貴州某大型三甲醫院丙型肝炎患者病毒基因分型的臨床研究

熊庭婷 羅新華 邵和軍

(貴州省人民醫院感染科，貴州 貴陽 550002)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后慢性化率為55%～85%，慢性丙型肝炎是肝硬化、肝癌的常見病因之一，每年因HCV感染導致的死亡病例約35萬。HCV 基因易變異，目前可至少分為6個基因型及多個亞型[1]。既往的研究證實，HCV不同基因型的流行率與感染途徑密切相關，HCV基因型為干擾素的治療應答的獨立預測因素，而近年來直接抗病毒藥物(DAA)也被證實其抗丙肝病毒療效也具有一定程度的基因型特異性[2]。因此了解HCV基因亞型的地區分布特點對疾病的防治具有重要的臨床意義。我們對近年來于貴州省人民醫院就診的丙肝患者感染的HCV 進行了基因分型和比較分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2015年11月至2018年6月期間，于貴州省人民醫院感染性疾病科門診或病房住院確診為慢性丙型肝炎的患者，共有359例。其中，男187例，女172例，平均年齡(42.05±11.32)歲。診斷標準符合中華醫學會肝病學分會和感染病學分會《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》。

1.2方法 患者血樣采用德國Qiagen公司提供的核酸(RNA)提取試劑盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)提取純化的HCV RNA，再使用定量PCR法，采用泰普生物科學(中國)有限公司提供的丙型肝炎病毒基因分型檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)進行檢測。將病例血清與裂解液預混，震蕩并孵育。加入異丙醇后，轉移至 DNA/RNA Column中。洗滌兩次后洗脫，制成RNA提取產物。分別取各亞型HCV RT-PCR反應液和酶系，混勻，各管分別按40 μL /管分裝到PCR反應管中。再往各亞型HCV RT-PCR反應液中分別加入25 μL礦物油、HCV RNA的提取產物10 μL?；靹?，放入熒光PCR儀，按試劑盒提供的程序條件進行擴增。對照試劑盒說明書進行結果判讀。

1.3統計學方法 采用SSPS 22.0軟件進行數據分析，計數資料組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HCV基因型結果檢測 結果顯示，共發現7種HCV基因亞型，其中1a型2例(0.56%)，1b型139例(38.72%)，2a型17例(4.74%)，3a型60例(16.71%)，3b型69例(19.22%)，6a型66例(18.38%)，6n型1例(1.67%)。

2.2不同性別組患者HCV基因型的分布 359例患者基因型在男女性患者中的分布見表1，男性和女性患者HCV基因型分布比較，差異無統計學意義(χ2=4.906，P=0.556)。

表1 不同性別組患者HCV基因型的分布[n(%)]

2.3不同年齡組患者HCV基因型的分布 HCV基因型在不同年齡段患者中的分布見表2，不同年齡段患者中HCV各基因型分布比較，差異有統計學意義(χ2=13.590，P=0.126<0.05)。在20歲以下年齡組中，僅檢出2名1b型感染者，20～39歲年齡組中，HCV感染主要型別為依次1b(27.3%)、3b(26.7%)、6a(23.3%)、3a(18.7%)型，隨年齡段的增長，1b型感染者比例逐漸升高，而3a、3b、6a型感染者比例逐漸下降。

表2 不同年齡組患者中HCV基因型的分布[n(%)]

3 討 論

HCV基因型分布模式與患者感染途徑及地理區域相關[3]，近年來的研究顯示，隨著時間推移，各地區HCV基因型分布模式也有所變化。統計研究提示中國大陸地區在大約2000年前后出現較明顯的HCV基因分布型的改變，中國大陸地區HCV基因型既往以1型、2型病毒株分布為主，鮮有3型及6型病毒株出現，而在大約2000年之后出現2型病毒株流行率逐漸下降，同時3型及6型病毒株流行率逐漸升高。

本研究結果顯示，貴州部分地區2015～2018年359例HCV患者基因型分布情況為：1a型0.56%，1b型38.72%，2a型4.74%，3a型16.71%，3b型19.22%，6a型18.38%，6n型1.67%，與楊興林等[4]報道的貴州地區2011年～2013年198例HCV患者基因型分布數據情況類似(1a型4%，1b型35.9%，2a型4.6%，3a型14.7%，3b型23.7%，6a型18.7%，6 d型0.5%)，提示近年來HCV 1b、3a、3b和6a型仍然是貴州地區HCV感染的主要基因型，4種基因型占HCV總感染人群的93%。但相比丁靜娟等報道的[5]貴州地區1996～1998年98例HCV患者基因型分布(1型74.5%，3a型1%，3b型4.1%，6a型10.2%)已有較大的變化，基因1型感染率明顯下降，基因3型和6型感染率大幅升高。

HCV基因型的分布在我國具有區域差異，東北地區、北方地區、中原地區以1型及2型分布為主，而南方邊境省份，近年以3、6型分布較為突出[6-7]。本次研究提示，近年貴州地區丙肝基因型分布中主要類型1b型(38.7%)，尤其在40歲以上HCV患者中1b型為主要感染基因型，3型和6型的感染率僅次于1b型(分別為35.9%、20.1 %)。我國自1993年開始對獻血者進行HCV-Ab嚴格篩查，使得通過血液途徑傳播HCV的可能性大大減少，或許可以解釋1b型在本研究中40歲以下年輕患者中比例明顯降低的原因。國內研究提示接壤東南亞地區的云南地區HCV感染者中基因3型和6型病毒株分布較為突出，并隨靜脈吸毒人群在周邊地區傳播[7]，而文獻[4]中提示貴州地區通過吸毒途徑感染HCV患者中基因3型和6型病毒株分布也比較突出，本次研究提示貴州地區21～39歲HCV患者中的主要感染型為3型及6型，這種表現可能與年輕患者中靜脈吸毒人群比例增多相關，有待進一步流行病學調查。

HCV基因分型對于丙型肝炎疾病轉歸和療效預測均具有重要意義，本研究提示目前貴州地區至少存在7種基因亞型丙肝病毒感染，包括1a型、1b型、2a型、3a型、3b型、6a型、6n型，其中6n型為貴州地區首次報道，提示貴州地區HCV感染毒株存在多樣性，但由于樣本來源的地域性差異及檢測方法的局限性，尚不能排除貴州地區還存在其他基因型及混合基因型感染的可能，有待進一步擴大樣本來源進行研究。