MAGE-D4在非小細胞肺癌組織中的表達及其意義

李曉英 方文△ 楊梅 游云 楊玉濤 葛正行 尹超 夏志鴻 張航

(1.貴州醫科大學檢驗學院，貴州 貴陽 550001；2.貴陽中醫學院第二附屬醫院，貴州 貴陽 550001；3.貴州醫科大學附屬腫瘤醫院，貴州 貴陽 550001；4.蘭州市第一人民醫院，甘肅 蘭州 730000)

目前肺癌的5年生存率約為15%，是全球最常見的癌癥相關致死疾病之一，非小細胞肺癌作為肺癌最常見的一種類型，約占所有肺癌發病率的80%[1-2]，積極探索尋找針對非小細胞肺癌的腫瘤標志物及治療作用靶點成為主要研究方向。黑色素瘤相關抗原MAGE-D4(Melanoma-associated antigen D4)作為MAGE家族中較新發現的一種新成員，目前其已在膠質母細胞瘤及腦膜瘤等部分腫瘤中發現處于高表達狀態，同時由于已發現MAGE基因能編碼部分抗原肽而激活免疫細胞使其殺傷腫瘤細胞，故MAGE部分成員成為理想的腫瘤治療靶點[3]。本次試驗希望通過對非小細胞肺癌中MAGE-D4的表達情況的研究能初步闡述非小細胞肺癌與MAGE-D4的發病關系，為MAGE-D4可能作為臨床治療的靶點提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1研究對象 30例非小細胞肺癌及其癌旁組織收集自貴州中醫藥大學第二附屬醫院，且所有病例均已由病理科專業醫師確診為非小細胞肺癌，并獲得患者的知情同意及院倫理委員會同意。

1.2主要儀器及試劑 普朗DNM-9606酶標分析儀(北京普朗新技術有限公司)；Human MAGED4-Ab ELISA試劑盒(武漢江萊生物科技有限公司，批號：)兔抗MAGE-D4抗體購自美國SANTA CRUZ公司；辣根過氧化物酶(HRP)標記的山羊抗鼠二抗購自北京中杉生物技術有限公司；免疫組化其他相關試劑購自北京中杉生物技術有限公司；其余試劑均為國產分析純。

1.3方法 酶聯免疫檢測法(ELISA)，免疫組織化學技術，具體測定方法嚴格按照試劑說明書進行。

2 結 果

2.1ELISA檢測非小細胞肺癌及癌旁組織中MAGE-D4的表達情況 ELISA結果顯示，非小細胞肺癌組中MAGE-D4(24.51±8.23) ng/mL的相對表達量與癌旁組織(1.33±0.31) ng/mL相比較，其在癌組織的表達水平顯著升高，差異具有統計學意義(P<0.01)。見圖1。

2.2免疫組化中非小細胞肺癌及癌旁組織中MAGE-D4的表達水平 免疫組化結果顯示，非小細胞肺癌中MAGE-D4呈現高表達狀態，與癌旁組織相比較，差異具有統計學意義(P<0.01)，見圖2。

3 討 論

肺癌作為當前全球影響人類健康的最危險的惡性腫瘤之一，受到了廣泛關注，且不斷探索在傳統手術治療的基礎上尋找新的靶向治療藥物，同時為了響應當前精準醫療的治療思想，尋找能早期發現的腫瘤標志物同樣具有積極的意義。目前黑色素瘤相關抗原MAGE-D4有報道與部分腫瘤的發生有一定聯系，但與肺癌的相關研究甚少，因此本次研究通過檢測非小細胞肺癌中MAGE-D4的表達情況初步闡明MAGE-D4與非小細胞肺癌的相互關系，結果證實MAGE-D4確實與非小細胞肺癌的發病有關。

MAGE是一個包含有眾多亞基的大家族，其中MAGE-D4最初被命名為MAGE-E1[4]，當前對MAGE-D4的研究更多的局限于mRNA水平，但也有部分報道其與食管癌、乳腺癌、肝癌及神經膠質瘤等相關腫瘤的增殖、遷移相關[5-7]。此外，據報道[8-9]，MAGE-D4的mRNA的比例小于蛋白質水平，分析認為這可能與mRNA轉錄后修飾、蛋白酶體降解等有關，但這一影響決定了在蛋白水平研究MAGE-D4的表達比在mRNA水平上研究要更準確，因此免疫組化及ELISA等蛋白研究技術也是被更多人所運用。研究[10]顯示，在非小細胞肺癌的鱗狀細胞癌中的MAGE-D4比腺癌表達稍高，MAGE-D4總體上是促進非小細胞肺癌的增殖，但其在遠期預后各階段的表達差異不明顯。這一結論與本次研究的結果基本一致，這也進一步說明MAGE-D4參與了非小細胞肺癌的發病過程。

由于本次研究只是一項初步的探索與驗證，未來還可以在條件允許的情況下增加病例數量，進一步探索完善MAGE-D4在非小細胞肺癌中的具體功能作用和相作用的生物活性分子，尋找其潛在的分子信號轉導機制，進一步完善并報道MAGE-D4與非小細胞肺癌的相互關系。

(本文圖1～2見封三)