提取液超聲提取出來，3種藥物的30min超聲提取回收率分別為47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分別為62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取時間的回收率差異不大。而甲醇與水（1：1）和純醇2種提取液不能同時把3種物質提取出來。另外，采用這些提取液提取空白土樣時均未檢出待測目標物，所以這些提取液不會對實際土樣的測定產生干擾。

2.2提取方法的優化

目前對上述含有3種飼用藥物的實際環境樣品的前處理方法研究主要有消化、斡旋震蕩、搖床震蕩、超聲等提取方法，如王付民采用1111HNO₃：H₂O₂（V：V）對豬場附近稻田土壤中的阿散酸進行消化提取;張沖[12]采取了超聲方法對土壤中喹乙醇進行提取。但這些提取方法要么繁瑣操作不便，要么僅局限于單獨含有砷[11]或者喹乙醇樣品[10.12]， 對3種物質同時存在，需要對3種物質同時進行前處理的情況卻鮮見報道。故研究采用0.05mol/L磷酸二氫鉀提取液5mL溶液，采用3種不同提取方法（斡旋震蕩20min、搖床震蕩1h、超聲提取法）對上述3種飼用藥物共存的土樣，同時進行加標回收率測定，以探索同時提取3種藥物的可行性，試驗結果見圖4。3種方法中超聲提取法的回收率最高，其余2種方法均太低，不宜使用。張沖[12]對比超聲破碎儀提取、振蕩提取和超聲提取3種不同提取方法對土壤中喹乙醇的提取效率時也發現超聲提取效率最高，與研究的結果大致一致。故研究確定最優的提取方法：采用磷酸二氫鉀作為提取液進行超聲提取，超聲時間設為30min，且為保證提取完全，提取次數為2次。

3 結束語

研究優化了土壤中3種飼用藥物的分析檢測方法。3種飼用藥物均能被磷酸二氫鉀提取液超聲提取出來，3種藥物的30min超聲提取回收率分別為47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分別為62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取時間的回收率差異不大。0.05 mol/L磷酸二氫鉀作為提取液的提取效果明顯優于甲醇與水（1：1）、純甲醇2種提取液;超聲提取法也優于斡旋震蕩和搖床震蕩提取法。

參考文獻

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