不同分子亞型乳腺癌患者基質相互作用分子1表達水平的研究

金菊 丁小文 喬恩奇 張喜平*

目前，我國已成為乳腺癌發病率增長最快的國家之一［1］。美國癌癥統計研究報告，乳腺癌的發病率在女性惡性腫瘤中位居榜首［2］。乳腺癌的侵襲和轉移是一個由多因素調控的復雜、動態過程，但其作用機制尚不清楚。基質相互作用分子1（stim1）是一種鈣離子感受器，其可以刺激并激活Orai1分子，引起細胞外鈣離子流入，并且進一步誘發相應的細胞活動。stim1作為鈣離子調節感受器，對癌細胞的增殖、浸潤、轉移具有一定程度的促進作用，其與腫瘤細胞的侵襲、轉移具有直接關系。由于不同的乳腺癌亞型的分子調節機制有所不同，作者推測stim1在不同亞型乳腺癌中的表達量也會有所區別。本文通過分析不同分子亞型無淋巴結轉移的乳腺癌組織中stim1表達水平，探討其在乳腺癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑 stim1抗體購置于Thermo Fisher公司（美國，貨號CDN3H4），Western blot檢測試劑盒（貨號KGP1201）、全蛋白抽提試劑盒（KGA902）、SDSPAGE凝膠配制試劑盒（KGP113）購自江蘇凱基生物技術開發有限公司。

1.2 樣本來源 選擇2012年8月至2013年8本院腫瘤生物樣本庫中保存的經手術當天取材的無淋巴結轉移的三陰性、Her-2陽性、Luminal A型、Luminal B型乳腺癌組織各5例。其中Luminal B型中ER（陽性）、PR（陽性）、Ki 67高表達 2例、ER（陽性）、PR（陽性）、Her-2（陽性）3例。所有患者年齡33～68歲，平均50.3歲；上述患者均通過病理學檢測診斷為乳腺浸潤性導管癌，術前未進行放化療及內分泌治療。所有患者均實施相應的乳腺癌改良或保乳根治術，收集了上述患者的乳腺癌腫瘤組織樣本，并放置于樣本庫中低溫保存，術后隨訪時間截止到2018年12月底?？偵妫∣S）指隨訪截止日期的時間或隨訪中出現死亡的時間；無復發生存（RFS）指隨訪中出現首次復發轉移的時間。

1.3 方法 采用Western blot檢測stim1在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達水平，實驗方法如下：配制細胞裂解液、將制備的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，并在100℃處理5min，每孔加載100μg細胞總蛋白，進行電泳、轉膜、封閉，接著進行一抗雜交、洗膜和二抗雜交和顯影。

1.4 統計學方法 各組樣本stim1蛋白表達灰度分析采用單因素方差分析（one-way ANOVA），使用COX回歸分析，納入腫瘤的最大直徑、不同分子亞型、病理分期和stim1蛋白表達量為變量，分析這4個變量對患者OS和RFS的影響。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

Stim1蛋白表達水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌組織其次，Luminal A型乳腺癌組織最弱。與三陰性乳腺癌患者樣本相比，Her-2陽性乳腺癌組織中stim1蛋白表達有所降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）；Luminal A型患者乳腺癌組織與Luminal B型患者乳腺癌組織中stim1蛋白表達顯著降低（P＜0.01）。與Her-2陽性乳腺癌組織相比，Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達顯著降低（P＜0.01）。與Luminal A型乳腺癌組織相比，Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達雖然略有增加，但差異無統計學意義（P＞0.05）。不同分子亞型乳腺癌組織中腫瘤的最大直徑、病理分期和stim1蛋白表達量與OS和RFS無關，各指標差異無統計學意義（P＞0.05），見表 1，圖 1、2。

表1 不同分子亞型乳腺癌組織stim1表達水平

圖1 各組樣本stim1蛋白表達條帶圖

圖2 各組樣本stim1蛋白表達灰度分析

3 討論

鈣離子（Ca2+）調節不平衡可誘發乳腺癌，促進乳腺癌的進展。stim1/Orai1在雌激素受體陰性（ERα-）的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231中，對于SOCs和細胞遷移很重要。Orai3在雌激素受體陽性（ERα+）的人乳腺癌細胞MCF-7中，表達顯著增加，stim1和Orai3對SOCs的調控起主導作用。因此，stim1與Orai相互作用與乳腺癌細胞分型直接相關。內質網中Ca2+的減少導致stim1易位到質膜下點狀突起，并激活Orai 1通道。ERα+乳腺癌細胞系中的SOCE由stim1/2和Orai3介導，而ERα-乳腺癌細胞則是經典的stim1/Orai1途徑［3］。已發現stim1和Orai1在乳腺腫瘤細胞遷移和轉移起重要作用，Stims和Orais有望成為癌癥治療的新靶點。

已發現stim和orai蛋白在較多惡性腫瘤的發展和轉移中起著至關重要的作用，例如乳腺癌、前列腺癌等［4］。在多形性腦膠質母細胞瘤中，stim1和Orai1的下調導致入侵的腫瘤細胞顯著減少。相比之下，敲除stim1和Orai1基因對腦多形性膠質母細胞瘤細胞增殖幾乎無影響。這些結果表明，stim1和Orai1編碼SOCE和CRAC電流，并控制腦多形性膠質母細胞瘤細胞的侵襲［5］。一些研究人員發現肝細胞癌細胞系stim1表達升高，其在肝癌組織中的表達水平高于癌旁組織。有研究者提出stim1可作為檢測肝癌高轉移潛能的預后指標，stim1具有作為轉移性肝癌新的分子靶點的治療潛力［6］。

本資料顯示，stim1蛋白表達水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌次之，Luminal A型則最弱。Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達水平明顯低于三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌，而三陰性和Her-2陽性型乳腺癌又是預后最差的腫瘤。因此，作者認為stim1的表達水平與乳腺癌惡性程度有關，其在乳腺癌發病機制中的作用有待進一步闡明。