沉降菌監測碟暴露時間及沉降菌監測數據報告問題

張爽 龐月

[摘要]針對潔凈區動態沉降菌監測，A級區以平均值報告這個區域的監測結果。但任何一個監測碟中發現微生物都應該調查原因;對90mm平皿TSA培養基，在標準條件下考察了暴露120min、240min的失水率，結果表明，在標準條件下，暴露120min的90mm平皿TSA培養基能保證各實驗菌種培養霉要。

[關鍵詞]沉降菌;放置時間;失永率

[中圖分類號]TQ460.8 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）06-0296-01

《中國藥典》2015年版四部通則1100中要求無菌檢查的試驗環境必須達到無菌檢查的要求。日常檢驗需要對試驗環境沉降菌進行監控?！吨袊幍洹?015年版指導原則9205藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則中表4注：各潔凈級別環境微生物監測的動態標準的注解要求表中各數值均為平均值，根據EUGMP和FDA指南，A級潔凈區空氣氣流形式是層流，監測碟的結果直接反映垂直上方的空氣質量。所以A級區應該在原始記錄體現每個監控碟的原始結果，最后以平均值報告這個區域的監測結果。但任何一個監測碟中發現微生物都應該調查原因。

《藥品生產質量管理規范（2010年修訂版）》中規定動態沉降菌監測時間為4h，但單個培養皿暴露時間可以小于4h。中國藥典2015年版指導原則9205藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則中也規定單個沉降碟的暴露時間可以少于4小時。培養基適用性試驗合格的沉降菌試驗用培養基在監測時有三個關鍵點：培養基回收率、培養基含水量、培養基放置時間。我們知道一定條件下回收率和含水量呈正比關系，而含水量與培養基放置時間呈反比關系。

1沉降菌監測（培養基放置）時間確定原則

1.1潔凈區環境（風速、溫度及相對濕度）

無菌檢查所在區域為A級潔凈區，A級潔凈區風速為0.36-0.54m/s，溫度一般控制在18-26℃，相對濕度在45%-65%。我們未挑戰極限條件，選擇標準條件：溫度24℃，相對濕度55%，風速0.45.m/s。

1.2培養基的選擇

中國藥典2015年版規定：如果培養基不能終端滅菌，在使用前應進行100%的預培養。所以我們沉降菌監測時，使用的為用外購培養基干粉自制90mm平皿培養基，培養基為TSA，灌注量為20ml。市售培養基很多，我們選擇一個品牌培養基干粉，自制平皿培養基預培養后進行試驗。

2試驗材料

2.1材料

TSA培養基（批號：160322北京陸橋技術有限責任公司）、溫濕度記錄儀、萬分之一電子天平、刻度吸管等。

2.2失水率測定方法

在沉降菌監測時，培養基暴露于空氣中，水分不斷蒸發流失。沉降菌監測培養基必須維持足夠水分，培養基水分低于一定限度，回收率無法實現。為了考察暴露時間與失水率的關系，對暴露不同時間的沉降碟測量重量變化情況，以估計其失水率情況。

在A級區域送風風速調節0.45.m/s，待風速和溫濕度平衡。將90mm自制平皿培養基，共4塊，測定前用精確到0.01g的電子天平分別稱重，后均勻鋪設在層流下方操作臺表面，打開各個碟蓋，按沉降菌監測方法操作，開始計時。分別在第120分鐘、240分鐘將沉降碟各取出2塊，加蓋，用精確到0.01g的電子天平稱重，后將各沉降碟培養基挖出，用精確到0.01g的電子天平稱重，計算不同暴露時間的沉降碟的失水率。

3失水率測定結果

試驗溫度24℃，相對濕度55%，暴露120min失水率達到9.76%，在暴露240min時失水率超過30%達到33.99%。

4本試驗考察了沉降菌檢測試驗過程中。某品牌培養基自制平皿培養基失水率與暴露時間的關系。

本試驗采用的環境為模擬標準條件，暴露120min培養基失水近10%，能夠滿足沉降菌培養的需要?？紤]失水率還與培養基品牌，溫濕度，風速等條件有關，每2h以內更換動態沉降菌監測培養皿能夠滿足環境監測需要。以平均值報告A級區域的監測結果。但任何一個監測碟中發現微生物都應該調查原因。