HPLC測定新蠶藥中磺胺嘧啶鈉

摘要：建立了新蠶藥中磺胺嘧啶鈉及其他２種有效成分的ＨＰＬＣ分析方法，液相分析條件為：以Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８（２）（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ μｍ）為色譜柱，以乙腈－０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸水溶液（體積比為８５∶１５）（三乙胺調(diào)磷酸－水溶液ｐＨ至 ２．５）為流動相，流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，柱溫３５ °Ｃ，檢測波長２３５ ｎｍ。結(jié)果表明，其有效成分的分離度為５．４和８．４，磺胺嘧啶鈉的理論塔板數(shù)為１１ １８５，在０．５～２００．０ μｇ／ｍＬ范圍內(nèi)檢測磺胺嘧啶鈉的線性關(guān)系良好，Ｒ２＝０．９９９ ９，回收率為９８．７０%～１０１．８１％，ＲＳＤ小于２．０％，檢測限為０．３ μｇ／ｍＬ。該法簡單、快速、準(zhǔn)確、選擇性高，適合新蠶藥中磺胺嘧啶鈉及另２種有效成分的定量檢測。

關(guān)鍵詞：ＨＰＬＣ；新蠶藥；磺胺嘧啶鈉；精密度；回收率；檢測限

中圖分類號：Ｏ６５７．７＋２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）22－4710-03

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ Ｓｏｄｉｕｍ ｉｎ Ｎｅｗ Ｓｉｌｋｗｏｒｍ Ｄｒｕｇ ｂｙ ＨＰＬＣ

ＺＨＯＵ Ｈｏｎｇ－ｙｉｎｇ，ＳＵＮ Ｂｏ，ＹＥ Ｊｉａｎ－ｍｅｉ，ＸＵ Ｓｈｕ－ｑｉｏｎｇ，ＷＵ Ｈｏｎｇ－ｌｉ

（Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｃｒｏｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅs， ＷｕＨａｎ ４３００64，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｔｈｅ ２ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｉｎ ｎｅｗ ｓｉｌｋｗｏｒｍ ｄｒｕｇ ｂｙ ＨＰＬＣ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ． Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｉｎ Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８（２）（１５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ， ５μｍ） ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．０５mol/L ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ （８５∶１５，Ｖ／Ｖ） （ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｐＨ ｔｏ ２．５） ａｔ ３５°Ｃ， ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ， ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ２３５ ｎｍ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｏｆ ３ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ５．４ ａｎｄ ８．４， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｐｌａｔｅ ｎｕｍｂｅｒ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ １１ １８５． Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ｌｉｎｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．５～２００．０ μｇ／ｍＬ ｆｏｒ ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ， Ｒ２＝０．９９９ ９． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ rate ｗａｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ９８．７０%～１０１．８１％， ＲＳＤ＜２．０％， ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ０．３μｇ／ｍＬ． Ｉｎ ａ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ， ｉｔ ｗａｓ ａ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ， ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒｅｌｉａｂｌｅ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ２ ｋｅｙ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｉｎ ｎｅｗ ｓｉｌｋｗｏｒｍ ｄｒｕｇ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＨＰＬＣ； ｎｅｗ ｓｉｌｋｗｏｒｍ ｄｒｕｇ； ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ ｓｏｄｉｕｍ； ａｃｃｕｒａｃｙ； ｒｅｃｏｖｅｒｙ； ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ

磺胺嘧啶鈉可有效防治家蠶黑胸?cái)⊙　㈧`菌敗血病等細(xì)菌病害，在蠶藥葉有較廣的應(yīng)用前景。獸藥標(biāo)準(zhǔn)中使用永停滴定法測定磺胺嘧啶鈉含量，ＨＰＬＣ檢測法報(bào)道較少。本研究建立了可同時(shí)檢測磺胺嘧啶鈉及其他兩種有效成分的ＨＰＬＣ法，為高效準(zhǔn)確檢測獸藥中磺胺嘧啶鈉提供了更為便捷的選擇。

１材料與方法

１．１材料及試劑

新蠶藥，湖北農(nóng)科生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)。磺胺嘧啶鈉標(biāo)準(zhǔn)品含量１００％，購于Ｓｉｇｍａ公司。甲醇和乙腈均為色譜純，購于山東禹王實(shí)業(yè)有限公司；去離子水。

１．２儀器和色譜條件

Ｗａｔｅｒｓ液相色譜系統(tǒng)（配制Ｗａｔｅｒｓ ６００控制器，Ｗａｔｅｒｓ ６００壓力泵，Ｗａｔｅｒｓ ２４８９檢測器，Ｗａｔｅｒｓ 在線脫氣機(jī)，Ｅｍｐｏｗｅｒ ２工作站；ＦＡ２１０４Ｎ型１／１００ ０００電子天平（上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司），ＣＦ－２０００Ｄ純水儀（北京長風(fēng)儀器儀表公司）。

１．３色譜條件

色譜柱為Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８（２）柱（１５０ mm×４．６ ｍｍ，５ μｍ），流動相為乙腈與磷酸－水溶液體積比１５∶８５，以０．０５ ｍｏｌ／Ｌ三乙胺調(diào)磷酸－水溶液ｐＨ至２．５；流速為１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；進(jìn)樣量為２０ μＬ；柱溫為３５ °Ｃ；檢測波長為２３５ ｎｍ。

１．４對照品母液的配制

精確稱取磺胺嘧啶鈉２５．０ ｍｇ置于５０ ｍＬ容量瓶中，用水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配成濃度為５００ μｇ／ｍＬ的儲備液。

２結(jié)果與分析

２．１藥物及對照品色譜圖

精確吸取磺胺嘧啶鈉儲備液５ ｍＬ，置于１００ ｍＬ容量瓶中混合，用０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸（ｐＨ ２．５）稀釋并定容至刻度，搖勻，進(jìn)樣２０ μＬ。稱取５ ｇ左右新蠶藥，置５００ ｍＬ量瓶中，加０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸溶液（ｐＨ ２．５）至刻度，充分溶解后，取５ ｍＬ溶液到５０ ｍＬ量瓶中，加０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸溶液（ｐＨ ２．５）稀釋至刻度，搖勻，精密量取２０ μＬ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖２）。

對照品及新蠶藥圖譜如下，新蠶藥圖譜中第二個(gè)峰即為磺胺嘧啶鈉，3成分分離度分別為５．４、８．４，理論塔板數(shù)分別為９ ３０３、１１ １８５、９ ９２１，均遠(yuǎn)高于分離度１．５，理論塔板數(shù)３ ５００的標(biāo)準(zhǔn)，滿足色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性的要求。

２．２標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

精確吸取磺胺嘧啶鈉儲備液２０ ｍＬ，置于５０ ｍＬ 容量瓶中，用０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸（三乙胺調(diào)ｐＨ至２．５）稀釋并定容至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液起始溶液，依次梯度稀釋，配制成濃度分別為２００、１５０、１００、５０、２５、１０、５、１和０．５ μｇ／ｍＬ的工作液，每種濃度重復(fù)測２次，進(jìn)樣２０ μＬ，記錄色譜圖（ｎ＝４）；以待測物峰面積為橫坐標(biāo)，待測物濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，各濃度點(diǎn)測定結(jié)果見表１，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖３。磺胺嘧啶鈉線性范圍為０．５～２００．０ μｇ／ｍＬ，在該范圍內(nèi)對照品濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，可以滿足定量分析的需要。

２．３方法的精密度

加一定量儲備液，配制低、中、高３個(gè)濃度的質(zhì)控（ＱＣ）樣品，濃度分別為２５、５０和１００ μｇ／ｍＬ，每個(gè)濃度設(shè)３個(gè)平行，連續(xù)３ ｄ進(jìn)行測定，峰面積代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中計(jì)算濃度。根據(jù)ＱＣ樣品結(jié)果計(jì)算本法的準(zhǔn)確度與精密度，數(shù)據(jù)見表２。每種濃度水平的ＱＣ樣品日內(nèi)精密度均小于２．０％，日間精密度均小于１．０％。

２．４回收率

加一定量儲備液，配制低、中、高三個(gè)濃度的質(zhì)控（ＱＣ）樣品，濃度分別為２５、５０和１００ μｇ／ｍＬ，每個(gè)濃度３個(gè)平行樣，進(jìn)行ＨＰＬＣ測定，峰面積代入２．２標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中計(jì)算濃度，測量值與實(shí)際配制的濃度之比，即為回收率。各濃度磺胺嘧啶鈉的回收率為９８．７０％～１０１．８１％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于２．０％。

２．５檢測限

將標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液中最低濃度０．５ μｇ／ｍＬ磺胺嘧啶鈉作為起始濃度，依次稀釋，每個(gè)濃度2個(gè)平行樣，依次進(jìn)行ＨＰＬＣ測定。信噪比為３∶１時(shí)注入儀器的濃度，即為檢測限。

本檢測條件下，磺胺嘧啶鈉檢測限為０．３ μｇ／ｍＬ（峰２，保留時(shí)間４．２７３ ｍｉｎ），其色譜圖見圖４。

３結(jié)果與討論

檢測中發(fā)現(xiàn)，調(diào)整流動相中水相的比例可提高對極性化合物的分離效果，而增加有機(jī)相的比例則有助于對疏水性化合物的分離。通過調(diào)節(jié)流動相ｐＨ，可以促進(jìn)或抑制化合物的解離，從而改善色譜行為和改善峰形。高于或低于被分析物的pKａ兩個(gè)ｐＨ單位的，有助于獲得好的、尖銳的峰。正確選擇緩沖溶液，對于優(yōu)化峰形，提高檢出限，以及穩(wěn)定保留時(shí)間十分重要。不恰當(dāng)?shù)模穑瓤赡軐?dǎo)致不對稱峰、寬峰、分裂峰或肩峰，而尖銳、對稱的峰形可在定量分析中獲得較低的檢測限，提高分析的重現(xiàn)性。

本研究中回收率采用測定含量與實(shí)際添加量的比值來表示，較為簡便，通常還用加樣回收率來測定回收率。兩種回收率的測定方法，有待進(jìn)一步比較。本方法的重復(fù)性、精密度、準(zhǔn)確性均在規(guī)定范圍內(nèi)，藥品中的輔料不干擾待測物的測定，該法快速、準(zhǔn)確、選擇性高，適合于新蠶藥中磺胺嘧啶鈉的質(zhì)量檢測。

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