不同時(shí)間對(duì)新鮮冰凍血漿的質(zhì)量參數(shù)影響

(商丘市中心血站，河南 商丘 476100)

新鮮冰凍血漿(Fresh frozen plasma,FFP)是血液在采集后6～8 h內(nèi)分離，-50℃迅速冷凍，-30℃中保存1年，包含幾乎全部凝血因子(不穩(wěn)定因子FⅤ和FⅧ)，新鮮冰凍血漿主要包含免疫球蛋白、凝血因子及血漿蛋白，主要治療和預(yù)防出血性疾病、凝血性疾病及大量輸血導(dǎo)致的凝血功能障礙[1-3]。目前我國(guó)醫(yī)院尚未全面實(shí)行冷鏈箱，無(wú)法對(duì)血漿應(yīng)用全程監(jiān)控，血漿的不穩(wěn)定性及融化后不及時(shí)輸注嚴(yán)重影響臨床治療效果[4]。研究表明多袋血輸注時(shí)間多為190～330 min，無(wú)法證明所輸血液是否符合存放要求，超出時(shí)限的血液是否應(yīng)當(dāng)報(bào)廢，是目前無(wú)法解決的事情[5]。本研究收集100份輸血科發(fā)出的血漿，分析不同時(shí)間點(diǎn)的血漿凝血因子及凝血功能，旨在探索不同時(shí)間對(duì)新鮮冰凍血漿的質(zhì)量參數(shù)影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年12月～2017年6月100份輸血科發(fā)出的血漿，所有血漿均來(lái)源于中心血站采集的無(wú)償獻(xiàn)血者，并完全合格血漿。無(wú)償獻(xiàn)血者年齡選取18～22歲，采取3 300 g，15 min低溫離心，所有血漿均采用虹吸法制備，每份要求血站留取15～20 mL。-20℃保存。

1.2 方法

37℃血漿融化儀中融化100份新鮮冰凍血漿，融化后的冰凍血漿于超凈臺(tái)中，遵循無(wú)菌操作對(duì)其進(jìn)行分袋處理，共6袋，分別室溫下放置0 h、0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h，分別對(duì)應(yīng)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組A、實(shí)驗(yàn)組B、實(shí)驗(yàn)組C、實(shí)驗(yàn)組D、實(shí)驗(yàn)組E。因不同人血液成分基礎(chǔ)值有較大波動(dòng)，故以同一血漿標(biāo)本在室溫下放置0 h 為對(duì)照組，排除個(gè)體差異的干擾。實(shí)驗(yàn)中主要儀器及試劑血漿融化儀(NAI-XYJ，上海那艾精密儀器有限公司)，生物安全柜(1300 系列 II 級(jí) A2 型，賽默飛公司)，全自動(dòng)血凝儀(CS-2000，日本SYSMEX公司)，PC，ATⅢ，F(xiàn)Ⅴ和FⅧ凝血因子試劑盒等均由sigma公司生產(chǎn)。凝血因子FⅧ∶C、凝血因子FⅤ∶C、抗凝血酶( AT) 和蛋白C( PC) 均采用sigma公司生產(chǎn)試劑盒檢測(cè)，凝血酶原時(shí)間( PT) 、活化部分凝血活酶時(shí)間( APTT) 、纖維蛋白原( FIB)均采用全自動(dòng)凝血分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組凝血因子變化情況(見(jiàn)表1)

2.2 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組凝血功能變化

0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h后的PT、APTT、Fbg及INR與0 h比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組凝血因子變化情況

注：1)與對(duì)照組比較，P<0.05

表2 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組凝血功能變化

3 討論

新鮮冰凍血漿是目前醫(yī)院常見(jiàn)的血液成分，主要治療和預(yù)防出血性、凝血性疾病或大量輸血導(dǎo)致的凝血功能障礙，同時(shí)也有利于提高患者的血漿蛋白水平[6]。《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》指出37℃水浴后的新鮮冰凍血漿應(yīng)當(dāng)最多在室溫放置2h輸注，即使不能2h之內(nèi)輸注應(yīng)當(dāng)?shù)蜏?2～6℃)保存24h之內(nèi)。但冷鏈箱無(wú)法在臨床普及，因此臨床科室執(zhí)行具有一定的困難。目前，室溫放置時(shí)間對(duì)新鮮血漿質(zhì)量的影響尚無(wú)權(quán)威研究[7]。凝血酶原時(shí)間( PT) 是外源性凝血系統(tǒng)篩選試驗(yàn)，主要反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ，Ⅶ、Ⅹ和纖維蛋白原的功能與水平，活化部分凝血活酶時(shí)間( APTT)是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)篩選試驗(yàn)，主要反映凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ功能與水平，纖維蛋白原( FIB)是凝血過(guò)程中主要蛋白質(zhì)，以上指標(biāo)均能夠反映血漿凝血功能。凝血因子Ⅴ為不穩(wěn)定因子，容易降解，凝血因子Ⅶ和Ⅷ在不同時(shí)段制備差別較大，半衰期為8～12 h，隨著融化后時(shí)間的延長(zhǎng)將不斷下降，直至完全失去活性[7]。

本研究顯示，PT、APTT、Fbg及INR在0.5 h、2 h、4 h、8 h、12 h均與0 h差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PT為外源性凝血系統(tǒng)，主要反映Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ等凝血因子，12h之內(nèi)無(wú)變化。表明外源性凝血因子多為穩(wěn)定因子。Fbg可能是特殊的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)導(dǎo)致12 h之內(nèi)無(wú)變化。但APTT隨時(shí)間的變化與陳敬銀等[8]報(bào)道的不一致，可能原因分析為本研究所有100例血漿均為未經(jīng)濾白全血虹吸法制備的。國(guó)外學(xué)者[9]報(bào)導(dǎo)全慮白全血制備血漿與非慮白全血制備血漿相比較，能夠減弱止血功能的細(xì)胞微粒。

凝血因子Ⅴ和Ⅷ均為不穩(wěn)定因子，體外時(shí)間越長(zhǎng)活性降低越多。本研究發(fā)現(xiàn)，放置8h后凝血因子Ⅷ明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，可能與半衰期具有一定的關(guān)系。與陳敬銀[8]報(bào)道較為一致。本研究還檢測(cè)了37℃水浴后的新鮮冰凍血漿的AT和PC活性，超過(guò)8 h的AT和PC活性明顯降低。輸注新鮮冰凍血漿不僅能夠增加促凝因子，還增加抗凝血因子，輸注新鮮冰凍血漿不僅僅只有止血功能。國(guó)外研究報(bào)道，全血采集后24 h后分離血漿檢測(cè)生物學(xué)效價(jià)與8 h分離血漿的凝血因子Ⅷ略有下降，其他成分(PC、PS及AT)無(wú)變化，但與本研究中放置12 h的AT、PC、FⅧ∶C 下降的結(jié)果不一致，可能與解凍過(guò)程相關(guān)。

綜上所述，37℃水浴后的新鮮冰凍血漿放置8 h后AT、PC等抗凝成分和FⅧ∶C促凝成分均減少，APTT、PT、INR、Fbg甚至放置12 h之內(nèi)基本無(wú)變化。