山西省2015-2016年食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè)的病原學(xué)特征分析

郝瑞娥,姚素霞,張秋香,楊紅霞,王 洋,韓吉婷

食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè)是食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作的重要內(nèi)容,山西省自2012年開(kāi)始在全省哨點(diǎn)醫(yī)院開(kāi)展食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)的病原體包括沙門(mén)菌,志賀菌、副溶血性弧菌、腸致瀉性大腸埃希菌(包括腸致病性大腸埃希菌EPEC、腸侵襲性大腸埃希菌EIEC、腸集聚性黏附大腸埃希菌EAEC、腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌ETEC),現(xiàn)將山西省2015-2016年食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè)病原學(xué)特征、血清型分布、耐藥性和分子分型進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 材料 采集由食品或懷疑由食品引起的腹瀉標(biāo)本,每日排便3次或3次以上,且糞便性狀異常(稀便、水樣便、粘液便、膿血便等),取病人新鮮糞便＞5 g/mL,于清潔、干燥、無(wú)吸水性的無(wú)菌容器中,然后用棉拭子轉(zhuǎn)入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中,在冷藏條件下24 h內(nèi)送至太原市級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)完成后于每月的第1和第3周將分離的菌株集中送到山西省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。山西省級(jí)疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)食源性致病菌分離株的復(fù)核、血清學(xué)分型、耐藥性試驗(yàn)和分子分型。

1.2 儀器與試劑 藥敏連續(xù)加樣儀(美國(guó)Thermog公司);CHEF-DR III system脈沖場(chǎng)凝膠電泳儀(美國(guó)Bio-Rad公司);Gel Dol XR凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司)。科瑪嘉沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基(批號(hào):P000653);SS培養(yǎng)基(批號(hào):150415);TCBS瓊脂(150729);食源性革蘭陰性菌板(批號(hào):B5534);限制性內(nèi)切酶XbaI(批號(hào):0421602);蛋白酶k(批號(hào):10744100),所用試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 方 法

1.3.1 病原菌的分離與鑒定 將上述的菌株按照《食源性疾病監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》要求的方法進(jìn)行生化、血清學(xué)鑒定。

1.3.2 藥敏實(shí)驗(yàn) 采用微量肉湯稀釋法對(duì)鑒定的菌株進(jìn)行MIC值測(cè)定,藥物有氨芐西林、氨芐西林舒巴坦、四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、頭孢唑林、環(huán)丙沙星、甲氧芐啶磺胺甲惡唑、頭孢他啶、亞胺培南、萘啶酸、頭孢西丁、頭孢噻肟、慶大霉素、阿奇霉素。按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,結(jié)果根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI2013)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。

1.3.3 分子分型 按照國(guó)家食源性疾病分子溯源網(wǎng)絡(luò)(TraNet)中沙門(mén)菌脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)標(biāo)準(zhǔn)分型方法進(jìn)行操作,PFGE圖像應(yīng)用Bio Numerics 6.6軟件進(jìn)行分析。

1.4 質(zhì)量控制 藥敏實(shí)驗(yàn)以大腸埃希菌ATCC25922、ATCC35218作為質(zhì)控菌株,沙門(mén)菌PFGE分型采用沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H9812。

2 結(jié) 果

2.1 致病菌的檢出情況 2015-2016年共采集腹瀉樣本2 505份,檢出致瀉性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、志賀菌,副溶血性弧菌共157株,其中致瀉大腸埃希菌82株,沙門(mén)菌51株,志賀菌14株,副溶血性弧菌10株(見(jiàn)表1)。

表1 2015-2016年山西省食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè)致病菌檢出陽(yáng)性數(shù)及陽(yáng)性率Tab.1 Positive number and positive rate of food-borne diseases detected by active monitoring of pathogenic bacteria in Shanxi,2015-2016

2.2 致病菌的病原分型

2.2.1 致瀉性大腸埃希菌分型 共檢出82株,其中EPEC 37株、EAEC 24株、ETEC19株、EIEC 2株。

2.2.2 沙門(mén)菌血清分型 2015-2016年共分離到沙門(mén)菌51株,主要為腸炎沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌,腸炎沙門(mén)菌18株,鼠傷寒沙門(mén)菌15株。腸炎沙門(mén)菌的血清型均為[9,12:g,m:-],鼠傷寒沙門(mén)菌中,其中12株為2相缺失的鼠傷寒沙門(mén)菌,其血清型為[4,5,12:i:-],是鼠傷寒沙門(mén)氏菌主要血清型。其次為紐波特沙門(mén)菌4株,山夫登堡沙門(mén)菌和乙型副傷寒沙門(mén)菌各3株,德?tīng)柋吧抽T(mén)菌和羅森沙門(mén)菌各2株,阿西納沙門(mén)菌、溫斯頓沙門(mén)菌、甲型付傷寒沙門(mén)菌、基伍沙門(mén)菌各1株。

2.2.3 志賀菌血清分型 共分離到志賀菌14株,其中宋內(nèi)氏志賀菌9株,福氏志賀菌2a型4株,福氏志賀菌Xv型1株。

2.2.4 副溶血性弧菌 2015-2016年共分離到副溶血性弧菌10株,毒力基因全部為tdh陽(yáng)性。

2.3 致病菌的耐藥特征

2.3.1 致瀉性大腸埃希菌 對(duì)亞胺培南100%敏感,對(duì)甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、頭孢他啶、頭孢唑林、頭孢西丁敏感率分別為93.90%、93.90%、87.80%、85.37%。對(duì)紅霉素的耐藥率為98.78%(見(jiàn)表2)。

表2 山西省2015-2016年致瀉性大腸埃希菌藥敏結(jié)果Tab.2 Drug resistance of Escherichia coli in Shanxi,2015-2016

2.3.2 沙門(mén)菌 對(duì)亞胺培南、頭孢西丁、頭孢他啶、慶大霉素、頭孢噻肟的敏感率分別為100%、98.04%、94.19%、88.24%、86.27%(見(jiàn)表3)。

2.3.3 志賀菌 對(duì)亞胺培南、頭孢西丁、頭孢他啶的敏感率分別為100%、92.86%、85.71%。對(duì)甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、氨芐西林、紅霉素耐藥率均為100%,對(duì)慶大霉素的耐藥率為85.71%,說(shuō)明志賀菌多重耐藥現(xiàn)象特別嚴(yán)重。

2.3.4 副溶血性弧菌 對(duì)環(huán)丙沙星、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、萘啶酸、慶大霉素、氨芐西林、舒巴坦、亞胺培南均為100%敏感,對(duì)氯霉素、四環(huán)素、頭孢西丁、頭孢噻肟均為90%敏感。

2.4 沙門(mén)菌PFGE分型 山西省2015-2016年分離到的51株沙門(mén)菌用限制性內(nèi)切酶XbaⅠ酶切進(jìn)行PFGE分子分型,并對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行圖譜聚類(lèi)分析,結(jié)果2015-2016年沙門(mén)菌相似度在56.3%～100%之間,根據(jù)菌株間相似性100%視為同一PFGE帶型。51株菌共產(chǎn)生32種條帶。其中有7組PFGE帶型是100%相似。其中有1次為鼠傷寒沙門(mén)菌(ZD-16-004～ZD-16-006)聚集性暴發(fā),通過(guò)聚類(lèi)發(fā)現(xiàn),該事件來(lái)自同一菌株感染。18株腸炎沙門(mén)菌有2組相同的PFGE帶型(見(jiàn)圖1)。

表3 山西省2015-2016年沙門(mén)菌藥敏結(jié)果Tab.3 Antibiotic susceptibility of Salmonella in Shanxi,2015-2016

3 討 論

2015-2016年山西省食源性疾病監(jiān)測(cè)的4種病原體中,致瀉性大腸埃希菌的分離率最高,沙門(mén)菌次之,志賀菌和副溶血性弧菌分離率較低,山西省屬于內(nèi)陸省份,吃海鮮產(chǎn)品相對(duì)較少,故副溶血性弧菌檢出率較低。

沙門(mén)菌,在自然界分布廣泛,血清型眾多,目前已知的血清型有2 500多種,山西省2015-2016年食源性疾病監(jiān)測(cè)中,分離到的沙門(mén)菌共10個(gè)血清型,說(shuō)明山西省食源性疾病沙門(mén)菌感染存在多態(tài)性。其中腸炎沙門(mén)菌分離率第一,其血清型為[9,12:g,m:-],這與河南省監(jiān)測(cè)報(bào)道一致[1],其次為鼠傷寒沙門(mén)菌,其血清型為[4,5,12:i:-],是鼠傷寒沙門(mén)菌變種的單相沙門(mén)氏菌,其O抗原和H抗原第一項(xiàng)與鼠傷寒沙門(mén)菌相同,僅缺少H抗原第二相。目前腸炎沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌2相缺失型已成為山西省近幾年沙門(mén)菌最主要的血清型[2],也是我國(guó)與許多國(guó)家人群感染沙門(mén)菌病最常見(jiàn)的血清型,這與國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道一致[3-4]。

圖1 2015-2016年沙門(mén)菌聚類(lèi)分析圖Fig.2 PFGE patterns of the Salmonella in 2015-2016

沙門(mén)菌耐藥:近年來(lái),由于抗生素的廣泛使用甚至濫用,使沙門(mén)菌的耐藥越來(lái)越嚴(yán)重。本研究中,沙門(mén)菌對(duì)氨芐西林、奈啶酸、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、頭孢唑啉、四環(huán)素、氨芐西林/舒巴坦的耐藥率均在35%以上,沙門(mén)菌對(duì)亞胺培南100%敏感,這與廣東省[5-6]、河南省[7]報(bào)道一致。從而提示我們今后要在藥敏結(jié)果指導(dǎo)下合理應(yīng)用抗生素,防止多重耐藥株的流行及其變異。

副溶血性弧菌,毒力基因以tdh為主,與鄭文龍等[8]、呂虹等[9]報(bào)道一致,臨床分離株通常攜帶有毒力基因。藥敏結(jié)果提示:副溶血性弧菌對(duì)多種抗生素敏感,與文獻(xiàn)報(bào)道有一定的差異[10-11],而山西省分離到的菌株對(duì)氨芐西林100%敏感。說(shuō)明不同地區(qū)分離到的菌株對(duì)抗生素的耐藥性有一定的差異,進(jìn)一步提示我們各地應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果準(zhǔn)確用藥。繼續(xù)加強(qiáng)副溶血性弧菌的耐藥性監(jiān)測(cè),減緩副溶血性弧菌耐藥性的擴(kuò)散和傳播,具有重要的指導(dǎo)意義。隨著人們生活水平的提高及飲食多樣化,目前內(nèi)陸城市居民膳食食用水產(chǎn)品越來(lái)越多,所以副溶血性弧菌引起的腹瀉也應(yīng)該引起重視,做好衛(wèi)生宣教工作。

脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)(PFGE)是基于限制性內(nèi)切酶的分型方法,其原理通過(guò)改變脈沖電場(chǎng)的電流大小、方向和作用時(shí)間,有效分離DNA分子,各個(gè)菌株間通過(guò)比較電泳圖譜的條帶,分析菌株間有無(wú)關(guān)聯(lián),是否來(lái)自同一菌株,是目前分子分型技術(shù)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。通過(guò)2015-2016年沙門(mén)菌聚類(lèi)分析,鼠傷寒沙門(mén)菌(ZD-16-004～ZD-16-006)為聚集性暴發(fā),來(lái)自于一起鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的食物中毒[12]。18株腸炎沙門(mén)菌中,有2組相同的PFGE帶型分布于不同時(shí)間、地區(qū),說(shuō)明不同時(shí)期、不同地區(qū)能分離到相同血清型的同源性菌株。

目前食源性疾病發(fā)病由暴發(fā)逐漸轉(zhuǎn)為多點(diǎn)散發(fā)的趨勢(shì),為滿足公共衛(wèi)生事件的病原學(xué)溯源研究和分子流行病學(xué)研究,利用PFGE技術(shù)對(duì)沙門(mén)菌進(jìn)行精準(zhǔn)分型,PFGE技術(shù)既可以對(duì)表面上散發(fā)分布的病例尋找可能的聯(lián)系,也可對(duì)已確認(rèn)的暴發(fā)疫情進(jìn)行傳染源的追蹤,達(dá)到預(yù)防和控制的目的。采用PFGE分型技術(shù),相同血清型的菌株,PFGE圖譜不一定相同,據(jù)此可進(jìn)一步區(qū)分各菌株間的微小差別,從而在食源性疾病暴發(fā)調(diào)查及監(jiān)測(cè)中發(fā)揮重要的作用[13-15]。

利益沖突:無(wú)

引用本文格式:郝瑞娥,姚素霞,張秋香,等.山西省2015-2016年食源性疾病主動(dòng)監(jiān)測(cè)的病原學(xué)特征分析[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2019,35(9):852-856.DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.094