纈沙坦中N-二甲基亞硝胺的高效液相色譜法檢查方法

范婷婷 張曉棟

[摘要]目的：采用高效液相色譜（HPLC）法測定纈沙坦中N-二甲基亞硝胺含量。方法：以20%甲醇為溶劑，采用SHISEIDO C18型色譜柱，以甲醇與水作為流動相梯度洗脫，在228nm檢測波長下進行測試，檢測限為0.001ug/mL，定量限為0.003ug/mL，進樣精密度為0.3%（n=6）。結果：NDMA對照品溶液質量濃度在0.003～1ug/mL范圍內時，測試結果的線性關系良好，相關系數為1，相對標準偏差為0.2%;NDMA試樣的加樣回收率為951%（n=3），相對標準偏差為0.1%：本對照品溶液在12小時內穩定。結論：該方法試樣前處理簡單，準確度和精密度較高，普適性好。

[關鍵詞]高效液相色譜法;纈沙坦N-二甲基亞硝胺;含量測定

[中圖分類號]R927.2：0657.72 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）21-0016-02

N-二甲基亞硝胺（NDMA），一種可能致癌的雜質，能引起DNA損傷，在老鼠試驗過程中，肝損傷導致肝癌;在2017年10月2日世界衛生組織國際癌癥研究機構公布的致癌物清單中屬于2A類致癌物。NDMA一般有兩種產生途徑：（1）二甲胺遇到亞硝酸發生亞硝化;（2）溶劑DMF發生光氧化，產生NDMA;NDMA最早報道在1978年德文雜志Archivder Pharmazie（Weinheim，Germany）中，已經關注氯丙嗪中NDMA的檢出和監測;在異丙托溴銨吸入劑中，NDMA在浸出劑中檢出;在水體的影響下，含胺基團的API容易產生NDMA;也有報道探討了雷尼替丁API產生NDMA的機理，并用LC-MS的方法檢測;pH對雷尼替丁與舒馬曲坦原料藥產生NDMA也有影響;用納濾的方法除去含胺基的API中產生的NDMA。

1實驗部分

1.1儀器與試劑儀器：島津LC-20AD高效液相色譜儀，配有SPD-M30A高靈敏度檢測器;XP205電子天平（Mettler-Tdedo公司）

試劑：甲醇（色譜純，賽默飛公司）;超純水（Milli-Q制備）;NDMA對照品Lot：169964ME來源：Dr.EhrenstorferGmbH;DMF（色譜純，賽默飛公司）

色譜條件：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，粒徑5um，柱徑：4.6mm，柱長250mm。

流速1.0mL/min，柱溫30℃。檢測波長為228nm。進樣量20pL。

系統適用性試驗溶液配制方法：分別取N-二甲基亞硝胺和N，N-二甲基甲酰胺各適量，加甲醇溶解并定量稀釋成每lmL中約含N-二甲基亞硝胺0.03pg和N，N-二甲基甲酰胺0.1ug。

標準溶液配制方法：精密量取N-亞硝基二甲胺200pL（100ng/ul），置20mL量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻（1ug/mL）;分別精密量取3.0mL、3.0mL、1.0mL，分別置10mL、100mL、100mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL;精密量取0.03ug/mL的溶液2.0mL、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得0.006ug/mL、0.003ug/mL的溶液。

2結果與討論

2.1流動相的選擇分別考察了以甲醇一水（10：901～（50：50）為流動相的分離效果。結果表明，當采用甲醇一水（20：80）作為流動相時，DMF與NDMA都有較好的分離效果與峰形，分離度為1.6，可以有效分離，系統適用性試驗溶液見下圖。后期采用100%甲醇洗脫時可將纈沙坦全部洗脫。

2.2線性將濃度為0.3ug/mL、0.03ug/mL、0.01ug/mL、0.006ug/mL、0.003ug/mL的標準溶液，在選定的液相條件下進樣測定，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行線性回歸計算，得到濃度一峰面積線性關系曲線，NDMA的峰面積與濃度的回歸線性方程為y=929172x-759.51（R=1）可見線性良好，可進行定量計算。

2.3檢測方法的精密度、準確度、檢出限精密度：對濃度分別為0.01ug/mL、0.03ug/mL和0.1ug/mL的NDMA重復測定6次，根據數據結果，計算相對標準偏差。考察分析方法的精密度，見表1。結果表明，所有濃度梯度的相對標準偏差≤0.6%。滿足定量計算要求。

精密稱取未檢出NDMA的陰性樣品200mg，分別加人0.03ug/mL濃度的NDMA標準溶液1.6mL（0.24ppm）、2mL（0.30ppm）和2.4mL（0.36ppm）各三份，在相同的操作條件下定量分析并計算樣品的回收率（見表2），范圍為96.1%～97.6%，表明所建立的分析方法得到的測定結果準確，可靠。

將一定濃度的NDMA標準溶液逐級稀釋并測定，當信噪比等于3時，得到該標準物質的檢出限（LOD）為0.01ppm;當信噪比等于10時，得到該標準溶液的定量限（LOQ）為0.03ppm。

2.4溶液的穩定性本品的對照品溶液在12小時內穩定。

3結論

綜上所述，本方法簡便、準確，可用于纈沙坦中NDMA的定量測定。