雞肉組織中四環素類藥物殘留檢測方法

張智

摘要：科學使用獸藥能有效防范動物疫情，確保動物健康生長，但不合理地使用獸藥和飼料添加劑，會導致藥物殘留，影響畜產品的質量安全。該文論述了雞肉組織中四環素類抗生素藥物殘留檢測技術，以進一步提高抗生素殘留檢測質量。

關鍵詞：雞肉;四環素;藥物殘留;檢測技術

中圖分類號：S859.84

文獻標識碼：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.11.048

引言

抗生素在禽類動物養殖中使用十分普遍，但是抗生素不合理使用，也是導致畜禽制品中抗生素殘留超標的主要原因，在某些地區濫用抗生素已成為制約養殖業健康發展的主要問題。四環素類抗生素在禽類動物養殖中已廣泛應用，但很多養殖戶，尤其是中小規模養殖戶，不注重合理使用藥物，普遍存在濫用藥物現象，導致過量的抗生素在肉雞體內聚集，損害肝臟組織，使致病原對多種抗生素的抵抗能力增強，抗生素在肌肉組織中殘留量也不斷增加，對消費者身心健康造成巨大威脅。

微生物檢測法

雞肉組織中四環素類抗生素藥物殘留檢測方法應用最早是微生物檢測法，其工作原理是根據抗生素對某些微生物正常生長機能代謝具有抑制作用判定檢測樣品中微生物藥物殘留。經常使用到的微生物檢測方法，包括紙片法、抑制法。紙片法主要是利用某些能對致病菌繁殖產生抑制作用的物質，通過抑制致病菌生長，在紙片上能形成明顯的抑菌罔，以此判定肌肉組織中是否存在四環素殘留。抑制法主要是利用某種益生菌的副產物能與某些化學物質產生反應，檢測肌肉組織中是否存在四環素殘留。該項技術主要會應用到嗜熱鏈球菌、l，2，3，5一氯化三苯四氮唑，嗜熱鏈球菌體內會產生一種叫琥珀酸脫氫酶的物質，這種物質和1，2，3，5一氯化三苯四氮唑相互作用能形成一種紅色的代謝產物，以此證明肌肉組織中是否存在四環素殘留，抑制法最早應用于乳汁抗生素殘留檢測[1]。

薄層色譜法

在對雞肌肉組織中是否存在四環素進行初步篩選中應用該種檢測方法。該種檢測方法的一個顯著特點是操作簡便，出結果快，可實現對多個樣本的同一個批次檢測，能在有限的時間內對大量樣本進行處理。在應用中涉及到的化學試劑相對較少，更不需要復雜昂貴的器械投入，能在現場開展抗生素殘留檢測。但是在樣品檢測前仍然需要對樣品進行復雜的處理，并且該種方法的靈敏度不高，不能對組織進行定量檢測，重復效果較差。另外，在對樣本進行處理過程中，需要使用到的儀器和設備較多，需要使用紫外檢測器或者串聯熒光檢測器進行檢測。該種方法常用于雞肉組織中四環素類抗生素藥物殘留初步篩選檢測。

分光度檢測法

分光度檢測法主要是利用四環素具有一定吸光度的特點，在特定的紫外線區域內會表現出一定的吸光反應，以此檢測組織樣本中是否存在四環素殘留。利用四環素類抗生素與某些金屬離子產生一系列復雜的絡合反應后產生沉淀物，然后再利用四環素的吸收光譜發生變化情況，進行定量測定。分光光度檢測法主要包括紫外光譜檢測法和熒光一紫外結合分光度檢測法[2]。

3.1 紫外光譜檢測法

紫外光譜檢測法具有操作簡單、結果快速、操作簡便、設備簡單、成本投入較低的特點，在組織快速檢測中具有十分廣泛的應用。在組織檢測前，需要采取一定的技術手段，將肌肉中的蛋白質去除，然后測定吸光度大小，根據得到的曲線范圍，判定組織樣本中是否存在四環素殘留。該種檢測方法與國際上通用的抑制法相比，檢測限度更低，靈敏性更強。

3.2 熒光一紫外結合分光度檢測法

熒光一紫外結合分光度檢測法是將紫外光譜法和熒光分光度檢測法有效結合，這2種方法有效結合，使操作更加方便，分析精確度更高，但是整個檢測結果的靈敏度不是很高。熒光法具有很高的靈敏度，但四環素類抗生素屬于弱熒光物質，通常不能在熒光分度計上直接得到檢測結果。而通過將熒光檢測法和紫外線光譜檢測法有效結合，能實現在熒光劑上直接檢測四環素類抗生素的殘留情況，測得四環素類抗生素的現象范圍為0.10-9.00μg/mL。此外，測定四環素類抗生素還有溴化十六烷基三甲基胺熒光法，其檢測下限史低，靈敏性更強，檢測的現象范圍通常為0.01-12.0μg/mL。該種檢測技術除在雞肉組織中應用外，在測定牛奶中四環素類抗生素殘留，也具有很好的應用效果。

高效液相色譜法

高效液相色譜法是在高壓環境下流動相的驅動，使樣品通過高性能層析柱，然后將樣品中的抗生素進行高效分離。該種檢測方法通常需要有高性能的檢測設備和先進的操作系統，成本投入較高，但靈敏性較好，自動化程度較高，結果重復性好。高效液相色譜法已成為目前雞肉組織中四環素類抗生素藥物殘留應用最為廣泛的一種檢測技術，其應用范圍更廣，除應用在雞肉組織中外，還會用到牛奶，其他動物組織類四環素檢測。其中應用較為廣泛的檢測方法主要包括高效液相結合化學方法、高效液相一質譜聯用法。

4.1 高效液相結合化學發光法

化學發光分析法具有靈敏度高，線性范圍廣，儀器沒備簡單，成本投入低的特點，通過將該種方法和高效液相色譜法有效結合，能有效發揮高效液相色譜具有高效分離的特性，使化學發光分析法成為一種有效的痕量和超痕量分析技術。該種方法常用于四環素類抗生素中的四環素、土霉素、金霉素、多西環素的檢測，這種抗生素的檢出限度為0.002-0.008μg/mL。

4.2 高效液相一質譜聯用法

高效液相色譜法的顯著優勢能分離檢測樣本中的抗生素，它能為某些混合物的抗生素分離提供有效的選擇，但是難以得到物質的結構信息，在檢測中主要依靠與標準誤對比判斷殘留物。而質譜檢測法能提供物質的結構信息，具有樣品使用量少、檢測精確度高的特點，但是在進行樣品分析中，需要進行純化處理，具有一定純度后，才能進行直接分析。通過將高效液相色譜法和質譜法有效聯合，發揮2種方法各自特點，目前該種方法已廣泛應用于禽類、豬肉、牛奶等畜禽組織樣本的四環素類抗生素藥物殘留檢測[3]。

結束語

為有效保障人類生命財產健康，促進養殖產業健康發展，應引導養殖戶科學使用抗生素，正確認識抗生素的用途和危害，同時相關檢疫人員和衛生監督人員還應進一步加強抗生素類藥物殘留檢測，規范養殖戶養殖行為，確保合理使用抗生素。

參考文獻

[l]沈虎琴，檀華蓉，祁克宗，等齋禽糞便中的氟喹諾酮類與四環素類獸藥殘留同時提取的方法研究[J].分析測試學報，2012（3）：45-48.

[2]劉軍，劉清，劉鈺，等.牛乳中四環素類獸藥殘留量的監測調查[J].甘肅科技縱橫，2002（5）：56.

[3]范志影，劉慶生，石冬冬，等.液相色譜一串聯質譜法同時測定生鮮乳中四環素類和p一內酰胺類藥物殘留[J]。中國畜牧雜志，2013（9）：45-47.