白芍水提物對牙周炎小鼠Th1/Th2極化的影響

李月梅 趙林 鄺亦元 謝美玲 宋寧(通信作者)

518026深圳市兒童醫院口腔科，廣東深圳

白芍是芍藥的干燥根，是我國著名的傳統中藥之一，臨床上廣泛用于類風濕性關節炎、腎病綜合征等免疫性疾病的治療。牙周病是口腔最常見的疾病之一，已經明確的是在牙周炎發病過程中，機體的免疫應答失衡，不僅加重了牙周組織的損傷，更會引起一系列的全身性疾病[1]。本研究思路基于中藥白芍可介導抗炎及免疫調節，通過對小鼠血清抗體IgG2a 和IgG1 水平變化進行檢測，從細胞免疫學角度反映Th1/Th2 偏移的變化[2]。

資料與方法

材料：清潔級12 周雄性昆明小鼠；白芍水提物(白芍水煮后干燥)；辣根過氧化物酶標記兔抗鼠IgG1 和IgG2a 抗體；腦心浸液(BHI)血瓊脂培養基。

方法：分組：小鼠48只，體重(30±2)g。按隨機數字表法分為正常對照組、牙周炎組、白芍治療組各16 只。用5-0非吸收醫用絲線嵌入第1 磨牙頸部，于近中牙齦處縫合結扎，制作小鼠實驗性牙周炎模型。臨床收集慢性牙周炎患者病變區齦下菌斑，并培養制作菌懸液(菌懸液為1.0×108CFU/mL)；在每只小鼠的結扎部位滴加菌懸液0.2 mL，每48 h 追加1 次，共追加3 次。4 周后牙齒松動，深牙周袋會出現在小鼠第1 磨牙牙周，牙槽骨吸收；小鼠牙周炎模型被成功建立。對照組無特殊處置，正常飲食。第5周起采用蒸餾水0.2 mL/d對對照組和牙周炎組進行灌胃；白芍治療組每天用0.6 g/kg 白芍水提物混懸液0.2 mL 灌胃。分別在第4、6、8、10 周對各組進行分批處死4只小鼠。

觀察指標：小鼠靜脈血收集采用摘眼球法，收集血清，保存于-20℃冰箱待測。ELISA法檢測血清抗體IgG1和IgG2a水平。用Bio-Rad 550 型酶標儀測量OD450值。

統計學方法：采用SPSS 13.0 統計學軟件分析數據。各組方差齊時，多個樣本均數間的兩兩比較采用最小顯著法(LSD)檢驗；方差不齊時用Tamhane's T2法；多樣本比較用完全隨機設計的單因素方差分析(One-Way ANOVA)；P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 各組小鼠血清IgG1水平(OD450值)變化比較(±s)

表1 各組小鼠血清IgG1水平(OD450值)變化比較(±s)

組別n4周(未治療)6周(治療2周)8周(治療4周)10周(治療6周)對照組40.392±0.0050.398±0.0040.399±0.0080.401±0.011牙周炎組40.259±0.0040.256±0.0050.245±0.0070.242±0.009白芍治療組40.260±0.0050.287±0.0050.303±0.0580.336±0.006

表2 各組小鼠血清IgG2a水平(OD450值)變化比較(±s)

表2 各組小鼠血清IgG2a水平(OD450值)變化比較(±s)

組別n4周(未治療)6周(治療2周)8周(治療4周)10周(治療6周)對照組40.607±0.0210.614±0.0050.608±0.0090.616±0.005牙周炎組41.208±0.0141.353±0.0101.414±0.0151.449±0.013白芍治療組41.223±0.0061.023±0.0320.851±0.0320.790±0.009

結 果

小鼠血清IgG1 水平變化：牙周炎組和白芍治療組IgG1 水平在各時間點明顯低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；白芍治療組IgG1 水平在治療后2、4 和6 周時明顯升高，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

小鼠血清IgG2a 水平變化：牙周炎組和白芍治療組IgG2a 水平在各時間點明顯高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)；白芍治療組IgG2a 水平在治療后2、4和6周時明顯下降，差異有統計學意義(P＜0.01)，見表2。

討 論

Th 細胞可分為2 個不同極向性的亞群。其中Th1 細胞亞群可以誘導產生抗體IgG2a，Th2 細胞亞群可以刺激產生抗體IgG1。實驗結果顯示，牙周炎組IgG2a水平在實驗的各時間點上明顯高于對照組，并逐漸升高，提示Th1型細胞因子的作用得到強化；而IgG1的水平逐漸降低，提示Th2型細胞因子的作用受到抑制。

常景芝等觀察到白芍總苷能降低對大鼠血清中炎性細胞因子IL-1 β、TNF-α等水平和膠原性關節炎足爪組織基質金屬蛋白9 表達，可明顯抑制大鼠膠原性關節炎。但Zhao 等用TGP 對自身免疫性疾病系統性紅斑狼瘡患者進行治療時觀察到，TGP 能顯著升高Th1 型細胞因子IFN-γ和IL-2 的水平，即促進Th1 型細胞因子分泌，緩解了患者的病情。實驗可知，用藥后2、4、6 周后，白芍水提提取物針對牙周炎有很好的治療作用。