云南廣南規模化豬場敗血型鏈球菌藥物敏感性研究

張 黎 劉萍丹 張艷朵 鄭龍龍

1.山西農業大學動物科學技術學院，山西太谷 030801；2.云南省文山壯族苗族自治州廣南縣農業農村和科學技術局，云南廣南 663300；3.云南省文山壯族苗族自治州廣南縣者兔鄉畜牧獸醫站，云南廣南 663300

豬鏈球菌廣泛存在于豬的上呼吸道、消化道和生殖道，該菌可在無臨床癥狀的情況下定殖。豬鏈球菌病在臨床上主要分為腦炎型、敗血型、關節型和淋巴結炎型，其中敗血型鏈球菌病發病最急，死亡率最高，危害最為嚴重[1-2]。豬敗血型鏈球菌病一年四季都可感染，其來勢猛、病程短、死亡率高，患病豬皮膚發紅，脾臟腫大，與非洲豬瘟臨床癥狀部分相似[3]，給養殖戶造成巨大心理恐慌。因此，在臨床中需要根據當地藥物敏感性選擇合適的藥物配合疫苗免疫進行防控。本研究通過分離和鑒定云南廣南縣部分規模化豬場發病豬的致病細菌，并對分離株進行敏感藥物性篩選，為云南廣南縣規模化豬場發生敗血型鏈球菌的臨床用藥提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2019年3月至5月采集來自云南省廣南縣20個規模化養殖場出現急性死亡，臨床上呈現敗血型、神經癥狀的豬肺臟20份，立即分離培養細菌。

1.2 試驗材料

MH藥敏培養基、葡萄糖肉湯、麥氏比濁管、藥敏紙片等，由山西農業大學病理實驗室提供。

1.3 細菌分離培養及鏡檢

按照常規細菌分離方法，將病料接種于葡萄糖肉湯中增菌12 h，取1.5 mL菌液1 000 r/min離心5 min后，棄去1 mL，混勻后取100 μL涂布于綿羊血瓊脂平板上，于37℃培養24 h，挑取可疑菌落作純培養后備用。

將可疑菌落進行涂片，革蘭氏染色，在顯微鏡油鏡下觀察細菌形態。

1.4 藥敏試驗

將分離菌株接種到營養肉湯中37℃恒溫培養12 h后，使用麥氏比濁管調整菌液濃度到1.5×108個/mL。按常規細菌接種方法取菌液100 μL均勻涂抹在MH藥敏培養基上，并貼上標準藥敏紙片（直徑6 mm），在4℃環境中放置30 min。然后再移入37℃恒溫培養箱中培養24 h，觀察并測量抑菌圈直徑后，判定依據參考美國《臨床實驗室標準化協會》相關標準。

2 結果與分析

2.1 培養特性

病料經肉湯擴菌后接種于血瓊脂平板上，37℃培養24 h，在瓊脂平板上長出細小菌落，血瓊脂平板上生長的菌落為細小、灰白色、濕潤、隆起呈半透明狀，菌落周圍有明顯的β溶血環，界限分明、完全透明的溶血環。

取菌落涂片進行革蘭氏染色鏡檢，可見成對或短鏈狀排列的革蘭氏陽性鏈球菌。

2.2 藥敏試驗

取上述分離菌按常規紙片法進行藥敏試驗，結果該分離菌對磷霉素鈉、恩諾沙星、阿莫西林、大觀霉素高度敏感，對β-內酰胺類（第三代頭孢類藥物頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林）、截短側耳素類（泰妙菌素）、氨基糖苷類（新霉素）、四環素類（土霉素、強力霉素）、氯霉素類（氟苯尼考）等藥物產生耐藥性（表1）。

表1 分離菌對臨床常用藥物的敏感性

3 討論

豬鏈球菌已成為規模化養豬場常見的高度傳染性病原菌，其中敗血型鏈球菌病死率較高，是危害最為嚴重的鏈球菌之一，可以通過多種渠道感染不同日齡豬群，常與豬圓環病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、巴氏桿菌混合感染[4-6]。因此，單獨使用市場上常見的疫苗進行預防效果欠佳。目前普遍采用多種抗生素綜合防控敗血型鏈球菌。因此，選擇合適的藥物顯得尤為重要。

敗血型鏈球菌的病原群、臨床癥狀、感染對象和耐藥性均趨于嚴重化[7-10]，阻礙了養豬業的進一步發展。豬鏈球菌最初被劃分為35個血清型[11-14]，每種血清型都含有較多序列類型，不同的鏈球菌感染在基因序列、血清、臨床癥狀、人畜共患性和流行潛力等方面具有特異性，導致難以研發通用型疫苗防治不同類型的豬鏈球菌感染[15-16]，因此迫切需要選擇敏感藥物對其進行控制。

磷霉素能破壞細菌細胞壁的完整性，并抑制其合成；同時，其還有利于其他藥物進入菌體，以不同的機制殺滅細菌。磷霉素與其他藥物無交叉耐藥性，可以與多種藥物發揮協同作用，如與頭孢哌酮、亞胺培南等聯用對甲氧西林耐藥性金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌臨床分離株的ED50和MIC降低至原來的十分之一至幾十分之一[17-19]。

本研究對分離獲得的病原菌株進行了7類12種抗生素的藥物敏感性分析，結果顯示致病性鏈球菌對磷霉素鈉、恩諾沙星、阿莫西林、大觀霉素敏感，對β-內酰胺類氨芐西林、阿莫西林、氨基糖苷類新霉素、四環素類土霉素、強力霉素、氯霉素類氟苯尼考產生耐藥性，呈現出多重耐藥性。