利用紅外光譜法快速測定血竭中摻假松香的含量

廖嘉寶 張 鵬 譚 沛 王麗麗

華潤三九醫藥股份有限公司 廣東 深圳 515110

血竭市價昂貴，多有摻假情況，其中松香摻假是不法商家慣用手法。目前《中國藥典》2015年版中，血竭質量標準中對松香的檢測方法，其判斷標準為石油醚層不得顯綠色，但不法商家加入染料，對實驗結果造成干擾，無法正確判斷真偽，所以該方法有不合理之處。運用紅外光譜對血竭進行分析，紅外輻射通過固體中藥樣品時，將在不同波長處出現它們各自特有的吸收峰（帶）強度的疊加，以波長或波數為橫坐標，透過率或吸光度為縱坐標繪圖，得到樣品的特征吸收曲線為紅外吸收光譜。以光譜的宏觀形貌以及吸收峰的位置、強度和形狀微觀指紋來定性判斷或鑒別樣品之用。

1 實驗部分

1.1 儀器設備：Spectrum 100光譜儀（PerkinElmer,Inc.），DTGS檢測器，儀器分辨率優于4cm-1,基線噪聲6000：1～2000：1，波數范圍 4000～400cm-1，基線傾斜0.1%T～0.5%T，透過率準確度0.1%T，透過率重復性0.1%T～0.5%T，吸光度重復性＜0.005。

1.2 樣品來源：血竭粉購于北京同仁堂（亳州）飲片有限責任公司，按2015年版《中國藥典》鑒定。松香購于亳州藥材市場，光譜純溴化鉀（KBr）購于四川自貢化工研究設計院。飲片血竭a、b、c分別購于深圳三家連鎖藥店、顆粒g為某廠家批號為403481T的血竭粉配方顆粒、顆粒f為某廠家批號為1210097的血竭粉配方顆粒。

1.3 樣品制備：血竭及松香粉碎后過200目（74μm）篩，備用。精密稱取血竭樣品粉末和松香樣品粉末，制備出 含 有 0.00%，10.00%，20.00%，30.00%，40.00%，50.00%，60.00%（質量百分比）松香的血竭（血竭+松香）樣品系列，備用。

取3mg的待測樣品與150mg的KBr碎晶置于瑪瑙研缽中，磨細，并使其混合均勻。將研細混勻的粉末傾入13mm壓片模具中，使其鋪布均勻，加壓至0.8～1GPa，保持1min，使用壓片機將其壓成圓形薄片，然后放入紅外光譜儀樣品支架進行測試。在掃描待測樣品前，先用純KBr按前述方法壓制成薄片，按照與掃描待測樣品相同的參數設置方式進行測試，得到光譜背景。接下來掃描待測樣品的光譜時，儀器會自動進行背景扣除，得到待測樣品的真實光譜。

2 結果

2.1 血竭飲片和摻偽松香的鑒別：由血竭的紅外光譜圖［圖1（a）］可以看出，主要的吸收峰有：3329±2cm-1、2932±2cm-1、2850±2cm-1、1710±2cm-1、1605±2cm-1、1499±2cm-1、1451±2cm-1、1355±2cm-1、1268±2cm-1、1199±2cm-1、1176±2cm-1、1112±2cm-1、821±2cm-1、761±2cm-1和699±2cm-1。松香的紅外光譜圖［圖1（b）］可以看出，主要的吸收峰有：2930±2cm-1、2867±2 cm-1、2650±2cm-1、2533±2cm-1、1693±2cm-1、1459±2cm-1、1385±2cm-1、1275±2cm-1、1183±2cm-1、1153±2 cm-1、947±2cm-1、896±2cm-1、830±2cm-1、715±2cm-1、664±2cm-1和543±2cm-1。

2.2 含量分析：這里特指中藥血竭中摻松香的分析。分析時應謹慎選取血竭中某一個特征峰的強度以及松香中的某一個特征峰的強度為依據，利用這兩個特征峰的相對強度可從預先做好的工作曲線得到含量的結果。譜峰強度和兩特征峰的相對強度按基線法確定峰強度，相對峰強度法計算相對強度。

2.2.1 基線法確定峰強度：從待測樣品的紅外吸收光譜，所選擇的特征譜帶（見圖2）波長d的譜強度。在譜帶的兩端畫一切線(被稱為基線)ac。計算分析波長d處的總吸光度為A，扣除基線以下噪聲背景得譜峰的吸光度為A1。常以A1定義為譜峰的吸收強度。

圖2 基線法畫法舉例

2.2.2 相對峰強度法：中藥樣品的相對峰強度計算法是指在同一張紅外光譜圖上選擇兩個特征峰，b1和b2，如圖3所示分別讀取兩個峰的峰強度A11,A21。按下式計算這兩個峰的強度比r。rb1/b2=A11/A21或rb2/b1=A21/A11。

圖3 相對峰強度法畫法舉例

2.3 血竭藥材中摻松香含量分析：分述如下。

2.3.1 工作曲線的繪制：確定血竭的主峰為1112cm-1［見圖4（a）］，而松香的主峰為1693cm-1［見圖4（h）］。由圖可見，隨著松香含量的增多，血竭主峰的相對強度逐漸下降而松香的主峰逐漸升高。按照基線法分別測得1112cm-1和1693cm-1處譜帶的峰高吸光度值A1和A2，再求出這兩個譜帶的相對峰強比的值y（A1112/A1693）（見表1），經最小二乘法擬合得到相對峰強比與松香百分含量x的線性方程：y=0.0076x+0.2202，R2=0.9270。在相同實驗條件下測量未知試樣的紅外光譜，確定相應兩峰的強度及計算相對峰強度比，利用該工作曲線可確定未知的血竭藥材中摻松香的含量。

圖4 血竭中摻不同比例松香的紅外光譜圖

2.3.2 樣品檢測：對數批血竭配方顆粒及飲片進行紅外光譜掃描，根據血竭及松香的特征峰判斷是否有松香摻假現象，結果見圖5。由圖譜結果看，b、c、f、g均檢出松香特征峰，其中藥店購得血竭b和c與松香圖譜相似度極高，松香特征峰明顯，可見b、c兩批藥材是以大量松香充作血竭，血竭配方顆粒f、g摻有不同比例的松香，經峰強度計算可計算摻假比例分別為＜10%和23%。a藥材未檢出有松香。

3 討論

采用紅外光譜對血竭進行分析，不但可以鑒別是否摻雜松香，并且能通過某些特征譜帶或特征峰的相對強度來確定樣品中松香酸作半定量分析。經檢測的血竭藥材及配方顆粒紅外圖譜顯示，目前血竭藥材資源混亂，5批藥材和配方顆粒中有4批有松香摻假情況，其中b、c兩批藥材摻假比例頗高，但依然在連鎖藥店中銷售，可見質控水平急需提高，否則危害消費者的健康。目前所建立檢測松香較為準確的方法多為HPLC、HPLC-DAD法等方法，但這些方法從時效、環保角度看并無優勢，而紅外光譜分析操作快速、簡便，重現性好，所用試劑環保，可對樣品作半定量分析，能滿足快速檢測血竭中摻假松香的需求。