不同標(biāo)本及處理方式對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響

(南樂(lè)縣人民醫(yī)院，河南 濮陽(yáng) 457400)

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，輸血治療已成為臨床上常用的一種急救措施，輸血前需進(jìn)行供血者與受血者之間的交叉配血檢查，避免出現(xiàn)溶血反應(yīng)危及受血者生命[1]。目前臨床上常用的交叉配血檢查法是聚凝胺法(Manual polybrene test，MPT)[2]，準(zhǔn)確性高，但操作比較繁瑣。微柱凝膠法(Microcolum gel test，MGT)是上世紀(jì)90年代引入我國(guó)的一種新型交叉配血檢查法，與MPT相比，MGT具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但當(dāng)標(biāo)本處理方式不當(dāng)時(shí)MGT的假陽(yáng)性率高于MPT[3]。本研究旨在通過(guò)比較血樣抗凝與否以及紅細(xì)胞懸液濃度的高低對(duì)交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響，探究不同標(biāo)本及處理方式對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集南樂(lè)縣人民醫(yī)院收治的60例需要接受輸血治療患者，每例采集兩管2.5 mL血液，分別收集于EDTA-K2抗凝管(EDTA-K2抗凝組，60例)和普通促凝管(普通促凝組，60例)中，使用MPT法進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)血型與同型供血者相吻合；不完全抗凝血樣：收集于EDTA-K2抗凝管管中的出現(xiàn)凝塊的日常血常規(guī)檢查血樣(不完全抗凝組，30例)，使用MPT法進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)血型與同型供血者相吻合；供血者血樣：取樣管中留取血樣用生理鹽水配制成0.8%紅細(xì)胞懸液，分離血漿(離心3 000 r/min，3 min)。

1.2 方法

MGT基本操作方法：將受血者與供血者的血樣離心分離血清，進(jìn)一步離心分離紅細(xì)胞，分別將二者紅細(xì)胞配成0.8%生理鹽水懸液，將50μL受血者血清與50μL供血者紅細(xì)胞懸液混合加入主側(cè)凝膠管中，將50μL受血者紅細(xì)胞懸液與50μL供血者血清加入次側(cè)凝膠管中，加樣后的凝膠試劑卡(長(zhǎng)春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)S20150036)置于免疫微柱孵育器中37℃孵育15 min，孵育后的凝膠試劑卡使用血型血清學(xué)多用離心機(jī)(BYL型，長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限公司)離心(900 r/min，2 min)后再離心(1 500 r/min，3 min)。探究血樣抗凝與否對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響時(shí)，將EDTA-K2抗凝管中血樣、普通促凝管中血樣和不完全抗凝血樣作為受血者樣本使用MGT分別與供血者血樣進(jìn)行交叉配血，并比較3組樣品陽(yáng)性率；探究不同紅細(xì)胞懸液濃度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響時(shí)，將EDTA-K2抗凝管中血樣作為受血者血樣，且將受血者紅細(xì)胞懸液濃度用生理鹽水依次調(diào)整為0.5%、0.8%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%，使用MGT分別與供血者血樣進(jìn)行交叉配血，比較3組樣品陽(yáng)性率。

1.3 結(jié)果認(rèn)定

紅細(xì)胞完全沉降于凝膠管底部，表明未發(fā)生抗原抗體結(jié)合反應(yīng)，受血者與供血者血型相合；紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中存在紅細(xì)胞凝塊，表明發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，受血者與獻(xiàn)血者血型不相合。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件分析。其中計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血樣抗凝與否對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果比較

血樣抗凝與否影響微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)抗凝處理不完全時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性，普通促凝組陽(yáng)性率與EDTA-K2抗凝組陽(yáng)性率相比，普通促凝組陽(yáng)性率增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.52，P<0.05)，不完全抗凝組陽(yáng)性率與EDTA-K2抗凝組陽(yáng)性率相比，不完全抗凝組陽(yáng)性率增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.39，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 血樣抗凝與否對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果比較

2.2 不同紅細(xì)胞懸液濃度對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果比較

不同紅細(xì)胞懸液濃度對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響，當(dāng)紅細(xì)胞懸液濃度大于1%時(shí)出現(xiàn)高比例的假陽(yáng)性，與低濃度紅細(xì)胞懸液濃度陽(yáng)性率相比，1%紅細(xì)胞懸液假陽(yáng)性率較高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.18，P>0.05)，2%紅細(xì)胞懸液濃度假陽(yáng)性率高于低濃度紅細(xì)胞懸液濃度陽(yáng)性率，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=91.76，P<0.05)，濃度大于2%紅細(xì)胞懸液時(shí)出現(xiàn)完全假陽(yáng)性，陽(yáng)性率高于低濃度紅細(xì)胞懸液濃度陽(yáng)性率，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=120.00，P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同紅細(xì)胞懸液濃度對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果比較

3 討論

輸血治療是臨床上常用的一種急救措施，在輸血前必須進(jìn)行供血者與受血者之間的交叉配血檢查，確保輸血安全[5]，避免出現(xiàn)溶血反應(yīng)危及受血者性命。聚凝胺法是臨床上常用的交叉配血檢查法，微柱凝膠法是上世紀(jì)90年代引入我國(guó)的一種新型交叉配血檢查法方法，與聚凝胺法相比，微柱凝膠法靈敏度更高、操作更簡(jiǎn)便且重復(fù)性高，但微柱凝膠法對(duì)標(biāo)本的處理要求較高，當(dāng)標(biāo)本處理方式不當(dāng)時(shí)，較聚凝胺法更易出現(xiàn)假陽(yáng)性。為推廣微柱凝膠法在交叉配血檢查中的應(yīng)用，急需探究與微柱凝膠法相適用的標(biāo)本處理方式。本研究通過(guò)比較血樣抗凝與否以及紅細(xì)胞懸液濃度的高低對(duì)交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響，探究不同標(biāo)本及處理方式對(duì)微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)結(jié)果的影響。

本研究表明，血樣抗凝處理及紅細(xì)胞懸液濃度影響微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)的結(jié)果，當(dāng)血樣抗凝不完全及紅細(xì)胞懸液濃度大于1%時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果，與目前微柱凝膠卡式法應(yīng)用于交叉配血容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的現(xiàn)象一致。分析原因，微柱凝膠法的原理是控制凝膠孔隙大小只允許游離的紅細(xì)胞通過(guò)，當(dāng)受血者與供血者血型相合不發(fā)生抗原抗體反應(yīng)時(shí)，紅細(xì)胞能通過(guò)孔隙到達(dá)管底部，此時(shí)為陰性反應(yīng)，當(dāng)供血者血型不相合發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，多個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合在一起不能通過(guò)凝膠，沉積在凝膠之上和凝膠中，不能到達(dá)管底部，此時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)，當(dāng)抗凝處理不完全或者紅細(xì)胞懸液濃度過(guò)高時(shí)，紅細(xì)胞自身易黏結(jié)在一起，出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此血樣標(biāo)本抗凝處理不當(dāng)及紅細(xì)胞濃度過(guò)高時(shí)易造成微柱凝膠卡式法交叉配血試驗(yàn)出現(xiàn)假陽(yáng)性。本研究樣品量較小，且探究的影響因素較少，尚不能完全避免微柱凝膠卡式法在交叉配血試驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性，還需要進(jìn)一步探討其他可能引起假陽(yáng)性的因素。

綜上所述，在使用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血檢查，應(yīng)注意標(biāo)本的抗凝處理及控制紅細(xì)胞懸液濃度，盡量避免假陽(yáng)性的出現(xiàn)。